Recherche Biomédicale et Vétérinaire : - Animal. - Protocole Expérimental. - Unité Animale

Transcription

1 Expérimentation animale Recherche Biomédicale et Vétérinaire : - Animal - Protocole Expérimental - Unité Animale

2 Expérimentation Animale Résultats de qualité : Fiables,comparables et Reproductibles Harmonisation : Protocole Expérimental Animal Unité Animale

3 Expérimentation Animale : Animal Harmonisation Génétique (Elevage) Sanitaire (Statut Sanitaire)

4 Génétique : Lignée non consanguine : (outbred strain): évite les animaux apparentés ( hétérogénéité ), ex: Souris SWISS, NMRI ; rats Wistar, S. Dawley, Long Evans Lignée consanguine : (inbred strain):animaux obtenus par des accouplements entre F x S pendant un grand nombre de générations21 (homogénéité),ex: souris: C57BL/6,C3H,Balb,/c, FVB,CBA;DBA2; Rats Lewis, Dark agouti, Brown Norway; Lignée Hybride (F1) :première génération du croisement des 2 consanguines Ex: souris B6D2F1, B6CBAF1, B6SJLF1; rats FBNF1,LBNF1 Lignée congénique : croisement des 2 consanguines, suivi de croisement par un backcross de l une des 2 souches parentales. Ex: lignée Tg sur fond génétique fixé Lignée Transgénique : animaux qui ont intégré un transgène au hasard dans leurs génome Lignée Mutantes : animaux qui présentent spontanément un caractère pathologique(mutation): souris obèses, diabétiques, nude, scid -beige

5 Statut Sanitaire : Axénique : aucun germe présent (Germ Free ou Axenic) ( Gnotoxéniques : dérive de l animal axénique avec une flore microbienne définie et contrôlée ) Hétéroxéniques : flore microbienne non pathogène - EOPS :Exempt d Organismes Pathogènes Spécifiques = - IOPS : Indemne d Organisme Pathogènes Spécifiques ( SPF: Specific Pathogen Free) Holoxénique ou Conventionnel : flore microbienne inconnue pathogène et non pathogène (Conventional) (Néo holoxénique :dérive de l animal hétéroxénique avec une flore non contrôlée )

6 Contrôle Sanitaire : bilan trimestriel pour les rongeurs et lagomorphes Objectifs: la recherche des microorganismes pathogènes en bactériologie, sérologie, parasitologie et autopsie ( lésions macroscopiques) selon les recommandations FELASA( Federation of European Laboratory Animal Science Associations ) de standardiser la qualité sanitaire des animaux de laboratoire et d éviter les interférences sur les résultats expérimentaux

7 Expérimentation Animale Protocole Expérimental Harmonisation Bonnes Pratiques Laboratoire Démarche Qualité

8 Expérimentation Animale Unité Animale Harmonisation Réglementaire Scientifique

9 Expérimentation Animale Harmonisation Réglementaire : Locaux Personnel Animal

10 Expérimentation Animale Décret du modifié par le décret Arrêté du 19 avril 1988 fixant les conditions d agrément des établissements d expérimentation animale: délivré par le Ministère de l Agriculture après la visite de la DSV ( 5 ans).

11 Expérimentation Animale Arrêté du 19 avril 1988 fixant les conditions d expérimenter sur les animaux : Chercheurs et ingénieurs :demande d Autorisation d Expérimentation (nominative)après l obtention du diplôme de Biologie des Animaux de Laboratoire niveau I - DSV ( 5 ans ) Techniciens par l obtention du Diplôme de Biologie des Animaux de Laboratoire niveau II ou III

12 Expérimentation Animale Arrêté du 19 avril 1988 fixant les conditions de fourniture aux laboratoires agrées des animaux utilisés à des fins de recherche scientifiques ou expérimentales: les animaux doivent provenir d établissements d élevages spécialisés déclarés à la DSV.

13 Expérimentation Animale - Arrêté du 13 août 1996: Mesures techniques de prévention et de confinement - Commission Génétique (Janvier 2000) :évaluation du risque biologique et niveau de confinement laboratoires : L1, L2 L3 et L4; animaux abritant un gène étranger: classe 1,2 3 et 4 et animaleries A1, A2, A3 et A4

14 -Haut Conseil des Biotechnologies (juin 2008): comité scientifique et comité éthique -Classification niveau de biosécurité: Groupe de risque 1 : ne provoque pas de maladies humaines, risque faible pour l'individu et la collectivité; Groupe de risque 2 : provoque de maladies bénignes, risque modéré pour l'individu, risque limité pour la collectivité; Groupe de risque 3: provoque de maladies graves ( fatales ) et qui possèdent une thérapeutique, risque élevé pour l'individu, risque faible pour la collectivité; Groupe de risque 4: : provoque de maladies graves fatales et qui possèdent une thérapeutique, risque élevé pour l'individu, risque élevé pour la collectivité.

15 Expérimentation Animale Décret n du 13 décembre 1995,modifié par le décret n du 24 novembre 1999,ainsi que les 5 arrêtés de 1996 et du novembre 1999: Définissent les conditions applicables à tout Définissent les conditions applicables à tout transport d animaux vertébrés vivants sur le territoire national(soins, alimentation, abreuvement et confinement).

16 Expérimentation Animale Harmonisation Scientifique : Type d expérimentation, Espèce animale, Statut Sanitaire d animaux

17 Type d expérimentation: Fondamentale ou appliquée Aiguë ou chronique Cancérologie,immunologie, pharmacologie, comportement Unité Animale adaptée

18 Espèce Animale : Modèle Animal espèce de référence pour le domaine d étude et le modèle a priori le plus prédictif Rongeurs, Lagomorphes, Carnivores, Primates Unité Animale et Statut sanitaire adaptés

19 Statut Sanitaire d animaux: Axénique et Gnotoxéniques : Isolateurs ( Barrière Totale) EOPS : Zone Protégée (Barrière Partielle ou Salle Blanche) Conventionnel et Néo holoxénique: Unité Animal Conventionnelle ( Animalerie) Unité Animale adaptée

20 Isolateur : 1 = Expérimentation: - Animaux Axéniques ou - Protection d animaux IOPS immunodéprimés ou - Animaux infectés volontairement (Infectiologie)ou - Animaux statut sanitaire inconnu: Quarantaine (bilan sanitaire en cours) - Animaux Contaminés : à décontaminer ( hystérectomie aseptique ou transfert d embryons ou FIV

21 Isolateur 2 - Élevage : - Maintien des noyaux des colonies d animaux IOPS ou axéniques - Expansion du noyau préalable à une production (macro isolateur) 3 - Décontamination : - Animaux décontaminés par hystérectomie aseptique ou - Transfert d embryons ou FIV (Fécondation in vitro)

22 Unité Animale Protégée EOPS Animal EOPS Matériel Personnel et Locaux Habilité «contrôlés» et Spécialisé

23 Unité Animale Protégée EOPS Statut Sanitaire EOPS : Exempt d Organisme Pathogène Spécifique Barrières Sanitaires 1. Animal 2. Environnement : Matériel et Locaux 3. Personnel

24 Barrières sanitaires : 1 - Animal EOPS Contrôle d origine et du statut sanitaire: Fournisseur Agrée et Bilan Sanitaire EOPS Transport: Emballage filtre Accès à l unité protégée: SAS avec décontamination chimique préalable

25 Barrières sanitaires: 2.a - Environnement : Locaux Confiné : SAS (contrôle d- accès), Étanche(animaux sauvages,bruit, écarts de C ) Contrôle Microbiologique : hygiène, désinfection et stérilisation (eau, aliments et litière) Contrôle de paramètres physiques : hygrométrie, lumière(contrôle de la photopériode,) air : climatisation(température), renouvellement d air, filtration d air HEPA et gradient de pression(contamination aéroporté).

26 Barrières sanitaires : 2.b - Environnement : Matériel / Équipement Autoclave double porte cages, biberons,couvercles, litière, aliments ) SAS décontamination chimique (Formol interdit Peroxyde d Hydrogène, etc.)

27 Unité Animale Protégée EOPS Barrières sanitaires : 3 - Personnel Vestiaire avec SAS: vestimentaire stérile Gants, surchaussures,masques,charlottes et combinaisons (jetables ou autoclavables)

28 Unité Animale Conventionnelle 1. Animal Néo holoxénique Matériel et Locaux Personnel décontaminés Habilité

29 Unité Animale Conventionnelle ou Animalerie 2. a -Environnement : Locaux Confiné : SAS (contrôle d accès), Étanche : animaux sauvages,bruit, C Contrôle Microbiologique: hygiène, désinfection et stérilisation facultative (eau, aliments et litière) Contrôle de paramètres physiques: hygrométrie, lumière(contrôle de la photopériode,) air : climatisation(température), renouvellement d air, filtration d air non absolue et gradient de pression (contamination aéroporté

30 Unité Animale Conventionnelle 2.b - Environnement : Matériel / Équipement Absence d autoclave double porte : décontamination par tunnel de lavage cages,biberons,couvercles,litière,aliments SAS décontamination chimique (Formol interdit Peroxyde d Hydrogène, etc.)

31 Unité Animale Conventionnelle 3. Personnel Vestiaire avec SAS: vestimentaire stérile ou Vestiaire avec SAS: vestimentaire stérile ou non Gants, surchaussures et blouses (jetables ou autoclavables)

32 Unité Animale Conventionnelle Barrière Sanitaire : Animal Conventionnel avec suivi sanitaire Matériel Personnel et Locaux Habilité Agrées

33 Unité Animale Contraintes : Réglementaires Techniques / Méthodologies Ethique

34 Contraintes Réglementaires Environnement : établissement classé Expérimentation animale : animaux classiques et OGM Risque Biologique : personnel et environnement

35 Risque Biologique : Niveau de confinement microbiologique: Niveau 1 - sans danger Niveau 1 - sans danger Niveau 2 - maladie non grave Niveau 3 - maladie fatale / thérapeutique Niveau 4 - maladie fatale sans thérapeutique

36

37 Contraintes Techniques/Méthodologiques : Matériel /Equipements : cages avec couvercle filtrants, portoirs ventilés isolateurs, échographe, anesthésie,appareil de mesure de tension artérielle, stéréotaxie Personnel : qualitatif ( formation et qualité humaines) quantitatif ( nombre )

38

39

40

41 Contraintes Ethiques : Principe de 3 R : Remplacer Réduire Responsabilité Raffiner Bien Etre Animal : Respecter Animal «Etre vivant»

42 Contraintes Ethiques : Bien être : «l état d un individu faisant face à son environnement» (Broom,1988) «Stabilité physiologique et psychologique» SANTE PHYSIQUE et PSYCHOLOGIQUE

43 Contraintes Ethiques : Bien être Animal Stress Souffrance Physique Psychologique

44 Stress L effet d un stimulus ou plusieurs stimuli tendant à perturber l homéostasie de l organisme. Il se traduit par des modifications physiologiques, comme la libération d hormones, accompagnés parfois des modifications morphologiques

45 Syndrome général d adaptation - SGA Modifications physiologiques : «3 phases» - «réaction d urgence»système nerveux sympathique - «état de résistance» l hypophyse - «phase d épuisement» - mécanismes adaptatifs: croissance ralentie, hyperplasie thyroïdienne, avortements, baisse d activité sexuelle, altérations de la formule sanguine, ulcérations gastriques, baisse d immunité

46 Agents de Stress - Nutritionnels: niveau protéique - Physique: immobilisation, densité d animaux/cage - Physiologique: chirurgies, maladies.. - Sociaux: changements de groupe ou isolement.. - Environnementaux: lumière, température, bruit, hygrométrie, odeur, litière, transport - Psychologiques : peur, frustration, ennui...

47 Souffrance C est un état émotionnel traduit par des sensations désagréables : la douleur, la peur, la frustration, l anxiété, l ennui Elle doit être mesurée par: signes cliniques et comportementaux éviter la souffrance Comité d éthique

48 Contraintes Ethiques : Eviter la souffrance : physique : analgésique et ou anesthésique psychologique : Approche /contention Manipulation Conditions d hébergement: surface nombre d animaux éthologie

49 Bien être Réduit le risque des blessures du personnel et/ou de l animal pendant la manipulation expérimentale Sécurité Diminue la variabilité des résultats expérimentaux Qualité

50 Le respect des spécificités physiologiques de l espèce, Le respect de l animal en tant que être vivant : la Souffrance et le Bien être animal, Une recherche constante d amélioration des connaissances scientifiques et de la maîtrise technique par les expérimentateurs La reconnaissance de l Expérimentation Animale