1.1. Allumage et initialisation
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- Clementine Vachon
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1 1. CRÉATION D'UNE MÉTHODE INSTRUMENTALE 1.1. Allumage et initialisation Allumer l'ordinateur et l'écran. Après initialisation, appuyer, à la demande et en même temps sur les touches «Ctrl» ; «Alt» ; «Del». Dans la fenêtre de demande de mot de passe qui apparaît, cliquer sur «OK». L'écran ci-dessous apparaît : Icônes de travail igure 1: Cliquer sur l'icône «Tune». Laisser l'initialisation se faire (cela prend quelques secondes) et l'écran apparut au début donne la figure ci-dessous. Comme indiqué, vérifier que la valeur de l'énergie du faisceau d'électrons est de 70 ev. Vérifier que la valeur est «70» ou afficher cette valeur si autre igure 2: Page (1)
2 Refermer cette fenêtre pour revenir à l'écran de départ (igure 1). aire un clic droit dans l'icône en bas à droite de la fenêtre de windows, puis côcher Pump. Cliquer sur l'icône «Xcalibur». La fenêtre ci-dessous (igure 3) apparaît qui donne accès à : # la programmation de la méthode instrumentale (chromatographe en phase gazeuse et spectromètre de masse), via l'icône «Instrument Setup». # la création de séquences d'analyse, via l'icône «Sequence Setup». # la récupération et au traitement qualitatif des données, via l'icône «Qual Browser». Il est important de bien suivre les remarques (igure 3) indiquées. Si au cours de la programmation de la méthode de travail, les indications de l'appareil différent de celles figurant sur cette procédure il est inutile de continuer. aites appel au responsable des TP. Indications importantes. Vérifier que les indications affichées, par l'appareil, au cours de l'analyse correspondent parfaitement à ce qui est indiqué dans cette procédure igure 3: 1.2. Programmation du chromatographe (GC) Programmation de la température du four Cliquer sur l'icône «Instrument Setup». La fenêtre ci-dessous apparaît (igure 4) dans laquelle la partie GC est activée ainsi que l'onglet de la programmation du four. Page (2)
3 Coin vert allumé, programmation de la GC active A l'aide de la flèche supérieure, on supprime des rampes pour créer un isotherme et à l'aide de la flèche inférieure, on crée des rampes pour une programmation de la température igure 4: Créer le programme de température désiré, par exemple un isotherme (rentrer la valeur de l'isotherme et de la durée d'analyse) (igure 5) et remplacer la valeur affichée dans la rubrique «Max Temp ( C)» par «240» et mettre «0» dans la rubrique «Equilibration Time (min)» (igure 5). Ne pas toucher aux autres rubriques. igure 5: Page (3)
4 1.2.2 Programmation de l'écoulement du gaz vecteur Activer l'onglet «Left SSL» et désactiver la rubrique «Split low (ml/min)» (igure 6). igure 6: Activer l'onglet «Left Carrier». On accède alors à la fenêtre de programmation de l'écoulement du gaz vecteur (igure 7). En cliquant sur la flèche du «low Mode», on accède aux différents modes de travail : L'affichage de cette rubrique se modifie en fonction du choix fait dans la rubrique «low Mode». igure 7: Page (4)
5 # «Constant Pressure» : pression constante. En isotherme, le débit ne change pas, alors que en programmation, le débit diminue lorsque la température augmente. Dans la partie «Ramps» on active la case «On» et dans la case du dessous qui s'active, on affiche la valeur de la pression de travail. # «Constant low» : débit constant. En isotherme, la pression ne change pas, alors que en programmation, la pression augmente lorsque la température augmente pour maintenir le débit constant. Dans la partie «Ramps» on active la case «On» et dans la case du dessous qui s'active, on affiche la valeur du débit voulu. # «Programmed low» : programmation du débit. Dans la partie «Ramps» on active la case «On» et dans les cases du dessous qui s'activent, on crée le programme de pression (même méthode que pour le programme de température). # «Programmed Pressure» : programmation de la pression. Dans la partie «Ramps» on active la case «On» et dans les cases du dessous qui s'activent, on crée le programme de débit (même méthode que pour le programme de température). Dans les analyses faites en TP, on travaille à débit constant et à 0,8 ml/min (igure 8) : activer et indiquer cette valeur. Activer la case «Vacuum compensation» et la case «Gaz Saver». Si ce n'est déjà fait, afficher la valeur «20» dans la case correspondant à «Gaz Saver low (ml/min)» et la valeur «2.00» dans la case correspondant à «Gaz Saver Time (min)». igure 8: Programmation de l'injecteur (igures 9 et 10) Activer l'onglet «Left SSL». Dans la rubrique «Mode» : cliquant sur la flèche, on accède aux différents modes de travail (igure 9) : et en Page (5)
6 # «Split» : il faut alors activer la case «Split low» et définir le taux de fuite (split) en introduisant une valeur dans la case correspondant au «Split Ratio» (par exemple 100). En fonction du débit défini précédemment, la valeur du débit de fuite est affichée automatiquement : par exemple avec un débit dans la colonne de 0,8 ml/min et un taux de fuite de 100, l'appareil règle le débit de la fuite à 80 ml/min. # «Splitless» : il faut aussi activer la case «Split low» et définir le taux de fuite (split) en introduisant une valeur dans la case correspondant au «Split Ratio» (par exemple 100). L'appareil affiche automatiquement la valeur du débit de la fuite. Dans la case correspondant au «Splitless Time (min)» introduire une valeur (par exemple 2). En début d'analyse et après vaporisation de l'échantillon injecté, la fuite reste fermée pendant 2 minutes, temps choisi pour laisser aux composés, entrainés par le gaz vecteur circulant avec un débit, par exemple de 0,8 ml/min, de se condenser en tête de la colonne maintenue à une température relativement basse, par exemple 40 C. Une fois les 2 minutes écoulées, la fuite s'ouvre et le gaz vecteur balaye l'injecteur avec un débit correspondant au «Split low» (par exemple 80 ml/min), ce qui permet le nettoyage de l'injecteur pour l'analyse suivante. igure 9: # «Splitless w/surge» : Le choix de cette rubrique, active la rubrique «Surge», dans laquelle il faut définir la surpression à exercer dans l'injecteur dans la rubrique «Surge Pressure (psi)» et la durée de cette surpression dans la rubrique «Surge Duration». Ce mode permet, lorsque la solution à injecter est très diluée, d'injecter un grand volume de solution sans que le volume d'expansion du solvant dépasse les 75% de la capacité du liner en verre. Dans les analyses faites en TP, on travaille au début en mode «Split» avec un taux de fuite de «100» et une température de l'injecteur de «150»; ce qui donne l'affichage ci-dessous (igure 10). Page (6)
7 Activer les cases pour introduire les valeurs igure 10: Vérifications et enregistrement provisoire Activer l'onglet «Run Table». Vérifier qu'aucune case n'est activée (igure 11). igure 11: Page (7)
8 Cliquer sur le menu «ile» et dans le menu déroulant sélectionner «Save As...» (igure 12). igure 12: Dans la fenêtre qui apparaît en surimposition (igure 13) : # sélectionner un fichier de stockage, par exemple «APC Groupe A1» ; # dans la rubrique «ile Name», donner un nom parlant à la méthode instrumentale en proscrivant les caractères interdits ; # cliquer sur «Save». 1. Sélectionner un fichier de stockage 2. Nom de la méthode 3. Cliquer sur «Save» igure 13: Page (8)
9 Une autre fenêtre (igure 14) apparaît en surimposition et dans la partie «Description», on peut rajouter des informations sur la méthode (tous les caractères sont permis). Si on ne veut rien rajouter cliquer n'importe où à côté de «New Method». En cliquant sur «OK», une autre fenêtre apparaît et dans la partie «Comment» taper vos initiale et cliquer sur «Continue». igure 14: 1.3. Programmation du spectromètre de masse Cliquer sur l'icône Il n'y a qu'un seul mode d'ionisation qui est de l'impact électronique positif (EI+). Cliquer sur l'onglet «Analysis» et activer et programmer les différentes rubriques (igure 15) : igure 15: Page (9)
10 Dans «Customize Settings» : # activer la case «GC Interface temperature ( C)» et vérifier que la valeur affichée est «250» ; # activer la case «Source temperature ( C)» et vérifier que la valeur affichée est «200» ; # activer la case «Emission courant (µa)» et vérifier que la valeur affichée est «150» Programmation du mode d'acquisition «Scan» ou «TIC» Dans ce mode tous les fragments produits dont la valeur de m/z est comprise dans un certain domaine (par exemple entre 5 et 300 uma) sont collectés, analysés et détectés, pour donner le spectre de masse du composé séparé par la GC. Ceci permet l'identification du composé à l'aide de la bibliothèque de spectres de masses ; par contre ce n'est pas le mode le plus sensible. Pour augmenter la sensibilité, il vaut mieux travailler en mode «SIM» (Single Ion Monitoring), où on sélectionne certains fragments, donc certaines valeurs de m/z, caractéristiques des composés visés. Cliquer sur l'onglet «Acquisition» et activer si ce n'est déjà fait le mode «ull Scan». Compléter ou changer les valeurs comme le montre la figure ci-dessous (igure 16) : 1. Activer le mode «Scans per second». Laisser ou introduire la valeur Activer le mode «Advanced». Introduire la valeur «5» dans «Start» Introduire la valeur «300» dans «End» 3. Introduire la valeur «1.3» igure 16: Remarque : La valeur introduite dans «Start acquiring after eluting solvant for (min.)» est de 1,3 minutes en général. Mais après acquisition d'un chromatogramme, vérifier que cette valeur convient : si elle est trop petite, une partie du pic du solvant apparaît ; si elle est trop grande le pic correspondant au composé le plus volatil, risque de ne pas apparaître. Corriger la valeur dans ces conditions. Page (10)
11 1.3.2 Programmation du mode d'acquisition «SIM» (après avoir travaillé en mode SCAN) Dans ce mode d'acquisition, on sélectionne les valeurs de m/z de certains fragments caractéristiques des composés visés. La sensibilité s'en trouve augmentée. Après avoir cliqué sur l'icône, activer le mode «Selected ion monitoring (SIM)» (igure 17). Activer le mode «SIM» en cliquant sur le cercle blanc igure 17: Dans le fenêtre qui apparaît, procéder comme ci-dessous (igure 18) : Introduire les masses choisies dans n'importe quel ordre, mais une masse par ligne. Introduire la valeur «1.0» ou toute autre valeur convenable igure 18: Page (11)
12 1.3.3 Enregistrement de la méthode Cliquer sur le menu «ile» et dans le menu déroulant sélectionner «Save» (igure 19). Une autre fenêtre (igure 19) apparaît en surimposition et dans la partie «Description», on peut rajouter des informations sur la méthode (tous les caractères sont permis). Si on ne veut rien rajouter cliquer n'importe où à côté de «New Method». En cliquant sur «OK», une autre fenêtre apparaît et dans la partie «Comment» taper vos initiales et cliquer sur «Continue». igure 19: 2. CRÉATION D'UNE SÉQUENCE D'ANALYSE «SEQUENCE SETUP» 2.1. Programmation d'une séquence d'analyse et sauvegarde ermer la fenêtre pour revenir à la page de départ (igure 20). Sélectionner l'icône «Sequence Setup» Sélectionner l'icône «Sequence Setup» igure 20: Page (12)
13 La fenêtre de création de séquences d'analyse s'ouvre (igure 21), cliquer dans la case «Sample Type» et dans le menu déroulant qui apparaît, sélectionner «Unknown». 1. Cliquer dans la case «Sample Type» 2. Sélectionner «Unknown» igure 21: Cliquer ensuite dans la case «ile Name» (igure 22) et introduire un nom de sauvegarde du chromatogramme. Ce nom doit être suffisamment explicite et caractéristique du chromatogramme en voie d'acquisition. Il n'est pas possible dans cette case de faire une insertion avec le curseur et la souris pour corriger un erreur, pour corriger une erreur, on appuie sur la touche «2» pour s'insérer et on utilise les flèches du clavier pour se déplacer. Introduire un nom igure 22: Cliquer, bouton droit, dans la case «Path» (igure 23) et dans le menu déroulant qui apparaît, sélectionner «Browse» et dans la nouvelle fenêtre, sélectionner un fichier de stockage, par exemple «APC Groupe A1» ; pour la sauvegarde du chromatogramme. 2. Sélectionner «Browse» 1. Cliquer bouton droit dans la case «Path» 3. Sélectionner un fichier de stockage du chromatogramme igure 23: Cliquer, bouton droit, dans la case «Inst Meth» (igure 24) et dans le menu déroulant qui apparaît, sélectionner «Browse» et dans la nouvelle fenêtre, sélectionner le fichier de stockage de Page (13)
14 la méthode instrumentale que l'on veut utiliser et une fois ouvert sélectionner la méthode instrumentale désirée. \APC Groupe A 1. Cliquer bouton droit dans la case «Inst Meth» 2. Sélectionner «Browse» 3. Sélectionner le fichier de stockage de la méthode instrumentale et une fois ouvert, sélectionner la méthode instrumentale. igure 24: Vérifier que le panneau de gauche porte les indications ci-dessous (igure 25). Si ce n'est pas le cas, en référer au responsable des TP. Sauver la séquence d'analyse sous un nom parlant. \A Vérifier que les indications de cette zone sont conformes à celles ci igure 25: 2.2. Activation de la séquence d'analyse Sélectionner la ligne à activer en cliquant sur le numéro de la ligne (igure 26) et cliquer sur l'icône «Run This Sample». \A 2. Cliquer sur l'icône «Run This Sample» 1. Sélectionner la ligne en cliquant sur «1» igure 26: Page (14)
15 Dans la fenêtre qui apparaît en surimposition (igure 27), vérifier que tout est conforme à la figure ci-dessous. Si plusieurs séquences ont été programmées, introduire dans la case «Run Rows» le numéro de la séquence à activer. Si plusieurs séquences sont programmées, introduire le numéro de la séquence à activer. igure 27: Cliquer sur «OK» quand c'est terminé. La méthode instrumentale est envoyée au GC et à la MS et les indications figurant sur le panneau de gauche se modifient (igure 28). Vérifier que les indications sont conformes à celles de la figure ci-dessous. Cliquer sur «Preparing for Run» pour faire apparaître, en dessous, le panneau correspondant à la visualisation des événements de la GC. Vérifier que l'indication : * sous Trace GC 2000 est «Preparing for Run» * sous Trace MS est «Ready for Run» igure 28: 3. PRÉPARATION DE L'INJECTION ET LANCEMENT D'UNE ANALYSE 3.1. Prélèvement de la solution à analyser La solution à analyser est injectée à l'aide d'une seringue de 10 µl. On injecte environ 1 µl par la méthode du prélèvement entre deux bulles d'air. Préparer un tube à hémolyse étiqueté «Acétone» et le remplir d'acétone qualité HPLC réservé aux injections en GC/MS. Recouvrir le tube de papier d'aluminium. Page (15)
16 Préparer un tube à hémolyse étiqueté «Poubelle» et le réserver pour les rejets du rinçage de la seringue. Préparer la solution à analyser. Prendre la seringue de 10 µl et la rincer plusieurs fois à l'acétone. Ensuite retirer le piston et aller au poste d'air comprimé et insuffler de l'air dans le corps de la seringue pour assécher le canal. Le prélèvement se fait en trois phases (igure 29) : # Phase 1 : Dans l'air déplacer le piston d'environ 1 µl ; # Phase 2 : Introduire l'aiguille de la seringue dans la solution à analyser et déplacer lentement le piston d'environ 1 µl ; # Phase 3 : Sortir la seringue de la solution et tirer le piston dans l'air jusqu'à voir apparaître la solution prélevée. Utiliser les graduations pour noter le volume prélevé. Phase 1 Phase 2 Phase 3 igure 29: Page (16)
17 3.2. Initialisation de l'appareil, affichage du clavier Pendant la préparation de la seringue, l'appareil continue à s'initialiser, ce qui peut prendre un temps plus ou moins long surtout au début. En utilisation de routine, si on ne change pas les températures de la colonne ou de l'injecteur, l'initialisation est plus rapide mais suit toujours les phases décrites ci-dessous. Sur le clavier on observe les étapes suivantes (igure 30) : La lampe témoin «NOT READY ERROR» s'allume (orange) La lampe témoin «STAND BY PREP RUN» clignote (orange) La lampe témoin «READY TO INJECT» s'allume (vert) igure 30: Dans le même temps, les indications figurant sur le panneau de gauche se modifient (igure 31). Vérifier que ces indications sont conformes à celles de la figure ci-dessous. Vérifier que l'indication : * sous Trace GC 2000 est «Waiting for Contact Closure» * sous Trace MS est «Waiting for Contact Closure» igure 31: Page (17)
18 3.3. Injection et visualisation du chromatogramme et des spectres de masse en temps réel Injecter la solution et appuyer sur le bouton «START» du clavier de la GC. Les indications figurant sur le panneau de gauche se modifient (igure 32). Vérifier que ces indications sont conformes à celles de la figure ci-dessous. (Remarque : 2 START = 1 STOP). Vérifier que l'indication : * sous Trace GC 2000 est «Running» * sous Trace MS est «Running» igure 32: Pour visualiser l'acquisition en cours, cliquer sur l'icône «Real Time Plot View» de la barre de menus (igure 33). Cliquer sur l'icône «Real Time Plot View» igure 33: On accède alors à l'écran de visualisation en temps réel qui a l'aspect de la figure ci-dessous (igure 34), jusqu'à ce que le temps introduit dans «Start acquiring after eluting solvant for (min.)» s'écoule (cf. page 10). Une fois ce temps écoulé, l'affichage se modifie et on obtient une vue correspondant à celle de la igure 37, où l'écran est divisé en deux parties : # celle du dessus correspond au spectre de masse, visualisation en temps réel des fragments détectés ; # celle d'en dessous au chromatogramme en temps réel. Cliquer sur la «punaise» pour activer la fenêtre de l'acquisition en temps réel du chromatogramme. Page (18)
19 temps introduit dans «Start acquiring after eluting solvant for (min.)» non encore écoulé igure 34: Cliquer sur la «punaise» pour activer la fenêtre igure 35: En cliquant à l'intérieur de la fenêtre de l'acquisition en temps réel du chromatogramme, on obtient un affichage qui correspond au temps écoulé (zoom). Cela permet de mieux se rendre compte si l'acquisition est terminée ou non. Par contre, l'écran se fige et on n'est plus en temps réel. Pour revenir à l'affichage précédent, il faut déverrouiller le zoom en cliquant sur l'icône représentant un cadenas (igure 36). Page (19)
20 Cliquer sur le «cadenas» pour revenir au temps réel igure 36: Une fois l'acquisition terminée appuyer sur le bouton «STOP» du clavier de la GC et cliquer sur l'icône pour revenir à la page d'accueil «Home Page» (igure 37). Cliquer sur cette icône pour revenir à la page d'accueil igure 37: 4. EXPLOITATION DES RÉSULTATS (ANALYSE QUALITATIVE) 4.1. Récupération des chromatogrammes De retour dans la page d'accueil (igure 38), deux méthodes de récupération des chromatogrammes sont possibles : # Récupération du chromatogramme qui vient d'être acquis : amener le curseur de la souris au dessus de l'icône «Qual Browser» : et cliquer «bouton droit» de la souris. Dans le menu qui apparaît, sélectionner «Open Last Acquired Raw ile» (igure 38). # Récupération d'un chromatogramme acquis précédemment : amener le curseur de la souris au dessus de l'icône «Qual Browser» : et cliquer deux fois de suit «bouton gauche» de la souris (igure 39). Dans la fenêtre qui apparaît, cliquer sur le menu «ile» et dans le menu Page (20)
21 déroulant sélectionner «Open...». Rechercher alors, dans la fenêtre qui s'ouvre, le fichier de type «raw» à ouvrir. Amener le curseur de la souris au dessus de l'icône «Qual Browser» et cliquer «bouton droit» de la souris. Dans le menu qui apparaît, sélectionner «Open Last Acquired Raw ile» igure 38: Cliquer sur le menu «ile» et dans le menu déroulant sélectionner «Open...» igure 39: Page (21)
22 4.2. Identification des composés par comparaison avec les spectres de masse de la bibliothèque NIST Une fois le chromatogramme récupéré par une des deux méthodes décrites ci dessus, pour identifier les composés, il faut obligatoirement que l'acquisition ait été faite en mode «Scan» ou «TIC». Le chromatogramme récupéré se présente comme à la igure 40, dans laquelle on a deux fenêtres : # celle du haut, affiche le chromatogramme brut, avec à droite l'identification du chromatogramme ; # celle du bas, correspond à l'affichage du spectre de masse. Elle est vide au départ puisqu'aucun pic n'a été sélectionné. Identification du chromatogramme enêtre d'affichage du chromatogramme enêtre d'affichage du spectre de masse igure 40: Cliquer sur la «punaise» (fenêtre inactive) pour activer la fenêtre du chromatogramme (fenêtre active : punaise de face sur fond vert). A l'aide de la souris et en appuyant constamment sur le bouton gauche de la souris, créer un cadre autour des pics que l'on veut zoomer et une fois le cadre créé, cliquer à l'intérieur du cadre (igure 41). Page (22)
23 Cliquer ensuite sur la «punaise» masse (fenêtre inactive) pour activer la fenêtre du spectre de (fenêtre active : punaise de face sur fond vert) (igure 42). Créer, à l'aide de la souris, un cadre autour de la zone à zoomer et cliquer dedans. igure 41: activer la fenêtre du spectre de masse en cliquant sur la punaise. Punaise sur fond vert : fenêtre activée igure 42: Page (23)
24 Déplacer le curseur de la souris dans la fenêtre du chromatogramme et cliquer au milieu du pic à identifier. Dans la fenêtre du spectre de masse, apparaît le spectre de masse brut du composé choisi (igure 43). Il faut ensuite enlever le bruit de fond avant de lancer l'identification. Cliquer sur le pic pour faire apparaître son spectre de masse igure 43: La fenêtre du spectre de masse étant toujours active, placer le curseur de la souris à l'intérieur de cette fenêtre et cliquer «bouton droit». Dans le menu qui apparaît, choisir «Substract Spectra» et dans le sous menu qui s'active, choisir «2 Ranges» (igure 44). igure 44: Une fois cette opération effectuée, retourner avec la souris dans la fenêtre du chromatogramme et cliquer une fois à gauche du pic et dans le bruit de fond et faire de même à la droite du pic. Page (24)
25 Revenir ensuite dans la fenêtre du spectre de masse et cliquer «bouton droit». Dans le menu qui apparaît, choisir «Library» et dans le sous menu qui s'active, choisir «Search» (igure 45). igure 45: La fenêtre d'identification apparaît, en se superposant sur la fenêtre précédente (igure 46). enêtre d'identification en surimpression de la fenêtre précédente igure 46: Agrandir la fenêtre pour obtenir les renseignements voulus (igure 47). Dans la partie correspondant au classement des possibilités, sélectionner aussi les places suivantes de manière à vérifier si il y a la même identification et donc cumuler les probabilités. En effet surtout dans le cas de stéréoisomères optiques (R et S) la bibliothèque distingue les différents cas, alors que la colonne utilisée ne peut pas séparer les stéréoisomères. Page (25)
26 Classement des possibilités par ordre de probabilité décroissante ermeture de la fenêtre Spectre de masse obtenu Spectre de masse de la bibliothèque ormule chimique, nom et numéro de CAS du composé identifié Différence entre le spectre de masse obtenu et celui de la bibliothèque igure 11: Cliquer sur le menu «ile» et dans le menu déroulant choisir les options d'impression de la page d'identification. (Print Preview). ATTENTION : introduire une feuille par feuille dans l'imprimante. Une fois l'impression effectuée, fermer la fenêtre d'identification (igure 47). On retrouve alors la fenêtre précédente (igure 43), mais réduite. Agrandir la fenêtre et identifier les autres composés de la même manière Labellisation des pics : aire, hauteur, calcul du rapport signal/bruit (S/N)... Récupérer le chromatogramme dont on veut intégrer les pics (cf. paragraphe 4.1 page 20) et activer, s'il y a lieu, la fenêtre du chromatogramme en cliquant sur la punaise. Placer le curseur de la souris à l'intérieur de cette fenêtre et cliquer «bouton droit». Dans le menu qui apparaît, choisir «Peak Detection» et dans le sous menu qui s'active, choisir «Toggle Detection In This Plot» (igure 48). Tous les pics du chromatogramme sont intégrés. Il est possible de modifier manuellement l'intégration des pics. Le curseur de la souris étant toujours à l'intérieur de cette fenêtre, cliquer de nouveau «bouton droit» et dans le menu qui apparaît, choisir «Display Options...». Une nouvelle fenêtre apparaît en surimposition, sélectionner l'onglet «Labels» et dans cette section, en plus de ce qui est sélectionné par défaut, activer (en cliquant dans la petite case) les rubriques «Area» ; «Height» et «Signal to Page (26)
27 Noise» (igure 49).On obtient alors un chromatogramme (igure 50) où au dessus de chaque pic, apparaissent les valeurs numériques des rubriques choisies précédemment avec le libellé suivant : «AA» pour l'aire du pic ; «AH» pour la hauteur du pic et «S/N» pour le rapport signal sur bruit. igure 48: igure 49: Page (27)
28 igure 50: 4.4. Quelques astuces Pour retirer manuellement, l'intégration d'un pic, il faut zoomer dessus, puis cliquer sur l'icône «Delete Peaks» :, et cliquer sur le premier carré d'intégration. Pour intégrer manuellement un pic, il faut utiliser l'icône «Add Peaks» : d'un clic droit, sélectionner la base du pic., puis à l'aide Pour dézoomer, il suffit de cliquer sur l'icône : Pour obtenir une fenêtre pleine écran (avant impression), celle-ci doit être sélectionnée, cliquer alors sur l'icône : Page (28)
29 TABLE DES MATIÈRES 1.CRÉATION D'UNE MÉTHODE INSTRUMENTALE Allumage et initialisation Programmation du chromatographe (GC) Programmation de la température du four Programmation de l'écoulement du gaz vecteur Programmation de l'injecteur (igures 9 et 10) Vérifications et enregistrement provisoire Programmation du spectromètre de masse Programmation du mode d'acquisition «Scan» ou «TIC» Programmation du mode d'acquisition «SIM» (après avoir travaillé en mode SCAN) Enregistrement de la méthode CRÉATION D'UNE SÉQUENCE D'ANALYSE «SEQUENCE SETUP» Programmation d'une séquence d'analyse et sauvegarde Activation de la séquence d'analyse PRÉPARATION DE L'INJECTION ET LANCEMENT D'UNE ANALYSE Prélèvement de la solution à analyser Initialisation de l'appareil, affichage du clavier Injection et visualisation du chromatogramme et des spectres de masse en temps réel EXPLOITATION DES RÉSULTATS (ANALYSE QUALITATIVE) Récupération des chromatogrammes Identification des composés par comparaison avec les spectres de masse de la bibliothèque NIST Labellisation des pics : aire, hauteur, calcul du rapport signal/bruit (S/N) Quelques astuces Page (29)
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