Ingénierie cellulaire et tissulaire: Bonnes Pratiques de fabrication et Etablissements autorisés

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1 Ingénierie cellulaire et tissulaire: Bonnes Pratiques de fabrication et Etablissements autorisés 1- Les outils/procédés 2- Les règles de production et de libération des Produits de thérapie cellulaire et tissulaire 3- Organisation d une banque 4- Les dossiers procédés Dr Marie Jeanne RICHARD Responsable Unité de Thérapie Cellulaire UMTCT (CHU-EFS) GRENOBLE 1

2 INTRODUCTION BIOTHERAPIES Définition des biothérapies : méthodes thérapeutiques fondées sur l emploi d organismes vivants (levures, ferments, ) ou de substances prélevées sur des organismes vivants (hormones, extraits d organes,..) ou utilisant des médicaments dérivés de molécules biologiques naturelles (Active Pharmaceutical Ingredient) Exemple de biothérapies: Protéines-médicaments : insuline, érythropoïétine, hormone de croissance, cytokines, interférons. Cellules-médicaments (somatiques, embryonnaires.) Ingénierie tissulaire Thérapie génique 2

3 Thérapie cellulaire et génique Toutes cellules préparées, transformées, ou conservées (quelque soit leurs origines humaines, ou animales) pour être administrées sous forme d une préparation qualifiée (caractéristiques définies) dans un but curatif ou préventif d une pathologie (prescription nominative). 3

4 Thérapie Tissulaire Méthode thérapeutique utilisant des tissus c est à dire des éléments prélevés sur le corps humain (le plus souvent allogreffe) que sont notamment la cornée, les os, les éléments de l appareil locomoteur, les valves cardiaques, les vaisseaux, la peau, les chaines ossiculotympaniques, les tissus endocriniens Les xénogreffes (tissus d espèce différente) Hors champ la greffe d organe (coeur, rein,.) 4

5 Ingénierie cellulaire et tissulaire Développement ++ Passage Cellules Tissus Développement des techniques de cultures cellulaires Système clos, protéines GMP Développement des connaissances sur les cellules souches cellules souches adultes cellules souches embryonnaires Développement des biomatériaux Evolution des biothérapies vers une médecine régénérative pathologies du cartilage et de l os angiogénèse et insuffisance cardiaque diabète pathologies musculaires maladies neurodégénératives 5

6 I-Ingénierie Cellulaire/Tissulaire: Quels procédés? Utiliser (autant que possible) des systèmes clos du matériel marqué CE des dispositifs médicaux marqués CE des réactifs ayant une autorisation «Produits thérapeutiques Annexes» (PTA) ou une «Autorisation de mise sur le marché» (AMM) 6

7 Activités de préparation Transformation physique Sélection Réduction de volume, désérythrocytation, déplasmatisation, lyophylisation-déshydratation, congélation Sélection sur ficoll, sélection mmunomagnétique, élutriation Expansion, différentiation, encapsulation Expansion ex vivo, Différenctiation Préparation de Thérapie cellulaire génétiquement modifiée Ou PTC-GM 7

8 CRYOCONSERVATION Conservation long terme Addition cryoprotecteur: DMSO (diméthylsulfoxide) Milieu enrichi en macromolécules : HES, albumine. Descente en température dans appareil programmable Température Phase liquide Phase de transition Surfusion Phase solide Temps 8

9 MINIATURISATION: Congélation des Unités Sang Placentaires Permet le stockage à long terme des USP - désérythrocytées - sous un faible volume, - à un coût moindre, Mais au prix d une perte cellulaire de 15 à 20% plasma Buffy coat Exemple: Miniaturisation par le système SEPAX 9

10 SELECTION 1 Propriétés physiques: Taille, granulosité 2 Propriétés fonctionnelles: adhérence, milieu 3 Immuno sélection: ex: tri des cellules CD34+ Elutriation (greffe haploidentique) Sélection positive Déplétion 10

11 Maturation, Sélection, Activation Obtention de Cellules Dendritiques DC produites sous une norme BPF Pour une utilisation thérapeutique Procédé d élutriation Cytaphérèse GM-CSF/IL-13 (7j) DC immatures Monocytes Elutriation IFN-g/Ribomunyl + KLH Injection Chargement - lysat tumoraux (IDM) - peptides (NANTES) Maturation DC matures DC matures chargées

12 AMPLIFICATION Choix du système clos (sacs, cassette), semi-clos (flacons bioréacteurs) ouverts (boite de pétri) Système de Culture - Cassettes: passage à l échelle clinique - milieu conditionné en poche pour assurer une culture en système clos - cytokines recombinantes 12

13 II- Les Bonnes Pratiques arrêté du 16 décembre 1998 : Bonnes Pratiques de prélèvements, de transport, de transformation et de conservation des cellules souches hématopoïétiques issues du corps humain et des cellules mononucléées sanguines utilisées à des fins thérapeutiques. arrêté du 29 décembre 1998 : Bonnes Pratiques relatives à la conservation, à la transformation et au transport des tissus d origine humaine utilisés à des fins thérapeutiques. arrêté du xx 2010???: Bonnes Pratiques Tissus Cellules 13

14 Principes généraux Description d un ensemble de méthodes à mettre en œuvre concernant : le personnel les locaux le matériel les activités le contrôle de la qualité transport, conditionnement, étiquetage la documentation et les systèmes informatisés la gestion des non conformités, réclamations et biovigilance Elles garantissent que les tissus et cellules sont préparés, contrôlés, conservés selon des normes de qualité Elles s appliquent tout au long de la chaîne du prélèvement à la distribution 14

15 Aspects Réglementaires en thérapie cellulaire ou tissulaire Se déclinent selon 4 grands items Prélèvements (organes, tissus, cellules) Production Greffes Biovigilance 15

16 Règles de production 1-Prélèvements Informations sur l origine des prélèvements et conditions de prélèvement : type de donneur (vivant, décédé) consentement (ou absence d opposition) procédure de prélèvement : qui prélève? modalités techniques du prélèvement (désinfection,..) type de matériel et réactifs conservation Étiquetage et transport (milieu de transport validé) documents d accompagnement et traçabilité

17 Aspect réglementaire Prélèvements Tissus, Cellules Donneurs Donneur vivant (ex: moelle, CSP, sang de cordon, os,..) Donneur en état de mort encéphalique (PMO) (ex: tissus, peau, foie, pancréas,...) Donneur décédé (PPM) (ex: cornées ) Les prélèvements sont strictement légiférés Loi du 06 août 04: loi relative à la bioéthique Circulaire du 04/04/07: décrit intervention de l autorité judicaire Décret du 10/05/05: prélèvements organes et moelle Loi du 01/04/97: BP relatives au prélèvement tissus et résidus opératoires Arrêté du 27/02/98: BP relatives au prélèvements d organes Le don non apparenté est volontaire, gratuit et anonyme 17

18 Don de Cellules souches hématopoïétiques périphériques Geste médical Donneur = donneur éligible Sécurité ++++ des procédures 18

19 Règles de production 2- Réception, Transformation (1) Description de chaque étape de préparation, et de conservation: réception : conformité du transport (température) conformité de l emballage conformité de l étiquetage Preuve du recueil du consentement (don, prélèvements sanguins, usage scientifique, conservations de données médicales qualification biologique Renseignements cliniques Rapport d autopsie Sérologie.. 19

20 Règles de production 2- Réception, Transformation (2) Description de chaque étape de préparation, et de conservation: Contrôles préalables à la transformation Contrôles de l environnement Vérification des dispositifs et réactifs entrant en contact avec le produit Etapes de transformation : étapes de décontamination centrifugation, sélection, cultures ; préparation à la congélation (ou à la conservation) congélation (enregistrement) étapes de viro inactivation Décongélation.. 20

21 Règles de production 3- Conservation et Stockage Définitions des modalités de stockage de façon à préserver le produit («maintien de leur qualité fonctionnelle, et empêchant toute contamination ou dégradation secondaire») Suivi de la température et enregistrement continu Alarmes reportées Descriptions des modalités de «repli» et de «mode dégradé» Séparation des produits conformes/non conformes Définition des étapes de validation des durées de conservation 21

22 4- Renseignements relatifs aux matériels et produits utilisés Tout matériel doit être qualifié, et faire l objet d un entretien et d une maintenance Des modes opératoires et des fiches techniques décrivent les opérations de qualification. Une traçabilité de l ensemble des opérations est exigée Tout type de matériel entrant en contact avec les produits doit avoir été validé pour l utilisation qui en est faite exemple : les contenants poches, tubes,.. 22

23 5- Les Produits thérapeutiques annexes Définition: Produit entrant en contact avec des organes tissus ou cellules ou produits issus du corps humain ou d origine animal.avant leur utilisation thérapeutique chez l homme Exigences et réglementation: Ces PTA doivent répondre à des spécifications «similaires» à celles attendues pour les médicaments. Arrêtés et décrets du 19 août 2004 Les Produits Thérapeutiques Annexes doivent être validés pour l usage qui en ait fait: origine des PTA (ex : sérum de veau fœtal, collagénase ) mode de préparation produits entrants dans la fabrication (ex: origine des Acides Aminés, cytokines ) Mise en place d un contrôle à réception Intégrité emballage, présence d un certificat de conformité (analyse chimique et physique, endotoxines, tests microbiologiques, mycoplasmes, test de contamination virale Pour certains PTA: mise en place d un contrôle qualité (test de croissance, test 23 d activité enzymatique)

24 6- Règles d Etiquetage: traçabilité, sécurité Très développées et très précises dans les nouvelles BP Identification des produits conformes ET des produits en quarantaine ou non conformes étiquetage différent et lieu de stockage identifié Etiquetage du conditionnement Iaire et II aire du produit anonymisation / code du donneur «élément ou produit du corps humain» nature et description Date et heure prélèvement Etiquetage du colis ou récipient de transport Du prélèvement ou du produit intermédiaire Du produit fini 24

25 7- Modalités de Distribution, Cession, Distribution Après vérification du certificat de validation finale Sur ordonnance nominative Document d accompagnement informations contenues sur l'étiquette résultats des examens sérologiques renseignements cliniques identité du receveur date limite de conservation modalités d utilisation: posologie, décongélation. Traçabilité de la greffe date d implantation, et nom du patient 25

26 8- Suivi des greffes, Biovigilance Décret du 12 décembre 2003 Objet: surveillance des incidents et des risques relatifs aux éléments et produits du corps humain utilisés en thérapeutique (sauf gamètes, produits sanguins labiles)..la culture positive de l erreur Comporte: signalement de tout incident dû aux produits ou aux activités concernant ces produits (prélèvement, préparation, conservation, greffe ) Déclaration à l AFSSAPS et information à l ABM Obligation de signalement par les professionnels de santé Nomination de Correspondants locaux de biovigilance 26

27 9- Documents et Données; Système informatique et archivage Un dossier de lot du PTC fini doit être établi Archivage (locaux sécurisés, protégés) Dans la directive européenne et nouvelles BP: durée 30 ans après greffe Autres documents relatifs à l activité : 10 ans Systèmes informatisés Un système informatique validé assure la traçabilité du PTC Le système informatisé est sécurisé (locaux, gestion des accès et des modif du système, pérennité des données ) Déclaration CNIL et confidentialité des données Archivage pérenne des données informatisées 27

28 10- Contrôle de la Qualité des produits Objectifs: assurer que le produit proposé est conforme aux spécifications attendues pour répondre aux indications thérapeutiques assurer que les procédés utilisés sont sécurisés et ne modifient pas les propriétés des produits thérapeutiques finis Description des méthodes de contrôles Définir les modalités et le plan d échantillonage Définir les méthodes utilisées : doivent avoir fait la preuve de leur intérêt et répondre aux attentes Validation des méthodes de contrôle Etalonnage, CQ interne/externe; limites et interprétation Contrôles qualités fonction du PTC Établir des algorithmes décisionnels 28

29 10- Contrôles Qualités des produits (suite) définir les spécifications pour chaque type de tissus et de cellules : exemple pour les cellules : nbre de CD34+ /kg nbre de CD3+ /kg exemple pour les tissus densité endothéliale pour les cornées résultats bactériologiques définir des procédures dégradées en cas de besoin : cellules souches autologues cornées avec densité endothéliale < 2000/ mm2 peau avec contamination bactérienne 29

30 LA SECURITE SANITAIRE: Critères d acceptation ou de rejet des tissus et des cellules A l'occasion de tout prélèvement d organe, de tissus ou de cellules, il est obligatoire de rechercher chez le ou les donneurs les marqueurs d infection suivants : infection par les virus VIH 1 et 2 (Ac anti HIV (2tech)+Ag p24 ou ARN) HTLV 1 et 2 hépatite B (Ag HBs et Ac anti HBc) hépatite C Syphilis EBV Toxoplasmose CMV Pour cellules à usage allogénique Tout résultat positif entraîne destruction SAUF dérogations spécifiques Pour tout PTC fini la banque doit faire la preuve de l absence de contaminants (bactéries, champignons). Des recherches spécifiques peuvent être requises (mycoplasmes, endotoxines ) 30

31 LA SECURITE SANITAIRE (suite): Quarantaine : temps défini par arrêté (non encore paru); fonction type de greffe et de durée de conservation Directive européenne: 180 jours ou DGV Traitement d inactivation virale peut être appliqué Sérothèque donneur obligatoire (modalités texte en attente) Biothèque cellules obligatoire 31

32 11- Le Dossier de lot: Qui? Quoi? Où? Quand? Comment? Traçabilité du prélèvement et du don Traçabilité de l ensemble des étapes ayant conduit au PTC fini Traçabilité du stockage Traçabilité des contrôles qualités Certificat de libération validé par le Responsable d activités au vu des spécifications du produit Traçabilité de la greffe et biovigilance s il y a lieu Traçabilité des responsabilités techniques et médicales 32

33 III-Les établissements autorisés exemple d organisation d une «banque» au sens de la directive européenne 2004/23/CE Et 2006/86/CE = tissus et cellules 33

34 Autorisation de banque délivrée par l AFSSAPS Décret du 16/09/2008 relatif aux conditions d autorisation des activités portant sur les tissus et leurs dérivés, les préparations de thérapie cellulaire, de thérapie génique et de thérapie cellulaire xénogénique, et aux conditions d autorisation de ces produits. (application des directives européennes 2004/23 et 2006/86) 34

35 Dépôt de dossier à l AFSSAPS (DIE) Demande d autorisation faite par la personne morale Demande à faire pour chacun des sites de cet établissement Autorisation sollicitée pour chaque activité (tissus ou cellules concernées) Dépôt du dossier par établissements publics ou organismes autorisés à conserver, transformer,. Autorisation accordée pour une banque donnée pour une activité définie 35

36 A- Personne Responsable (1) Personne responsable: s assure du respect de la réglementation relative à la qualité et à la sécurité des produits (nomme un PR intérimaire) Personne responsable des activités agit sous l autorité de la personne responsable Médecins référents membre du comité médicotechnique 36

37 A- Personnel (2) Organigramme Responsable d activités Responsable de la production Responsable des contrôles qualité Responsable administratif (met en place les règles financières, comptabilité analytique,..) Responsable Assurance Qualité Personnel qualifié en quantité ad hoc Indépendance Production/Contrôle Qualité 37

38 B- Les locaux, et environnement (1) Maîtriser l environnement Assurer que les cellules ou tissus ont été manipulés dans le respect des plus hauts standards de qualité et de sécurité Présence de zones adaptées (dans un même lieu) Zone de réception, Zone de préparation (atmosphère contrôlée) Zone de stockage (alarmes et reports ), avec des zones séparées pour les tissus en quarantaine et les tissus validés Zone de distribution 38

39 Les locaux, l environnement (2) Identification des différentes zones à accès contrôlé: Sas d entrée, sas d habillage Laboratoires pour la manipulation des cellules, des tissus, stockage Circuits logiques: produits, personnel, déchets Protection environnement, personnel et produit habillage: Gants, blouses, masques, champs de travail protection du personnel (contre les risques biologiques) protection des produits (contre la contamination) Poste de sécurité microbiologique (PSM de type II= classe 100) Elimination des déchets 39

40 Les locaux, l environnement (3) Salles blanches classées en fonction du niveau d empoussièrement ( qualification selon norme ISO ) classe Particules 0,5µm /m 3 repos (activités) Particules 5µm /m3 repos (activités) A (100) iso (3520) 20 (29) B (1000) iso (352000) 29 (2900) C ( ) iso 7 et ( ) 2900 (29000) D ( ) (ND) (ND) Qualification opérationnelle et de performance 40

41 Les locaux, l environnement (5) Voir les périodicités dans les nouvelles BP Nettoyage des locaux : personnel formé au nettoyage des salles blanches Contrôles de l environnement : mesures des pressions et de l aérobiocontamination Contrôles microbiologiques des surfaces de façon inopinée, en activité par un laboratoire indépendant recherche de microorganismes d origine humaine ou non contrôles des sols, guichets, portes, murs, PSM, paillasses... 41

42 C- Contrôle du matériel Points exigés par la réglementation : Identification Qualification, contrôles Entretien: maintenance, nettoyage Appareils de stockage: Réfrigérateurs, congélateurs, étuves : alarme, contrôles réguliers Cryoconservateurs : alarme, système de télésurveillance Autres appareils: Trieurs de cellules, compteurs de cellules : contrôles réguliers Irradiateur Balances. 42

43 D- Exigences réglementaires concernant le personnel Personnel formé, informé: Habilitation à un poste de travail Formation initiale et continue Traçabilité des formations Rigueur technique: gestuelle opératoire Le plus grand «danger» : la dérive des pratiques. Les bonnes pratiques ne sont jamais «visibles», les mauvaises sont toujours sanctionnées 43

44 E- Les méthodes de travail Organigramme (qui fait quoi?) Procédures, modes opératoires (comment et où), feuille d enregistrement (preuves tangibles) Accessibles, claires, écrites par le personnel Mises à jour, validées Pas de qualité sans planification Planification du travail, de la maintenance Planification du contrôle d environnement 44

45 F- la structure documentaire Prélèvement Traitement des cellules ou tissus Tri, amplification, cryoconservation Contrôles de qualité Fiche de prélèvement, fiches de transport, fiches de suivi, organigramme décisionnel Procédures, MOP, Enregistrements, Fiches de liaison Demande d un greffon Fiches de prescription nominative Délivrance du produit Fiches de qualifications (spécifications) Fiches de distribution du produit 45

46 G- Autres points à documenter équipement informatique permettant d assurer la traçabilité comité médico technique dépôts (possibles dans ES pour tissus) doivent être autorisés (procédures, suivi stockage, traçabilité ) 46

47 47

48 48

49 Laboratoire tissu classe Sas personnel Sas différents pour matériel Produit, déchets Labo cellule Classe Labo tissus Classe

50 Tenue de travail: - Combinaison avec cagoule (et charlotte) - gants - sabots ou surchausses

51 51

52 Zone de cryoconservation 52

53 53

54 Processus d autorisations Demande d autorisation Recevabilité Instruction technique 2 m Dossier complet Inspection Dossier incomplet Complément d informations Deux experts rapporteurs Commission d experts : avis Décision du DG Autorisation Rejet de la demande 6 m 54

55 IV- Autorisations de procédés Décret n du 2 septembre 2002 relatif aux conditions d autorisation des procédés de préparation des tissus Décret n du 1er octobre 2001 fixant les conditions d autorisation des procédés de thérapie cellulaire 55

56 Quels Items? Renseignements concernant le procédé Identification des étapes de transformation, stockage Identification des étapes critiques et management de ces étapes Renseignement concernant le produit et la Substance active Matières premières Matériel et réactifs Produits intermédiaires Produit fini Contrôles de Qualité Spécifications des PTA Stabilité produit fini/ produit décongelé (description des contrôles et résultats) Données précliniques et documentation toxicologique Données cliniques justifiant l utilisation du produit Données de suivi des patients greffés 56

57 Processus d autorisation procédé Demande d autorisation Recevabilité Instruction technique Dossier complet Dossier incomplet Complément d informations Deux experts rapporteurs Commission d experts : avis Décision du DG Autorisation Rejet de la demande 57

58 V-Importations, Exportations Décret du 23 février 2000 Décret du 02/09/2008 fixant les modalités d importation/exportation des produits du corps humain nécessité d être déjà banque autorisée sur le territoire national pour le tissu concerné responsabilité de la banque +++, et notamment sur les conditions de prélèvements (respect volonté du donneur, anonymat et gratuité) sur le respect des règles de sécurité sanitaire françaises... 58

59 Les Directives Européennes Directive 2004/23 relative à l établissement de normes de qualité et de sécurité pour le don, l obtention, le contrôle la transformation, la conservation, le stockage et la distribution des tissus et cellules humaines Directive 2006/ 86 concerne les exigences de la traçabilité, la notification des réactions et incidents indésirables graves, ainsi que certaines techniques relatives à la codification, à la transformation, à la conservation, au stockage et à la distribution des tissus et cellules humaines Directive 2006/17 concerne exigences techniques relatives au don, à l obtention et au contrôle des tissus et cellules d origine humaine Règlement (CE) N 1394/2007 concernant les médicaments de thérapie innovante et modifiant directive 2001/83/CE ainsi que règlement (CE) N 726/

60 Autres guidelines et agences importantes +++ pour obtenir AMM Europe et USA Pharmacopée européenne EMEA agence européenne pour l évaluation des médicaments CHMP: committee for medicinal products for human use CHPM/ Working Party Biologics Working Party (BWP) Blood Products Working Party (BPWP) Cell-based Products Working Party (CPWP) Efficacy Working Party (EWP) Gene Therapy Working Party (GTWP) Vaccine Working Party (VWP) Food Drug Administration (FDA) 60