La voie de l autophagie est altérée in vivo, dans le foie de malades atteints

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1 La voie de l autophagie est altérée in vivo, dans le foie de malades atteints d hépatite C Pierre-Emmanuel RAUTOU, Dominique CAZALS-HATEM, Gérard FELDMANN, Tarik ASSELAH, Alain GRODET, Abdel MANSOURI, Sylvie MOSNIER, Didier LEBREC, Pierre BEDOSSA, Patrick MARCELLIN, Dominique VALLA, Richard MOREAU

2 L autophagie Jeûne Dénutrition Techniques de référence = 1) ME autophagosomes Baehrecke Nat Rev Mol Cell Biol 2005

3 L autophagie Techniques de référence = 2) Western blot LC3

4 Autophagie et infection virale Élimine virus des cellules hôtes Adressage des antigènes pour la présentation associée au CMH-II Virus détournent la machinerie de l autophagie pour leur propre réplication Mizushima, Nature, 2008 Orvedah, Cell Death and Differentiation, 2009

5 Autophagie et hépatite C Cellules Huh-7 - VHC VHC Accumulation d autophagosomes + réplication virale Sir, Hepatology 2008 Sir, Autophagy 2008

6 Buts de l étude Evaluation de la voie de l autophagie dans le foie de malades ayant une hépatite C chronique et comparaison à des témoins

7 Méthode Données cliniques biologiques le jour de la biopsie hépatique Analyse histologique Analyse quantitative par microscopie électronique Western blot LC3

8 Malades Patients VHC+ médiane (extrêmes) (n=33) Sexe (hommes) 23 (70%) 23 pour ME 10 pour WB Âge (ans) 47 (20-74) Index de masse corporelle (kg/m²) 23,9 (17,3-36,4) ALAT (xn) 1,9 (0,6-8,4) γ-gt (xn) 1,5 (0,2-5,1) Glucose (mmol/l) 5,2 (3,4-16,3) Cholestérol total (mmol/l) 4,7 (2,5-7,2) Triglycérides (mmol/l) 1,0 (0,4-3,7) Génotype ( ) ARN VHC (log) 6,1 (4,4-7,8)

9 Malades : histologie Patients VHC+ médiane (extrêmes) (n=33) Activité selon METAVIR (0-1-2) Fibrose selon METAVIR ( ) Stéatose (% d hépatocytes) 10 (0-70)

10 Microscopie électronique x m Malade atteint d hépatite C n m 5 µm

11 Microscopie électronique x m Malade atteint d hépatite C 1 µm m

12 Microscopie électronique Nb moyen de vacuoles d autophagie / 100 µm²) 12 9 p = 0, Hépatite C chronique Témoins n=23 n=8

13 Microscopie électronique 18,0 16,0 Glycémie (mmol/l) 14,0 12,0 10,0 8,0 r = p = ,0 4, Nb moyen de vacuoles d autophagie / 100 µm²

14 Microscopie électronique Index de masse corporelle r = p = Nb moyen de vacuoles d autophagie / 100µm²

15 Microscopie électronique Nb moyen de vacuoles d autophagie / 100 µm²) ou 3 4 Génotype

16 Microscopie électronique Pas de corrélation entre le nombre de vacuoles d autophagie et : âge des malades ARN VHC stade de fibrose stade de fibrose grade d activité stéatose transaminases sériques triglycéridémie cholestérolémie créatininémie

17 Western blot LC3 Western Blot LC3 30 Kd LC3-I LC3 II Béta-actine Témoins Malades atteints d hépatite C

18 Western blot LC3 LC3-II / β-actine 0,45 0,40 0,35 0,30 0,25 p = 0,005 0,20 0,15 Hépatite C chronique n=10 Témoins n=4

19 Western blot LC3 1,20 p = 0,005 LC3- -I / β-actine 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 Hépatite C chronique n=10 Témoin n=4

20 Western blot LC3 Classiquement bafilomycine A1 Autophagie non oui ARNm LC3 Mizushima, Autophagy 2007 Nara, Cell Struct Funct 2002

21 Western blot LC3 Classiquement VHC? Autophagie non oui ARNm LC3 Mizushima, Autophagy 2007 Nara, Cell Struct Funct 2002

22 Conclusion Cette étude montre que l autophagie est mise en jeu dans les hépatocytes des malades atteints d hépatite C chronique Cette étude suggère que le VHC pourrait bloquer la fonction de défense de l autophagie chez l hôte Cette étude suggère un lien entre l autophagie hépatocytaire et des éléments du syndrome dysmétabolique

23 Autophagie et hépatite C Adressage des antigènes pour la présentation au CMH-II Élimine virus des cellules hôtes Virus détournent la machinerie de l autophagie pour leur propre réplication Mizushima, Nature, 2008 Orvedah, Cell Death and Differentiation, 2009

24

25 Control- Technique Age (y) /Sex Témoins Indication for liver biopsy Serum ALT level (x ULN) Serum γgt level (x ULN) 1-EM 56/F Unexplained liver tests abnormalities EM 21/M Increase in alkaline phosphatase level in a context of total parenteral nutrition 3-EM 30/M Liver tests abnormalities in a context of total parenteral nutrition EM 43/F Context of total parenteral nutrition EM 42/F Liver transplantation for polycystic liver disease NA NA EM 49/M Context of parenteral nutrition EM NA Liver graft not attributed for liver transplantation for technical reasons EM 39/M Context of parenteral nutrition NA NA 9-WB 53/M Surgical liver biopsy during surgery for gastric lymphoma 10-WB 37/M Unexplained Liver tests abnormalities WB 58/F Surgical reconstruction of a biliodigestive anastomosis NA NA WB 20/M Unexplained thrombocytopenia

26 Autophagie et hépatite C Autophagie : inhibition de l accumulation de graisse dans le foie Singh, Nature 2009

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