QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA Uniquement pour Diagnostics In-Vitro Complexité de CLIA: Haut
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- Jean-Pierre Duval
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1 QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA Uniquement pour Diagnostics In-Vitro Complexité de CLIA: Haut Application L actine F de QUANTA Lite TM est un dosage immunoenzymatique conçu pour la détection semi-quantitative des anticorps IgA réagissant à l actine F du muscle lisse dans le sérum humain. Chez les patients dont les résultats cliniques sont en ligne avec un diagnostic de maladie cœliaque, la présence d IgA anti-actine F peut contribuer à l évaluation de la probabilité d une atrophie significative des villosités intestinales. Informations concernant le test Les anticorps anti-actine F constituent le principal élément de ce qui a été désigné sous le nom d anticorps anti-muscle lisse. Ces anticorps présentent une spécificité à l égard de la composante actine F du cytosquelette et sont traditionnellement détectés par immunofluorescence indirecte au moyen de fines sections de foie de rongeurs. 1-3 Les anticorps anti-muscle lisse dirigent leur action contre plusieurs composantes, dont la plus importante est l actine F ; ceci dit, la méthode par immunofluorescence peut également détecter les anticorps à la tubuline et aux filaments intermédaires. 4,5 Chez les patients atteints d hépatite chronique active auto-immune, la réactivité anti-muscle lisse reflète avant tout la présence d anticorps anti-actine F tandis que, dans des affections virales telles que la mononucléose infectieuse, l hépatite virale, la rougeole et les oreillons, la réactivité anti-muscle lisse est due à une réactivité contre les antigènes cytoplasmiques non actine F. 4-8 La présence d anticorps IgG anti-actine F a été rapportée dans 52 à 85 % des patients atteints d hépatite chronique active auto-immune et dans 22 % des patients atteints de cirrhose biliaire primitive. 7-9,12-16 La présence d anticorps IgG anti-actine F a été rapportée (généralement, avec des titrages faibles) dans 3 à 18 % des sérums prélevés dans la population générale saine. 17 Contrairement aux anticorps IgG anti-actine F qui sont caractéristiques des patients souffrant d hépatite chronique active auto-immune, la présence d anticorps IgA anti-actine F est cliniquement significative chez les patients affectés de maladie cœliaque. Des études récentes ont montré que les anticorps IgA à l actine F présentaient une forte corrélation avec les degrés d atrophie des villosités intestinales relevés dans les cas de maladie cœliaque Clemente et al, employant un dosage immunoenzymatique (IFA) pour la détection des anticorps IgA anti-actine F sur des entérocytes spécialement traités, ont relevé que 98,2 % des cas de maladie cœliaque avec muqueuse plane, 89 % des patients avec atrophie villeuse subtotale, 30 % des patients avec atrophie villeuse partielle et 0 % des contrôles négatifs pour la transglutaminase endomysiale/de tissu étaient positifs aux anticorps IgA anti-actine F. 25 Pedreira, S. et al. ont rapporté que 95 % des cas non traités de maladie cœliaque présentaient des valeurs accrues pour les anticorps IgA antiactine F par rapport aux contrôles normaux. 23 Ce groupe a également trouvé une corrélation entre un titrage élevé d anticorps anti-actine F et des lésions intestinales plus importantes. Les anticorps IgA anti-actine F diminuent suite à l institution d un régime sans gluten, suggérant que la mesure de ces anticorps pourraient être utile au monitorage de l observation d un régime sans gluten. 22 Les procédures par immunofluorescence pour la détection des anticorps anti-actine F ou anti-muscle lisse sont subjectives : leurs performances dépendent du type de tissu utilisé, de la spécificité du conjugué, de la force de l appareil de microscopie employé pour lire le résultat et du degré d expertise de l observateur. Les dosages immunoenzymatiques pour la détection des anticorps anti-actine F, annoncés pour la première fois au milieu des années 1980 et au début des années ,5,7,8, présentent des performances potentiellement plus uniformisées, techniquement moins exigeantes et plus facilement automatisables. 7,9-12 Principe du test L antigène F-actin extrait du thymus de veau est purifié et fixé sur les puits d une plaque de microtitration en polystyrène dans des conditions qui préservent son état natif. Les contrôles pré-dilués et les sérums de patients dilués sont ajoutés dans différents puits. Une étape d incubation permet la liaison entre les anticorps F-Actin IgA présents dans le sérum et l antigène immobilisé dans le puits. Les molécules non liées aux antigènes sont éliminées par lavage. Un conjugué enzymatique anti-iga humaine est alors ajouté dans chaque puits pour révéler les auto-anticorps du patient. Après une étape d incubation, le conjugué non fixé est éliminé par lavage. L activité enzymatique résiduelle est quantifiée grâce à l addition d un substrat chromogène suivie d une étape de mesure de l intensité de la coloration ainsi développée. Les résultats peuvent être évalués par comparaison entre la couleur du puits échantillon et celle des puits de contrôle. Contenu du coffret 1. Plaque de microtitration ELISA revêtue d antigène F-Actin portoir de 12 barrettes de 8 puits en polystyrène sécables, dans un sachet d aluminium avec un dessiccant 2. Contrôle Négatif pré-dilué, 1 flacon de 1,2 ml de sérum humain sans anticorps humains F-Actin IgA, dans du tampon avec du stabilisateur 3. Contrôle ELISA F-Actin IgA faiblement positif pré-dilué, 1 flacon de 1,2 ml de sérum humain avec des anticorps humains F-Actin, dans du tampon avec du stabilisateur 4. Contrôle ELISA F-Actin IgA fortement positif pré-dilué, 1 flacon de 1,2 ml de sérum humain avec des anticorps humains F-Actin, dans du tampon avec du stabilisateur 5. Diluant d échantillons HRP, teinté en rose, 1 flacon de 50 ml contenant du tampon Tris salin, du Tween 20, des stabilisateurs de protéines et des conservateurs 6. Tampon de lavage HRP concentré 40X tampon Tris salin avec du Tween 20, teinté de rouge, 1 1
2 flacon de 25 ml. Consulter le paragraphe Méthode pour la dilution. 7. Conjugué IgA-HRP, anticorps de chèvre anti-iga humaines dans du tampon avec des stabilisateurs de protéines et des conservateurs, teinté en jaune, 1 flacon de 10 ml 8. TMB Chromogène, avec stabilisateurs, 1 flacon de 10 ml 9. Solution d arrêt HRP, acide sulfurique 0,344M, non teinté, 1 flacon de 10 ml Avertissements 1. ATTENTION: Le diluant des échantillons, les contrôles et le conjugué contiennent 0,02% de chloramphénicol, considéré comme cancérigène dans l état de Californie. 2. Tout le matériel d'origine humaine utilisé pour la préparation des contrôles a été testé et trouvé négatif lors de la recherche d'anticorps anti-vih, anti-antigène de surface de l'hépatite B et anti-virus de l Hépatite C à l'aide de tests approuvés par la FDA. Cependant, aucune méthode ne peut donner une garantie complète quant à l'absence de VIH, VHB, du VHC ou d'autres agents infectieux. En conséquence, tous les sérums humains de contrôle doivent être manipulés avec les mêmes précautions que celles utilisées pour un matériel potentiellement infectieux L azide de sodium (NaN 3 ) est utilisé comme conservateur. NaN 3 est un poison et il est toxique en cas d ingestion et de contact avec les yeux et la peau. Eviter de l exposer aux bases, métaux ou autres composants, réagissant avec les acides. Après l évacuation des réactifs, laver à grande eau afin d éviter des dépôts dans les canalisations. 4. Le conjugué Peroxydase HRP contient un composant chimique dilué qui est un poison corrosif, toxique en cas d'ingestion en grande quantité. Pour éviter des brûlures chimiques, il est recommandé d'éviter tout contact avec la peau ou les yeux. 5. Le chromogène TMB est irritant et peut être toxique en cas d'inhalation, d'ingestion et d absorption en grande quantité. Eviter tout contact avec la peau ou les yeux et toute inhalation. 6. La solution d'arrêt HRP est une solution diluée d'acide sulfurique. Eviter de l exposer aux bases, aux métaux, aux oxydants ou tout autre composé susceptible de réagir avec les acides. L acide sulfurique est toxique et corrosif en cas d absorption. Eviter le contact avec la peau et les yeux pour éviter toute brûlure chimique. 7. Lors de la manipulation de ces produits, utiliser les équipements de protection personnelle appropriés. 8. Les éclaboussures de réactifs doivent être nettoyées immédiatement. Respecter les règlements en vigueur concernant l élimination des déchets. Précautions 1. Ce test est pour un usage diagnostic in vitro. 2. Toute substitution par d autres réactifs que ceux fournis dans le coffret entraîne des variations de résultats. 3. Un lavage incomplet ou insuffisant et une aspiration insuffisante du liquide dans les puits d ELISA entraînent des imprécisions et un bruit de fond élevé. 4. L automatisation, complète ou partielle, du traitement des échantillons dans ce test peut produire des différences de résultats par rapport au traitement manuel. Chaque laboratoire est responsable de la validation des procédures automatiques afin que les résultats des tests restent dans les limites acceptables. 5. Un certain nombre de facteurs influencent la performance du test: la température initiale des réactifs, la température ambiante, l exactitude et la reproductibilité de la technique de pipetage, la qualité du lavage et de vidange des puits d ELISA, le photomètre utilisé pour mesurer les résultats et la durée des temps d incubation pendant le test. Il est donc recommandé de prêter attention à tous ces facteurs pour obtenir des résultats reproductibles et rigoureux. 6. Il est recommandé de suivre strictement le protocole. Chaque modification est au risque de l utilisateur. 7. La fermeture incomplète de la pochette contenant les puits de microtitration et le dessiccant entraîne la dégradation de l antigène et en conséquence une mauvaise précision des résultats. 8. Des valeurs faibles et inacceptables d absorption peuvent être progressivement observées dès le deuxième prélèvement dans le même flacon de conjugué HRP. Il est donc important de suivre exactement les instructions fournies pour éviter ce risque. 9. Un nettoyage ou rinçage inapproprié des appareils et instruments pourrait provoquer une contamination chimique du conjugué HRP. Des résidus de produits chimiques courants de laboratoire comme le formol, l eau de javel, l éthanol ou les détergents, entraînent la dégradation progressive du conjugué HRP. Il est absolument recommandé de rincer abondamment tous les instruments et appareils après l utilisation des détergents chimiques. Conditions de conservation 1. Conserver tous les réactifs du coffret entre 2-8 C. Ne pas congeler. Les réactifs sont stables jusqu à la date limite d utilisation dans des conditions de stockage et d utilisation conformes. 2. Les puits non utilisés devront être remis dans l emballage en aluminium avec le dessiccant, bien refermé et stocké à 2-8 C. 3. La solution de tampon diluée reste stable une semaine à 2-8 C. Echantillons Ce test doit être réalisé avec des sérums comme échantillons. L addition d azide ou d autres conservateurs aux échantillons peut affecter le bon déroulement de la procédure. Les sérums contaminés par des agents microbiens, prétraités par la chaleur ou contenant des particules visibles ne doivent pas être utilisés. Les 2
3 sérums ou échantillons hémolysés ou lipémiques sont à éviter. Après prélèvement, le sérum doit être séparé du culot. Le document H18-A3 du NCCLS recommande les conditions suivantes de conservation: 1) Conserver les échantillons à température ambiante pas plus de 8 heures. 2) Si le test ne peut pas être fait dans les 8 heures, conserver les échantillons à 2-8 C. 3) Si le test ne s effectue pas dans les 48 heures ou si on doit envoyer les échantillons, les congeler à 20 C ou à plus basse température. Bien agiter les échantillons décongelés. 29 Procédure Matériel fourni 1 Plaque de microtitration ELISA F-Actin (12-1 x 8 puits), avec support 1 1,2 ml Contrôle ELISA Négatif pré-dilué 1 1,2 ml Contrôle ELISA faiblement positif F-Actin IgA pré-dilué 1 1,2 ml Contrôle ELISA fortement positif F-Actin IgA pré-dilué 1 50 ml diluant HRP pour échantillons 1 25 ml tampon de lavage HRP concentré 40X 1 10 ml conjugué anti-iga humaines de chèvre 1 10 ml substrat TMB 1 10 ml solution d arrêt HRP (acide sulfurique 0,344M) Autre matériel nécessaire non fourni Pipettes 5, 100, et 500 µl Cônes jetables Tubes de 4ml pour la dilution de sérum Eau distillée ou déionisée Récipient de 1 litre pour le tampon de lavage HRP dilué Lecteur ELISA avec filtre de 450nm (et 620nm pour les lectures à double longueur d ondes) Méthode Préparation du test 1. Porter tous les réactifs et échantillons à la température ambiante (20-26 o C) et bien les mélanger avant de les utiliser. 2. Diluer la totalité de la solution de lavage (25ml) avec 975 ml d eau distillée (1/40). La solution de tampon diluée reste stable une semaine à 2-8 C. Si la totalité de la plaque de microtitration n est pas utilisée en une seule fois, un plus petit volume de tampon sera suffisant, par exemple pour traiter 16 puits, diluer 2ml de tampon concentré dans 78ml d eau distillée ou deionsée. 3. Préparer les sérums des patients en les diluant au 1/101 dans le diluant d échantillon (5µl dans 500µl). Les sérums doivent être utilisés dans les 8 heures qui suivent leur dilution. Ne pas diluer les contrôles ELISA fortement positif, faiblement positif en F-Actin IgA et négatif. 4. La détermination de la présence ou de l absence de la F-Actin en unités arbitraires nécessitent deux puits pour chacun des trois contrôles et un ou deux puits pour chacun des sérums de patients. Il est recommandé de tester les échantillons en double. Exécution du test 1. PORTER TOUS LES REACTIFS ET LES ECHANTILLONS À TEMPERATURE AMBIANTE (20-26 o C) AVANT DE LES UTILISER. Placer le nombre nécessaire de micro puits ou de barrettes sur le portoir. Remettre immédiatement les barrettes non utilisées dans la pochette en aluminium avec le dessiccant, fermer hermétiquement pour éviter toute condensation de vapeur d eau. 2. Distribuer 100 µl de chacun des contrôles ELISA fortement, faiblement positifs en F-Actin IgA et négatif pré-dilués et de sérums des dilués patients dans les puits. Recouvrir les barrettes et laisser incuber pendant 30 minutes à température ambiante. Le temps d incubation commence après l ajout du dernier échantillon. 3. Lavage: aspirer le contenu de tous les puits. Ajouter µl de tampon dilué dans tous les puits et l aspirer ensuite complètement. Répéter cette opération deux fois supplémentaires pour un total de trois lavages. Après le dernier lavage, retourner la plaque en la tapotant sur du papier absorbant, pour enlever tout liquide de lavage résiduel. Pour l'aspiration, maintenir la même séquence que celle utilisée lors de la distribution des échantillons. 4. Distribuer 100 μl de conjugué HRP IgA dans chaque puits. Le conjugué doit être prélevé du flacon dans des conditions aseptiques. Prélever en une seule fois la quantité de conjugué nécessaire à la réalisation de la série. POUR EVITER LE RISQUE DE CONTAMINATION, NE JAMAIS REMETTRE LE RESTE DU CONJUGUE NON UTILISE DANS LE FLACON. Recouvrir les barrettes et incuber pendant 30 minutes à température ambiante, comme décrit à l étape Lavage: Répéter la procédure décrite à l étape Distribuer 100 µl de chromogène TMB dans chaque puits et laisser incuber à l obscurité 30 minutes à température ambiante. 7. Ajouter 100 µl de solution d arrêt HRP dans chaque puits. Maintenir la même séquence et le même timing lors de l addition de la solution d arrêt que ceux utilisés lors de la distribution du chromogène TMB. Tapoter délicatement les plaques pour bien mélanger le contenu des puits. 8. Lire la densité optique (DO) de chaque puits à 450nm dans l heure qui suit l arrêt de la réaction. Pour une lecture bichromatique, la longueur d onde de référence peut être 620nm. 3
4 Contrôle de qualité 1. Les contrôles ELISA fortement positif F-Actin IgA, faiblement positif en F-Actin IgA et négatif doivent être inclus à chaque série de tests afin de s assurer du bon fonctionnement des réactifs et du bon déroulement de la procédure. 2. Etant donné que les contrôles ELISA fortement positifs F-Actin IgA, ELISA faiblement positifs en F-Actin IgA et négatifs sont prédilués, il n est pas possible de valider le procédé de dilution des échantillons. 3. Des contrôles de qualité supplémentaires peuvent être réalisés selon les directives nationales, les réglementations internationales ou celles des organismes d accréditation. Des contrôles appropriés peuvent être obtenus en aliquotant un pool de sérums humains conservé à une température inférieure ou égale à -20 C. 4. Pour valider les résultats obtenus, tous les critères décrits ci-dessous devront être vérifiés. Si un ou plusieurs de ces critères ne sont pas réalisés, le test devra être considéré comme non valide et à refaire. a. La densité optique du Contrôle ELISA fortement positif en F-Actin IgA pré-dilué doit être supérieure à celle du contrôle ELISA faiblement positif en F-Actin IgA pré-dilué. D autre part, la densité optique du contrôle ELISA faiblement positif en F-Actin IgA doit être supérieure à celle du contrôle ELISA négatif pré-dilué. b. La densité optique du contrôle ELISA fortement positif en F-Actin IgA pré-dilué doit être supérieure à 1,0. Celle du contrôle négatif pré-dilué doit être inférieure à 0,2. c. L absorbance du Contrôle ELISA faiblement positif en F-Actin IgA doit être deux fois supérieure à celle du contrôle négatif d ELISA ou supérieure à 0,25. d. Les contrôles ELISA négatif et ELISA fortement positif en F-Actin IgA permettent de contrôler le bon fonctionnement des tests. Le Contrôle ELISA fortement positif en F-Actin IgA n assure pas la précision de la valeur seuil du test. e. L utilisateur du test peut se référer au document C24-A3 du NCCLS pour des informations supplémentaires concernant le contrôle qualité. 30 Calcul des résultats Déterminer d abord la valeur moyenne des duplicates. La réactivité de chaque échantillon est calculée en divisant la DO moyenne de l échantillon par la DO moyenne du contrôle faible et multiplier le résultat obtenu par la valeur (en unités) affectée au contrôle faible. La valeur en unités est indiquée sur l étiquette du flacon de contrôle ELISA positif faible en F-Actin IgA. DO de l échantillon Valeur de l échantillon = - x valeur du contrôle faible (unités) DO du contrôle faible (unités) La réaction n évolue pas de manière linéaire en fonction de la quantité d anticorps présents dans le sérum. L augmentation et la diminution de la concentration d anticorps se traduisent par une augmentation ou une diminution de réactivité correspondante mais ces modifications du signal ne sont pas proportionnelles (par exemple un doublement de la quantité d anticorps ne fera pas doubler le signal). Pour une évaluation quantitative rigoureuse des anticorps du patient, il faudra réaliser des dilutions sériées du sérum. Dans ce cas, la dernière dilution du sérum qui donne encore un signal positif sera considéré comme étant le titre en anticorps du patient. Interprétation des résultats Le test ELISA est une technique très sensible et peut en conséquence détecter de très faibles différences au sein d un groupe de patients. Les valeurs limites détaillées dans le paragraphe calcul des résultats sont indicatives. Il est recommandé à chaque laboratoire d établir ses propres valeurs seuils d interprétation en fonction de ses techniques, contrôles, équipements et populations de patients. Les échantillons sont jugés négatifs, équivoques ou positifs selon le tableau ci-dessous: Unités Négatif < 20 équivoques 20,1 24,9 Positif > Un résultat positif aux IgA anti-actine F chez des patients atteints de maladie cœliaque indique une probabilité relevée d atrophie villeuse intestinale grave. 2. Un résultat négatif indique l absence d anticorps F-Actin IgA ou bien un taux d anticorps en dessous de la valeur seuil. 3. Nous suggérons de rendre les résultats avec la remarque suivante: Les résultats suivants ont été obtenus avec le test ELISA INOVA QUANTA Lite TM F-Actin IgA. Les valeurs F-Actin IgA obtenues avec des tests de différents fabricants ne sont pas interchangeables. Le taux d anti-iga trouvé n est pas corrélé à une titration en point final. Limites du test 1. La présence de Complexes Immuns ou d autres agrégats d Immunoglobulines dans le sérum humain peut entraîner l augmentation de liaisons non spécifiques et des résultats faussement positifs. 4
5 2. Tous les cas de maladie cœliaque ne sont pas positifs aux anticorps IgA anti-actine F. 3. Tous les spécimens positifs aux anti-muscle lisse ne présentent pas d anticorps IgA anti-actine F. 4. La détection des anticorps IgA anti-actine F chez des patients atteints d hépatite doit être interprétée avec prudence parce que la présence d anticorps IgG anti-actine F dans cette classe de maladie est souvent accompagnée anticorps IgA anti-actine F sans relation avec une pathologie intestinale. Les anticorps IgA anti-actine F ne doivent être mesurées que chez des patients atteints d une maladie cœliaque pour contribuer à l évaluation des dommages intestinaux. 5. Les résultats obtenus à l aide de ce test devront être corrélés avec les signes cliniques et d autres tests sérologiques. 6. Les performances du coffret pour les échantillons autres que les sérums n ont pas été établies. Données relatives aux performances Performances Valeur normale Un panel de 500 spécimens prélevés chez des patients apparemment sains (250 hommes et 250 femmes) a été testé avec le kit de dosage immunoenzymatique aux IgA anti-actine F de QUANTA Lite TM. L âge varie de 18 à 80 ans (médian = 41). La spécificité de l essai était de 92,2 % (461/500). Trois spécimens sur 39 étaient positifs aux anticorps IgA ttg et pourraient donc être des cas non diagnostiqués de maladie cœliaque. L un de ces trois spécimens était également positif pour l endomysiale et est presque certainement un cas véritable de maladie cœliaque. Le taux de prévalence de la maladie cœliaque au sein de la population normale des États-Unis a été estimé à 1:133 et, par conséquent, la détection de cas non diagnostiqués de maladies cœliaques dans un groupe normal n est pas prévu. 26 Sensibilité et spécificité clinique Puisque l usage prévu du dosage des IgA anti-actine F de QUANTA Lite TM consiste à estimer la probabilité de dommages intestinaux chez des malades atteints de maladie cœliaque, la sensibilité et la spécificité ont été calculées sur 445 spécimens avec des résultats de biopsie. Sur ces 445 spécimens, 157 présentaient un indice de 3 pour la maladie de Basedow, et 288 un indice de 0, 1 ou N =445 Marsh Points F-Actin IgA Unités M3a/b/c M0,M1,M2 Total Pos (>24,9 unités) Neg (<24,9 unités) Total Résultats équivoques comptés comme négatifs (soit, non positifs) Sensibilité clinique: 48,4% (76/157) (95% CI, 40,4% to 56,5%) Spécificité clinique: 95,1% (274/288) (92,0 97,3%) Positif Prédictive valeur: 84,4% Négatif Prédictive valeur: 88,4% Efficacité: 78,7% Si les calculs sont exécutés avec M3c (atrophie villeuse totale) comme seul indice de référence, la sensibilité et la spécificité sont de 59,4 % et 91,3 % respectivement, comme indiqué ci-dessous. N =445 Marsh Points F-Actin IgA Unités M3c Non-M3c Total Pos (>24,9 unités) Neg (<24,9 unités) Total Résultats équivoques comptés comme négatifs (soit, non positifs) Sensibilité clinique: 59,4% (60/101) (95% CI, 49,2% to 69,1%) Spécificité clinique: 91,3% (314/344) (87,7 94,0%) Positif Prédictive valeur: 66,7% Negative Prédictive valeur: 88,5 Efficacité: 78,7% Comparaison avec dispositif de prédiction Le dosage immunoenzymatique aux IgA anti-actine F de QUANTA Lite TM a été comparé au dispositif homologué par la FDA pour la détection des anticorps IgA de la transglutaminase tissulaire servant de marqueur de la maladie cœliaque (ttg). Le pourcentage d accord positif était de 74/128 = 57,8 % et le pourcentage d accord négatif était de 27/29 = 93,1 % quand les cas de maladie cœliaque avec indices 3a, 3b ou 3c pour la maladie de Basedow ont été testés avec les deux dispositifs. Lorsque seuls des sujets avec un indice 3c pour la maladie de Basedow (atrophie villeuse totale) étaient testés, le pourcentage d accord positif était de 60/98 = 61,2 % et le pourcentage d accord négatif était de 3/3 = 100 %. Alors que la plupart des spécimens positifs aux IgA anti-actine F sont également positifs au ttg, seuls les patients avec maladie cœliaque présentant des dommages intestinaux sévères sont positifs aux IgA anti-actine F. Réactions croisées Le sérum de 36 patients avec des anticorps pour maladies auto-immunes/infectieuses ou des états 5
6 pathologiques spécifiques incluant les cellules pariétales gastriques, la ribonucléoprotéine, le SSA, le SSb, le ScI70, le JO1, la membrane basale glomérulaire, LKM-1, l antigène hépatique soluble, le centromère, la chromatine, l hépatite chronique active auto-immune, la cirrhose biliaire primaire, le virus de l hépatite B, le virus de l hépatite C, l angiocholite sclérosante primitive, ont été soumis aux essais pour en déterminer la réactivité croisée au dosage immunoenzymatique IgA anti-actine F QUANTA Lite TM. Plusieurs spécimens hépatiques ont répondu positivement aux anticorps IgA anti-actine F. La détection des anticorps IgA antiactine F chez des patients atteints d hépatite doit être interprétée avec prudence parce que la présence d anticorps IgG anti-actine F dans cette classe de maladie est souvent accompagnée d anticorps IgA antiactine F sans relation avec une pathologie intestinale. Précision Les performances intra-essai ont été évaluées en testant 6 échantillons au total 7 fois chacun. Tableau 1 : Performances intra-essai du test ELISA QUANTA Lite TM F-Actin IgA Spec.1 Spec.2 Spec.3 Spec.4 Spec.5 Spec.6 Unités de la moyenne 104, , ,4 Écart type 2,4 7 0,3 1,5 0,4 0,4 Coéfficient de variation % 2,3 4,6 0,9 3,8 3,0 2,6 Les performances entre dosages ont été mesurées en traitant en double 6 échantillons, le kit des contrôles fortement positifs (HPC) et le contrôle négatif (NC) deux fois par jour (une fois le matin et une fois l aprèsmidi) pendant 3 jours. Tableau 2 : Performances inter-essais du test ELISA QUANTA Lite TM F-Actin IgA HPC Spec.1 Spec.2 Spec.3 Spec.4 Spec.5 Spec.6 NC Unités de la moyenne 78,3 104,8 156,8 41,5 41,1 14,8 17,0 1,0 Écart type 4,7 6,6 5,8 1,7 2,6 0,7 0,8 0,1 Coéfficient de variation % 6,0 6,3 3,7 4,2 6,4 5,0 4,7 10,5 Références 1. Gabbiani, G. et al. Human smooth muscle autoantibody. 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