Endoderme. Ectoderme. Mésoderme
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- Anne-Laure Bourgeois
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1 Blastocyste Humain: 5 jours Souris: 3,5 jours Endoderme Ectoderme Reprogramation cel. Somatiques adultes Mésoderme
2 Indications dans les thérapies cellulaires et géniques
3
4 Enjeux internationaux Accroissement du marché de la thérapie cellulaire et tissulaire Réseaux de recherche lourdement financés (Ecosse, Californie, Singapour). Emergence de plusieurs grandes plate-formes dans le monde (Cambridge, Barcelone, Shanghai, Kobe, Singapour, Madison, Harvard)
5 PROBLEMES SPÉCIFIQUES AUX LIGNÉES ES HUMAINES Hétérogénéité génétique des lignées Difficulté à maintenir autorenouvellement et pluripotence Instabilité génétique Inadaptation des lignées existantes pour la clinique Absence de standardisation des conditions culture Absence de modèles in vivo de fonctionnalité Révision de la Loi de la Bioéthique Importation décret sept 2004 Dérivation nouvelles lignées Février 2006
6 Contrôle réglementaire par l agence de la Biomédecine(entrée/sortie banque) Banque à vocation régionale ou nationale Réseau européen (infrastructures équivalentes, GB, Suède, Espagne) «hes registry» FP6
7 Plateforme R&D CSEh Paris Sud Institut Andre Lwoff, IFR89,Paul Brousse Hopital, Villejuif, France 1- Réponse aux problèmes technologiques respect des contraintes législatives 2- Développement d axes stratégiques de R&D des cellules souches embryonnaires pluripotentes humaines - Banque et outils pour la recherche - Banque pour les applications médicales
8 Etapes du projet développement de la plateforme 2004 Conception plateforme PPF Paris sud IngeCELL MEDICEN CPER Ile de france DIM ile de France GIS StemPôle Féderation des projets des Équipes UnivParis 11 Autorisations Comité Ad-hoc De biologie expérimentale vers les biothérapies Autorisations Agence BioMédecine 1ères Importations H1&H9 A Bennaceur U602 W Vainchenker U790 A Weber U804 G Uzan U602 L Coulombel U602 G Tachdjian U782 J Melki U798 R Guérardhi EMI0011 B Onteniente UMR 788 N Frydman U 782 Colab. Nationales consortium Publique Paris Sud et Evry / 5 entreprises Banques sources Diffusions lignées Activités R&D Collaborations Nationales et Internationales (Canada, USA, Japon)
9 Objectifs GIS StemPôle ile de France Réseau de recherche ile de France de référence internationale pour l exploitation médicale des cellules souches pluripotentes d origine embryonnaire (ES) ou dérivées de cellules somatiques ou des cellules souches multipotentes fœtales ou adultes dérivées de divers tissus (adipeux, muscle, moelle osseuse, sang placentaire ). Applications: Thérapies cellulaires substitutives Thérapies cellulaires et géniques Modélisation pathologique Concepts et méthodologies communes Transfert des connaissances et des compétences entre les partenaires Transfert des matériels biologiques et des technologies Promouvoir la recherche translationnelle vers le patient
10 Recherche & Dévelopement Banque et distribution Lignées CSEh Plateforme Service / collaborations Formation / Animation technique
11 ! " #$"% 6 lignées hesc H1, H9 HUES-1, HUES-2, HUES-3, HUES-7 1 nouvelle hesc francaise CLO1 " % & + "%# & CRB Paul Brousse ' " ( " ) ## # *" ## #
12 , % "% '.' /0, Tra 1-60 x10 SSEA-4 x10 Tra 1-81 x10 ' %%.! H9 p52 PA Rex1 htert Oct4 H9 p57 x40 1,& %& *! $! "#" ' ( ) $ +, - % & 1, & 1!-(. #/% 1) %' 1 ) ,%& & 1 0
13 Recherche & Développement 0 JO 20/09/2006 (Pr A Bennaceur Villejuif/ Pr G Tachdjian Clamart). DPI: Maladies monogéniques incurables Déséquilibres chromosomiques 1 2 CL01 3 Autorenouvellement ) % 11 mois 0 Oct4 SSEA4 Sox2 Tra1-60
14 Recherche & Développement 2- Développement de nouvelles sources de Cellules Souches pluripotentes à usage clinique 1- Procédures et Optimisation des techniques de dérivation en conditions GMP 2- Banques lignée ES HLA compatibles = 180 lignées (réseau européen) (Taylor et al. Lancet 2005; Nakajima et al, Stem cells 2007) 3- Génération de Cellules Souches pluripotentes «PATIENT- SPECIFIQUE»
15 Programmation «embryonnaire» de cellules adultes: les ips Facteurs définis Tissus compatibles avec le donneur de Noyau
16 Recherche & Développement 3- Manipulation génétique des lignées de CSEh ou ips Lignées «outils» Modélisation de pathologies, criblages de drogue Lignées «thérapeutiques»: Correction génique de maladies monogéniques 1. Gene transfer (vectors) 2. Homologous recombination (KO KI) 2. Single cell cloning 3. Expansion 4. Differentiation hesc Quality control - Undifferentiated status of hesc - Karyotyping analyses Modified hesc Single clone hesc Expanded hesc clone Quality control - Integration sites identification - Undifferentiated status of hesc - Karyotyping analyses Clonally derived hescderived cells Yates et al., Gene Ther., 2006
17 Science, Dec 2007 Modele drepanocytose (anemie falciforme) : gene hβs/hβs
18 STEM CELL CORE FACILITY Recherche & Développement 4- Optimisation et Standardisation des techniques de différentiation Transfert des procédures techniques en collaboration avec les équipes expertes. => Programme INGECELL Médicen Endothelium hes cells Embryoid Bodies : days CD144 CD34 Sort Myeloid Colony
19 R&D DELIVERABLES 2007 : Derivation of the first French hesc line : CLO1 Protocols of differentiation (hemato, Lympho, endot) : Distribution of new hes lines (modified, normal and pathological) Derivation of ips New Protocols of differentiation : Modeling of pathologies
20 Training / Consulting Consulting Assistance to apply for ABM hesc authorization => 7 authorization (JO) Training Human Stem Cell Course (Genopole Evry) Technological transfer
21 INTERACTIONS DE LA PLATEFORME Equipes franciliennes de recherche publiques Agence de la biomédecine Projets de Collaborations Scientifiques Nouveaux Biomarqueurs Manipulation génétique Imagerie Banque Esh Activités R&D Formation Accueil Réglementations françaises et européennes Aspects Ethiques Aide aux dossiers d autorisation Robotisation Milieux définis Outils criblages drogues Autres Plateformes ARNi Transcriptome Généthon Hotel à projet Sociétés et Entreprises Vigicell Abcys ATL CTP Tetrahédron Cellectis
22 A. Bennaceur-Griscelli, MD, PhD Coordination scientifique Banque/Qualification Olivier Feraud, PhD (Research Engineer) Aurelie Magniez (Engineer MEDICEN) Cecile Bas (Engineer MEDICEN) Manipulation Génétique Frank Yates, PhD (Research Fellow INSERM) Noufissa Oudrhiri, PhD (Research Engineer APHP) Dérivation Olivier Feraud, PhD (Research Engineer) Differentiation /Modèles Marion Brenot (Assistant Engineer) Rima Haddad,PhD (University Researcher) Maite Mitjavila, PhD (Researcher) Michael Melkus, PhD (Postdoctoral Fellow) Laure Coulombel, MD, PhD (Research Director) A Turhan (Poitiers) C Eaves (Vancouver) Histoembryology-Cytogenetics INSERM U782, Beclere Hospital, Clamart, France Rene Frydman, MD, PhD (FIV) Gerard Tachdian, MD (DPI) Nelly Frydman, MD (FIV) Cecile Bas MEDICEN PRES UniverSud paris
23 Institut André Lwoff ' <, # +#= # ' ( 11( :4 ; < '; = 7 > 5 9 $ ".. 7 (1: ( 60; 1233 &?0 & '%
24 Interaction et coordination avec les autres Plateformes en Ile de France Label Platefome Ibiza Villejuif (Paul Brousse) Banques et dérivation et caractérisation des cellules souches pluripotentes embryonnaires et foetales Créteil (EFS) Ingénierie cellulaire Et tissulaire Evry (I-Stem) Amplification Criblage haut débit
25 MOYENS CPER Installation et équipement de la plateforme Cahier des charges : 1750 M2 surfaces utiles Accueil réception des échantillons Labo L2 production: Banque recherche (robotisation banque) Banque clinique (grade GMP) Dérivation lignées GMP Labo R&D L2 Nouvelles lignées et modéles CS pour la recherche Labo R&D L3 Manipulation génétique Labo R&D L2 Protocoles de Différenciation Labo accueil Hôtel à projet (5 postes) Labo Commun: CQ (imagerie, Bio Mol, Biochimie, Cytogénomique, CMF) Surfaces techniques: cryoconservation, réserves Surfaces bureau et salle de réunion pour la formation Budget de Fonctionnement: facturation des prestations de services Fonds propres (ANR si labellisation IBiSA) Crédits de recherche sur projets
26 Gouvernance et modalités de fonctionnement Structure de gestion à définir avec les partenaires Conseil d orientation Conseil Scientifique extérieur Comité exécutif et de gestion scientifique Coordination avec d autres partenaires: Du GIS StemPôle (gestion administrative à l APHP Coordination scientifique: A Bennaceur & M Péchanski
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