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1 JOURNÉE R Vendredi 24 mai 2013 Le package XCMS pour l analyse de profils de chromatographie liquide spectrométrie de masse Séverine ZIRAH Muséum National d Histoire Naturelle, Département RDDM UMR 7245 CNRS -MNHN Molécules de communication et adaptation des micro-organismes (MCAM)

2 Couplage chromatographie liquide spectrométrie de masse (LC-MS) 1 Source Analyseur Détecteur vide poussé mbar Spectromètre de masse Abondance m/z

3 Couplage chromatographie liquide spectrométrie de masse (LC-MS) 1 Source Analyseur Détecteur vide poussé mbar Chromatographie liquide haute performance (HPLC) Spectromètre de masse

4 Couplage chromatographie liquide spectrométrie de masse (LC-MS) 1 Source Analyseur Détecteur vide poussé mbar Chromatographie liquide haute performance (HPLC) Spectromètre de masse

5 Couplage chromatographie liquide spectrométrie de masse (LC-MS) 1 Source Analyseur Détecteur vide poussé mbar Chromatographie liquide haute performance (HPLC) Spectromètre de masse

6 Comparaison de profils LC-MS 2 Profil des sels biliaires après incubation avec un surnageant bactérien Bile + milieu de culture Interaction entre Giardia lamblia et Lactobacillus johnsonii Collaboration Marie-Agnès Travers, CisséSow, Isabelle Florent, Philippe Grellier Bile + surnageant surnageant Lactobacillus johnsonii LA1 Giardia lamblia

7 Comparaison de profils LC-MS 2 Profil des sels biliaires après incubation avec un surnageant bactérien Bile + milieu de culture Interaction entre Giardia lamblia et Lactobacillus johnsonii Collaboration Marie-Agnès Travers, CisséSow, Isabelle Florent, Philippe Grellier Bile + surnageant surnageant Lactobacillus johnsonii LA1 Giardia lamblia ADC : Acide déoxycholique R=H [M-H] - : m/z391,2 AC : Acide cholique R=OH [M-H] - : m/z407,2

8 Comparaison de profils LC-MS pour la métabolomique METABOLOMIQUE Mesure quantitative de l ensemble des métabolites dans un système cellulaire sous des conditions données ceux qui sont détectables avec les méthodes analytiques utilisées. génome régulation des gènes TRANSCRIPTOMIQUE ENVIRONNEMENT PROTÉOMIQUE expression des protéines métabolisme MÉTABOLOMIQUE 3

9 Comparaison de profils LC-MS pour la métabolomique (2) Analyses LC-MS (1) Préparation des échantillons (3) Traitement des données (4) Analyse statistique name fold tstat pvalue mzmed rtmed npeaks Groupe1 Groupe2 Ech1 Ech2 Ech3 1 M268T E M532T M284T M641T Gr 1 Gr 2 (5) Identification des composés d intérêt biomarqueurs Recherche dans des bases de données Comparaison avec un standard Time, min Expériences MS/MS Isolement et caractérisation par d autres méthodes analytiques (RMN, IR..) 4

10 Exigences pour l analyses de données LC-MS n analyses LC-MS Matrice de données n k Chaque échantillon est caractérisé par le même nombre de variables Chacune de ces variables est représentée sur l ensemble des individus Une variable d un échantillon a la même signification biologique (représente le même métabolite) pour tous les autres échantillons Capacité de prédiction Somme sur le temps de rétention Alignement // Décomposition en fenêtres de temps 5

11 Le package xcms pour l analyse de données LC-MS et GC-MS n analyses LC-MS n individus répartis en 2 groupes Matrice des k pics (tr, m/z) avec les intensités pour chaque individu Analyse statistique Proposition de «biomarqueurs» Smith et al., Anal. Chem. 78: (2006) 6

12 Le package xcms pour l analyse de données LC-MS et GC-MS Smith et al., Anal. Chem. 78: (2006) 7

13 xcms: (1) détection des pics Smith et al., Anal. Chem. 78: (2006) 8

14 xcms: (2) correspondance des pics entre échantillons Smith et al., Anal. Chem. 78: (2006) 9

15 xcms: (3) correction des temps de rétention Smith et al., Anal. Chem. 78: (2006) 10

16 xcms: (4) remplissage des données de pics manquantes Smith et al., Anal. Chem. 78: (2006) 11

17 xcms: (5) analyse statistique : test t univariépour chaque pic 12 name fold tstat pvalue mzmed rtmed npeaks Groupe1 Groupe2 Ech1 Ech2 Ech3 1 M268T E M532T M284T M641T M639T M640T xcms: (6) visualisation des pics d intérêt Gr 1 Gr 2 Groupe1 Groupe2

18 Exemple : La cécidomyie du buis / Collaboration Michel Baylac Profil d extraits de feuilles buis attaqués ou non par des cécidomyies NA-1 NA-2 A-1 Conversion en format universel : NetCDF Répartition des fichiers NetCDF en dossiers par groupe Attaque Non attaque 13

19 xcms: Code R 14 cdffiles<-list.files(mydatadir,recursive=true,full.names=true) xset <- xcmsset(cdffiles) xset <- group(xset) xset2 <- retcor(xset,family="symmetric",plottype="mdevden") xset2 <- group(xset2) xset3 <- fillpeaks(xset2) reporttab <- diffreport(xset3, Attaque", Non attaque","example", 10, metlin = 0.15)

20 Choix de la gamme de temps de rétention 15 1 er échantillon de la série 3 (en rouge) et même échantillon lancé après les 86 runsde la série 3 (en noir) < 3000) head(idx)

21 Contenu de «diffreport» 16 name fold tstat pvalue mzmed rtmed npeaks Attaque Non attaque Ech1 Ech2 Ech3 1 M268T E M532T M284T M641T M639T M640T

22 ACP à partir de la matrice des pics 17

23 xcms Metlin 18 Scripps Center for Metabolomics and Mass Spectrometry

24 Autres packages dérivés de xcms Version «online» xcms2: analyse de spectres de fragmentation (MS/MS) interrogation de bases de données. metaxcms: comparaison de plus de deux classes d individus. Autres packages pour l analyse métabolomique CAMERA et Astream: annotation de données métabolomiques LC-MS. Alonso et al, Bioinformatics 27: (2011) Metabonomic: traitement des données + analyses multivariées(pcs, LDA, PLS ). Izquierdo-Garcíaet al,,bmc Bioinformatics 10: 363 (2009) MetabolAnalyze: analyses multivariées(ppca, PPCCA, MPPCA). Nyamundanda, G., Gormley, I.C. and Brennan, L. Probabilistic principal components analysis for metabolomic data. Technical Report. University College Dublin (2010) Metabolomics: fonctions graphiques : dendrogrammes, matrices de contrastes 2013) Metab: pré-traitement de données GC-MS. Agio et al, Bioinformatics 27: (2011) 19

25 Bases de données Metlin metabolite Database (Données MS) ChemSpider (Données MS) Human Metabolome Database KNApSAcK (Métabolites de plantes) BioMeta Database (Voies métaboliques) BiGG(Biochemically, Genetically and Genomicallymetabolic network reconstructions) Biocyc (Collection de voies métaboliques/génomes) Ecocyc (Gènes et Métabolisme de Escherichia coli K-12) Metacyc (Voies métaboliques) 20

26

27 Profils LC-MS pour la métabolomique GENOME REGULATION DES GENES Transcriptomique EXPRESSION DES PROTEINES ENVIRONNEMENT METABOLISME Métabolomique HO O O O H N OH O OH O Acide hippurique OH OH Acide citrique Protéomique

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