Adjidé C.C., Segard C., Desjonquères Q., Hirsch M.P. Rossy D., Fave M.H., Brissaud C., Sylvain K., Trouillet L. Duverlie G., Ganry O.

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1 Un nouvel outil pour mieux évaluer le risque viral environnemental : Qualification du biocollecteur Coriolis µ pour la récupération et l'identification des virus dans l'air Adjidé C.C., Segard C., Desjonquères Q., Hirsch M.P. Rossy D., Fave M.H., Brissaud C., Sylvain K., Trouillet L. Duverlie G., Ganry O. CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

2 Sommaire 1. Introduction 2. Matériel & méthode 3. Résultat 4. Discussion 5. Conclusions 6. Perspectives CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

3 Introduction Évaluer le risque viral environnemental associé aux soins méthodes actuelles non adaptées à cette problématique Peu de données sur le contenu de l air en virus pourtant incriminés dans 25-30% des infections nosocomiales (pic hivernal) Qualification d un biocollecteur capable de collecter des virus dans l air : validation sur VRS Le VRS résiste 30 min sur la peau, 6 h sur surface inerte Dose infectante : 100 à 600 particules virales Durée de contagiosité varie avec l âge du patient et statut immunitaire CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

4 Objectif de l étude Évaluer la capacité d un biocollecteur à recueillir et à concentrer les particules virales de l air dans un liquide et à permettre leur mise en évidence par des analyses par PCR Meilleure évaluation de la biocontamination d origine virale à l aide d une autre méthode que la culture cellulaire Biocollecteur Coriolis µ CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

5 Étude préliminaire prélèvements dans l entourage de 4 enfants VRS positifs Distance : 1 m, enfant au repos Volume d air = 3 m 3 Volume liquide = 15 ml Hanks Prise d échantillon pour PCR = 200 µl de l homogénat Analyse en PCR classique 0 résultat positif Axes d amélioration = prélèvements d air = méthode d analyse CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

6 Matériel et méthode Lieu et conditions Décembre 2007 et janvier à 2 prélèvements par chambre (répété 2 fois) Pédiatrie cardio-pneumologie, chambres d enfants VRS + Pendant et après la kinésithérapie Prélèvements d air biocollecteur Coriolis µ, (Bertin Technologies ) basé sur une technologie cyclonique débit 300 l/min 10 min 15 ml de liquide de Hanks CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

7 Matériel et méthode - suite Échantillons Conservés à -80 C en attendant d être traités Concentrés à l aide de filtres (Millipore ) après décongélation Extraction des ARN VRS sur EZ1 (Qiagen ) à partir de 200µl de concentrat Deux techniques de PCR qualitative PCR classique + révélation gel (Kit Qiagen one-step RT-PCR) PCR en temps réel (Kit VRS Cepheid sur SMART CYCLER ) Résultat positif si signal observé < à 45 CT douteux si signal observé mais > à 45 CT négatif si la courbe est plate CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

8 Prélèvements d air réalisés Nb prélèvements Nb patients 4 14 Ages <1 an moy. = 4 mois (57% <3 mois tous <1 an) Période de kiné per (18 avec toux franche) Distance appareil enfant post sans cm cm cm - 8 CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

9 Prélèvements d air analysés Nb prélèvements Nb analyses 6 37 Période de kiné per post Distance appareil enfant sans cm cm cm - 8 CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

10 Résultats 7 prélèvements non analysés : doublons 6 prélèvements exclus après analyse : - patient VRS négatif - délai de prélèvement > 5 j 31 prélèvements analysés et interprétés 6 échantillons positifs ou douteux (= un signal) 12 enfants inclus 3 enfants positifs ou douteux CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

11 Discussion : délai de prélèvement Délai entre diagnostic virologique et prélèvement d air RT PCR VRS air Positif ou douteux négatif 12 h h 5 72 h 0 Total 6 25 CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

12 Discussion : distance patient-prélèvement Distance entre l enfant et le prélèvement d air Positif ou douteux RT PCR VRS négatif Total échantillons 100 cm cm cm Total CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

13 Conclusion Capacité du biocollecteur à collecter les virus aéroportés confirmée Méthode RT PCR en temps réel plus adaptée dans le cas de faibles concentrations Étape de concentration des échantillons cruciale Importance des prélèvements au plus tôt / proche du patient / pendant kinésithérapie CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

14 Perspectives Nécessité de mener de nouvelles campagnes de manière à avoir plus de données et optimiser les étapes analytiques Nécessité de travailler sur d autres virus «à risque» avec des amorces spécifiques ou multiplex Améliorer la maîtrise de la contamination de l air par les particules virales et mieux maîtriser le risque lié et leur dissémination CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

15 Merci à tous Contacts : crespin.adjide@chu-amiens.fr segard.christine@chu-amiens.fr CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin

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