L impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein 2

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1 IMMUNOLOGIE L impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein 2 Impact du lait de coco sur la réponse immunitaire systémique et sur la muquese intestinale 8 Réponse immunologique et intestinale des souris balb/c sensibilisées et traitées par immunothérapie sublinguale au laitde vache 11 Evaluation de la détection des anticorps anti-mitochondries de type 2 par technique ELIA dans la cirrhose biliaire prmitive 14 Comparaison de deux tests IGRAS (Interferon Gamma Release ASsay) dans une étude multicentrique française 21 1

2 ABSTRACT e-poster 22 L'impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein S ADDOU 1, I ZERIOUH 1, H MEBARA 1, D SAIDI 1, O KHÉROUA 1 1 Université, Faculté des sciences, Laboratoire de physiologie de la nutrition et de la sécurité alimentaire Oran, Algérie Toute utilisation des éléments présentés doit être soumise à l autorisation de l organisation 2

3 L'impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein INTRODUCTION Dans le cadre de la prise en charge de l APLV, on a recourt de plus en plus à l utilisation du lait de soja en remplacement du lait de vache chez les nourrissons à haut risque. Cependant le lait de soja constitue la principale source de phytoestrogènes chez l homme Ces composés sont donc susceptibles d avoir une toxicité sur la fonction de reproduction, car: ils sont capables de stimuler, favoriser ou inhiber l action des hormones sexuelles Objectif Evaluer les conséquences de la consommation du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques de la souris mâle Swiss. METHODOLOGIE Analyser les paramètres hématologiques Vérifier l existence d une atteinte de la moelle osseuse suite à la consommation chronique du lait de Soja Etude histologique du foie et des reins dans le but de vérifier l existence de modifications dans la structure histologique

4 L'impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein RESULTATS GR(10 6 /mm 3 ) *** GR *** Témoin Groupe Groupe Groupe * Plaquettes (10 5 /mm 3 ) 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 GR ** PLT GB(10 3 /mm 3 ) *** Témoin Groupe 1 Témoin Groupe 1Groupe 2Groupe 3 ** ** GB ** Groupe 2 PL Groupe 3 GB

5 L'impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein Observation au microscope optique des coupes histologiques du foie des souris. A. Témoin, veine centrolobulaire (VCL) de taille normal et les sinusoïdes sont visibles (G 25). B. Souris groupe 1, infiltrat inflammatoire et ballonisation des hépatocytes (G 40). C. Groupe 2, Sinusoïdes dilatées et lésions tissulaires (G 40). D. Groupe 3, Sinusoïdes dilatées et infiltrat inflammatoire (G 40). Coloration à l hémalun éosine.

6 L'impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein A B C D Observation au microscope optique des coupes histologiques du rein des souris. A. Témoin, glomérule d aspect normal (G 25). B. Groupe 1, Congestion et l'espace de Bowman est réduit (G 25). C. Groupe 2, Les glomérules de Malpighi sont atrophiques et collabés, l'espace de Bowman est réduit (G 25).D. Groupe 3, congestion (G 25). Coloration à l hémalun éosine.

7 L'impact du lait de soja sur les paramètres hématologiques et histologiques du foie et du rein CONCLUSION En raison de ces nombreux doutes, la consommation chez les bébés de lait de soja est déconseillée par la Société Française de Pédiatrie depuis l année 2001, et par l Académie des Sciences Américaine. C est pourquoi, en France, les autorités sanitaires recommandent de ne pas en donner aux enfants de moins de 3 ans. Enfin le lait maternel reste en réalité indispensable pour le développement harmonieux du bébé jusqu à 6 mois. S il faut vraiment un substitut avant cet âge, il faut envisager les laits maternisés en poudre.

8 ABSTRACT e-poster 25 Impact du lait de noix de coco sur la réponse immunitaire systémique et sur la muqueuse intestinal S ADDOU 1, Y BENAISSA 1, A BELMOKHTAR 1, D SAIDI 1, O KHÉROUA 1 1 Université, Faculté des sciences, Laboratoire de physiologie de la nutrition et de la sécurité alimentaire Oran, Algérie Toute utilisation des éléments présentés doit être soumise à l autorisation de l organisation 8

9 Impact du lait de noix de coco sur la réponse immunitaire systémique et sur la muqueuse intestinal Introduction Le lait de coco, élément naturel extrait à partir de l'endosperme de noix de coco mûre (Cocos nucifera L). Il contient de la graisse (17 a 18%), de l'eau, des glucides, des protéines (1,8 a 2%) et cendres. C est une source de folate participe essentiellement dans la production du matériel génétique et dans le fonctionnement du système nerveux et du système immunitaire. Effet cardioprotecteur: Lait de noix abaisse le cholestérol total, triglycérides, phospholipides, lipoprotéine de faible densité (LDL), lipoprotéine de très-bas-densité (VLDL), et a augmenté les niveaux (HDL) à haute densité de lipoprotéine. Le lait de noix de coco joue un rôle antimicrobien dans l appareil gastro intestinal et dans la guèrison des ulcères de la bouche. On connait peu d information sur les effets bénéfiques de lait de noix de coco en cas de traitements d allergies alimentaires. L objectif est d étudier l antigénicité de lait de noix de coco chez les souris BALB/ C et l effet du lait de noix de coco sur l aspect histologiques de l intestin des souris. METHODOLOGIE On a utilisé 24 souris qu on a divisé en deux lots un lot expériemental (nourrie au lait de coco) et un lot témoins nourrie au régime standard. Dans l expérimentation on a procédé: Au dosage des anticorps IgG anti β-lg par la technique Elisa Par une étude histologique de la muqueuse intestinal de toutes les souris

10 Impact du lait de noix de coco sur la réponse immunitaire systémique et sur la muqueuse intestinal RESULTATS *** *** Hauteur des villosités 80 μm ** * *** TN TP LNC 0 TN TP LNC Titre en IgG sériques spécifiques mesurées par la méthode ELISA à J0, à J63 chez des souris Balb/c immunisées à la ß-lactoglobuline (ß-lg). TN: Témoins négatives TP: Témoins positives LNC: Souris nourries avec le lait de la noix de coco Conclusion 0 TN TP LNC Évaluation de la hauteur villositaire des fragments jéjunaux des souris immunisé à la ß-lg et nourries par la suite avec le lait de noix de coco pendant 28 jours comparée à celle des souris témoins négatives et positives (n=8). TN: Témoins négatives TP: Témoins positives LNC: Souris nourries avec le lait de la noix de coco Nos résultats indique que le lait de noix de coco atténue l antigénicité, et a un effet bénéfique sur la muqueuse intestinale.il semble être une alternative intéressante en cas d allergie aux protéines de lait de vache. 10

11 ABSTRACT e-poster 26 Réponse immunologique et intestinales des souris Balb/C sensibilisées et traitées par immunothérapie sublinguale au lait de vache S ADDOU 1, S BENHATCHI 1, Y TITOUAH 1, O KHEROUA 1, D SAIDI 1 1 Université, Faculté des sciences, Laboratoire de physiologie de la nutrition et de la sécurité alimentaire Oran, Algérie Toute utilisation des éléments présentés doit être soumise à l autorisation de l organisation 11

12 Réponse immunologique et intestinales des souris Balb/C sensibilisées et traitées par immunothérapie sublinguale au lait de vache INTRODUCTION L immunothérapie nommée immunothérapie allergénique: Elle consiste à administrer à un individu allergique, pendant une certaine période, des allergènes envers lesquels son système immunitaire réagit, et ce, afin de le désensibiliser Peut-on améliorer l efficacité de l ITS au lait de vache, si nous réduisons la duréedu augmentant la dosede l allérgène administré?? L objectif de cette étude est de déterminer l efficacité de l ITS au lait de vache chez des souris Balb/C sensibilisées au protéines bovines en se basant sur deux paramètres (la durée et la dose). METHODOLOGIE Immunisation des souris par les protéines bovines α-la et β-lg. Induction du lait de vache par ITS pendant 2 mois. Mesure de l antigénicité par ELISA des sérums de souris immunisées avant et après le traitement. L effet de l immunisation et du traitement sur l intégrité de la structure épithéliale.

13 Réponse immunologique et intestinales des souris Balb/C sensibilisées et traitées par immunothérapie sublinguale au lait de vache RESULTATS IgG 6Log1/titre 7 IgG 6 Log1/titre 5 4 α-lac * * * 3 2 β-lg α- Lac β -Lg TT+( j35) TT+ (j95) Titre en IgG anti anti β-lg et anti α-la chez les souris témoins négatifs / positifs. Réactivité du lait de vache vis-à-vis des IgG anti ß-Lg et anti α-la comparée à celle du témoin par la technique Elisa. T- T+ (J95) Observation au microscope optique d une villosité jéjunale normale. 50µL (J65) 100µL (J95) Observation au microscope Observation au microscope optique optique d une villosité d une villosité jéjunale d une souris jéjunale normale. immunisée par α-la et traitée par ITSL au LV (50µl). Diminution du taux LIE CONCLUSION En deux mois de traitement l efficacité d ITSL au lait de vache a été confirmé tout en augmentant les doses d allergène administré, il reste à confirmer ces résultats sur les malades présentant l APLV. Observation au microscope optique d une villosité jéjunale d une souris immunisée par β-lg et traitée par ITSL au LV (100µl). l efficacité du traitement au LV est démontrée par la repousse villositaire, régression de l infiltration du chorion, et diminution des LIE. 13

14 ABSTRACT e-poster 112 EVALUATION DE LA DETECTION DES ANTICORPS ANTI-MITOCHONDRIES DE TYPE 2 PAR TECHNIQUE ELIA TM DANS LA CIRRHOSE BILIAIRE PRIMITIVE. Auteurs : C. PONTOIZEAU, P. RASMY, E. BALLOT, C. JOHANET Structure : Hôpital Saint Antoine, Unité d Autoimmunité, Paris, France Toute utilisation des éléments présentés doit être soumise à l autorisation de l organisation 14

15 INTRODUCTION Introduction. La détection des anticorps anti-mitochondries de type 2 (AAM2) tient une place centrale dans le diagnostic de la cirrhose biliaire primitive (CBP). La stratégie actuelle de dépistage dans notre laboratoire couple détection par immunofluorescence indirecte (IFI) sur triple substrat (foie/rein/estomac de rat) et confirmation par immunoblot utilisant comme antigène une fraction mitochondriale de foie de rat préparée au laboratoire. Objectif. Dans cette étude, nous avons évalué la détection des AAM2 par la technique ELIA TM, un test en FEIA (FluoroEnzyme ImmunoAssay) automatisé sur Phadia 100(ThermoFisherScientific).

16 PATIENTS Nous avons analysé rétrospectivement les échantillons de sérum de 143 patients présentant une pathologie hépatique avérée cliniquement ainsi que 26 échantillons de patients sains. Le diagnostic de CBP a été effectué sur 2 des critères suivants: cholestase, présence d AAM2 et atteinte des canaux biliaires intrahépatiques; celui d HAI sur les critères simplifiés de Hennes et al. CBP HAI b VHC c Cirrhose alcoolique Témoins sains N 92 a Age : moyenne [min ; max] Sexe : Femme/Homme 58 [27; 83] 52 [15; 82] 55 [33; 87] 51 [39; 63] 51 [40; 64] 82/10 13/3 8/19 3/5 26/0 a dont12 CBPséronégatives (sans AAM2); b HAI:hépatite auto-immune de type 1 présentant desanticorps anti-actine et/oudesanti-sla; c hépatite àvirusc. Hennes EM et al. Hepatology 2008;48:169-76

17 METHODES Une IFI a été réalisée et la spécificité des anticorps anti-mitochondries confirmée par immunoblot. Le seuil de positivité de l IFI correspond à la dilution au 1/40. AAM2: IFI, estomac ; AAM2 + anti-gp210: IFI, foie Fluorescence des cellules pariétales AAM2: IFI, rein ; fluorescence tubules distaux > tubules proximaux

18 RESULTATS LetestEliA TM M2(ThermoFisherScientific) étaitpositifpour83échantillons. La concordance du test EliA TM (Thermo Fisher Scientific) avec la stratégie standard du laboratoire couplant IFI et immunoblot est de 99,4 % (168 résultats concordants sur 169 testés). IFI + Immunoblot Cirrhose Témoins CBP HAI VHC alcoolique sains N = 92 N = 16 N = 27 N = 8 N = * ELIA TM 80 1* * patiente présentant une forme mixte (CBP/HAI).

19 METHODES AAM2 : Immunoblot A: sous-unité E2 de la pyruvate déshydrogénase (PDH) B: sous-unité E3BP de la PDH C: sous-unités E2 des complexes OGDC ET BCOADC D: sous unité E1αde la PDH E: sous-unité E1β de la PDH Pour chaque échantillon, les AAM2 sont recherchés par la technique ELIA TM, un test en FEIA (FluoroEnzyme ImmunoAssay) automatisé sur Phadia 100 (Thermo Fisher Scientific). Le seuil de positivité est de 10 IU/mL.

20 DISCUSSION / CONCLUSION Discordance. Un résultat discordant a été observé : Le sérum d une femme de 65 ans, porteuse du VHC, positif en IFI mais négatif en immunoblot était positif en FEIA. Il n y avait aucun argument (clinique et histologique) pour unecbpassociéeauvhc. Conclusion. Dans notre étude, les performances du test EliA TM M2 (Thermo Fisher Scientific) sont très satisfaisantes pour la détection des AAM2. Remerciements. Nous remercions la société Thermo Fisher Scientific qui a fourni l automate et les réactifs.

21 ABSTRACT e-poster 119 COMPARAISON DE DEUX TESTS IGRAS (INTERFERON GAMMA RELEASE ASSAY)DANS UNE ETUDE FRANCAISE MULTICENTRIQUE Auteurs: CB Charlène BOUTHEMY 1, DM Delphine MONNIER 2, ML Myriam LABALETTE 3, MD Marcello DE CARVALHO 4, GS Ghislaine STERCKERS 5,PN Pascale NICAISE 6,GC Guislaine CARCELAIN 1 et le groupe des biologistes du STIC- TB Structure(s) : 1 AP-HP Pitié Salpêtrière, Laboratoire d Immunologie cellulaire, Paris, France 2 CHU Rennes Laboratoire d immunologie, Rennes, France 3 CHU Lilles, Laboratoire d immunologie, Lilles, France 4 CHU Nancy, Laboratoire d immunologie, Nancy, France 5 AP-HP Robert Debré Laboratoire d immunologie, Paris, France 6 AP-HP Bichat Claude Bernard, Laboratoire d immunologie, Paris, France Toute utilisation des éléments présentés doit être soumise à l autorisation de l organisation 21

22 INTRODUCTION L infection tuberculeuse latente (ITL) est à différencier de la tuberculose active, elle correspond à la colonisation du sujet par M. tuberculosis, c est une forme qui n est ni symptomatique ni contagieuse. Le risque de l ITL est l évolution (dans 10% des cas) vers une tuberculose active. Actuellement, le dépistage de l ITL est recommandé par le Haut conseil de santé publique (HCSP) dans certaines populations à risques(patients VIH, patients avant mise sous traitement anti-tnfα, sujets contacts, professionnels de santé). Il est réalisé entre autres par des méthodes de diagnostiques immunologiques indirectes : Intradermoréaction à la tuberculine(idr) Tests de libération d IFN-γ(IGRA): QuantiFERON TB-Gold (QTF-G, Qiagen) et T-SPOT.TB (Oxford Immunotech). Les tests IGRAs sont basés sur la libération d IFN-γ par les lymphocytes T après contact in vitro avec des antigènes spécifiques de M. tuberculosis. De nombreuses études ont comparé chacun des tests IGRAs à l IDR mais peu d études les ont comparés entre eux de façon parallèle et encore moins ont analysé leurs résultats en détails. 22

23 OBJECTIFS Entre 2008 et 2011, une étude multicentrique Française(étude STIC-TB) dans le cadre des Stratégies Thérapeutiques Innovantes et Coûteuses(STIC) a été réalisée surlestestsigras.cette étude étaitsoutenue parladgosetcoordonnée parle Dr G. Carcelain(APHP). Apartird une partie desrésultatsde cette étude,nous avonsréalisé une«sous étude» rétrospective afin d analyser les résultats de deux des tests utilisés (QFTB-G et T-SPOT.TB) d un point de vue biologique. Lesobjectifsde cette «sous-étude»étaient: Evaluation globale et dans trois différentes populations des résultats quantitatifs et qualitatifs du QTF-G et du T-SPOT. TB, Evaluation de la concordance entre les deux tests, Analyse des causes des tests indéterminés. 23

24 MATERIELS ET METHODES Patients: Les données proviennent du STIC-TB Trois groupes de patients: IGRAVIH: patients VIH non traités par antirétroviraux( n=441) ETAT: patients avant traitement par anti-tnf-α(n=338) QUANTIPS: soignants des services à risque de contamination tuberculeuse (n=574) Tests IGRAS: IGRAVIH et ETAT: QTF-G + T-SPOT.TB QUANTIPS: seulement QTF-G Les analyses on été réalisées selon les indications des kits constructeurs. Chaque résultat était exprimé par une valeur quantitative(qtf : UI/ ml et T-SPOT.TB : SFC/puits) et un résultat qualitatif (positif, négatif ou indéterminé) selon les seuils définis par les constructeurs. Statistiques: - données quantitatives: test de Student et test ANOVA. - données qualitatives: Chi 2. Les seuils de significativité statistique sont fixés à 5%. Laconcordance entrele T-SPOT.TBetle QTF-Gaété évaluée parle coefficientkappa 24

25 RESULTATS QTF-G et T-SPOT.TB Données quantitatives Tableau I : Moyenne des concentrations en IFN-γ en UI/ml (le bruit de fond est soustrait) dans le tube contenant les antigènes mycobactériens. QTF-G n Moyenne (UI/ml) IGRAVIH 441 0,32 ETAT 338 0,28 * QUANTIPS 574 0,54 *p= 0,03 **p=0,04 ** Le groupe «immunocompétent» QUANTIPS est significativement différent des deux groupes de patients «immunodéprimés» pour la concentration en IFN-γ dans le tube avec les antigènes mycobactériens du test QTF-G. Données qualitatives par groupe QTF-G + (%) -(%) Ind (%) IGRAVIH 10,8 86,6 2,5 ETAT 7,4 88,2 4,4 QUANTIPS 15 84,5 0,5 T-SPOT.TB + (%) -(%) Ind (%) IGRAVIH 9,5 82,3 8,2 ETAT 13,9 78,1 8 QTF-G P (chi 2) Trois groupes <0,001 IGRAVIH vs ETAT 0,09 IGRAVIH vs QUANTIPS 0,005 ETAT vs QUANTIPS <0,0001 T-SPOT.TB P (chi 2) IGRAVIH vs ETAT 0,16 Le groupe «immunocompétent» QUANTIPS est significativement différent (plus de positifs, moins d indéterminés) des deux groupes de patients «immunodéprimés». Les 2 groupes «immunodéprimés» sont similaires. Les indéterminés sont le plus souvent liés à une absence de réponse à un mitogène (PHA) pour le QTF-G et à un bruit de fond trop élevé pour le T-SPOT.TB(non montré). 25

26 RESULTATS CONCORDANCE Concordanceentrelesdeuxtests:80,4% /coeffkappa*=0,31soitun accord «passable» 5,5% des cas deux tests positifs, 74% des cas deux tests négatifs, 0,5% des cas deux tests indéterminés. Discordance(QTF-G/T-SPOT.TB) 19,6% des cas les 2 tests sont discordants. 2 catégories de discordances: «Vraies discordances» (positif/négatif ou négatif/positif) (9,2%), elles sont majoritairement situéesauniveaudeszonesseuils(0,35ui/mlpourleqtf-gou7sfc/puitspourt-spot.tb). «Discordances avec indéterminés» (pos/ind, nég/ind, ind/pos, ind/nég) (10,4%) elles sont réparties de façon homogène dans les valeurs. Analyse des«vraies discordances» QTF-G: <0,2UI/mL: 5,9%(39/675) discordances vraies 0,2-0,35 UI/mL: 19,2%(5/26) discordances vraies 0,35-1 UI/mL: 52% (14/27) de discordances vraies >1UI/mL: 25,4%(13/51) discordances vraies T-SPOT.TB: zone 8-13 SFC/puits: 61,1%(22/36) de discordances vraies *coefficient kappa : <0,2: accord faible; 0,21-0,4: passable; 0,41-0,6: modérée; 0,61-0,8:bonne; 0,81-1: très bonne 26

27 DISCUSSION/CONCLUSION La réponse au QTF-G diffère selon l état immunitaire du patient (T-SPOT.TB non démontré car pas de groupe d immunocompétents). L immunodépression quelle qu en soit l origine semble avoir un impact similaire sur le résultat des tests (ici montré avec deux groupes d immunodéprimés : patients VIH non traité par ARV et patients avant anti-tnf-α) Les résultats de ces deux tests ne sont pas toujours concordants que ce soit en termes de sensibilité ou de résultats indéterminés (réalisation technique différente: ELISA pour QTF-G et ELISPOT pour T-SPOT.TB, seuils de positivité différents...) Actuellement les zones grises (interprétation du résultat avec prudence) qui ont été proposées pour ces deux tests sont 0,2-0,7UI/ml pour le QTF-G 1,2 (basé sur les conversion/réversion des tests de personnels soignants) et 5-7 SFC/puits pour le T- SPOT.TB 3. Ici, des zones grises pourraient être définies en se basant sur les zones qui comportent le plus de «vraies discordances» soit: pour le QTF-G: 0,35-1 UI/ml et pour le T-SPOT.TB : 8-13 SFC/puits, mais ces zones semblent très étendues, de plus les effectifs dans ces zones sont limités et ces résultats nécessiteraient d être consolidés sur de plus grand nombre. 1 Pai,AmJRespirCritCareMed2006; 2 Ringhausen,Journalofoccupationalmedicineandtoxicology, FoodsDrugsadministration(FDA) 27