VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION
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- Gaspard Desroches
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1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date de la dernière adaptation Dénombrement des Bacillus cereus présomptifs (I-MET-031) Dilution ensemencement de milieux de culture solides lecture des géloses - Confirmation ISO Produits destinés à la consommation humaine (Catégories 1, 2 et 3 (suivant la norme ISO 19036)) 28/02/2014
2 Résumé des critères de performance : Répétabilité Ecart type de reproductibilité Incertitude de mesure (reproductibilité) Matrices de la catégorie 1 Matrices de la catégorie 2 Matrices de la catégorie La validation répond aux exigences de la procédure LAB 00 P180 Le laboratoire qui veut appliquer cette méthode doit démontrer que les critères ci-dessous soient remplis pour les combinaisons matrices/paramètres : Participation à un test interlaboratoire et obtention de résultats corrects. Obtention d une répétabilité de 0,5 log et une reproductibilité de 1,0 log. Historique de validation : Edition Révision par/date Motif de la révision Modifications 1 MC Wilem / Adaptation au nouveau template et à la nouvelle procédure de validation (P180) Adaptation au nouveau template du dossier de validation du 04/05/2006; ajout de la validation pour les matrices de la catégorie 3; ajout de l annexe photos.
3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Dénombrement des Bacillus cereus présomptifs (I-MET-031) Dilution ensemencement de milieux de culture solides lecture des géloses - Confirmation ISO Produits destinés à la consommation humaine (Catégories 1, 2 et 3 (suivant la norme ISO 19036)) Vérification MC Wilem Responsable section microbiologie LFSAGx MC Wilem Responsable section microbiologie Date: 28/02/2014 Handtekeningen - Signatures: Sé Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Collaborateurs de la section microbiologie LFSAGx A. Brasseur, O. Closset, A. Georges, F. Marlier, M. Martin, S. Petit, B. Polderman, S. Randour, C. Schauwers, MC Wilem, G. Yurt Ce dossier de validation a été clôturé le 04/05/2006 pour les matrices des catégories 1 et 2. Adaptation à la nouvelle procédure de validation (LAB-00-P-180) + validation pour les matrices de la catégorie 3 : Février 2014 Handtekeningen - Signatures: A. Dubois Responsable Qualité LFSAGx Sé Date: 11/03/2014 Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
4 Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation Matrices / paramètres de validation / critères Matrices : (suivant ISO 19036) - catégories 1 : liquides et poudres (lait, lait de coco, lait en poudre, ) - catégories 2 : mélanges de solides (viande hachée, crème fouettée, glaces, ) - catégories 3 : petits et très petits solides (légumes râpés ou déshydratés, aliments pour bétails, ) Paramètres de validation : - Répétabilité - Reproductibilité / incertitude de mesure - Justesse ou justesse relative Critères Répétabilité, écart type de reproductibilité, incertitude de mesure (reproductibilité) : Catégories 1 : liquides et poudres Catégories 2 : mélanges de solides Catégories 3 : petits et très petits solides Répétabilité Ecart type de reproductibilité Incertitude de mesure Justesse : - Analyse d échantillons certifiés : aucun écart n est supérieur à 0.09 log en valeur absolue. - Z-scores conformes aux tests interlaboratoires LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
5 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 1 DÉNOMBREMENT DES BACILLUS CEREUS PRÉSOMPTIFS (I-MET-031)... 1 SAMENVATTING VALIDATIEGEGEVENS RÉSUMÉ DES DONNÉES DE VALIDATION INTRODUCTION VALIDATION INITIALE MATÉRIAUX UTILISÉS ORGANISATION RÉSULTATS COMPLÉMENT DE VALIDATION MATÉRIAUX UTILISÉS ORGANISATION RÉSULTATS JUSTESSE TESTS INTERLABORATOIRES CONCLUSIONS ANNEXES LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
6 1. Introduction Ce dossier de validation est une mise à jour du dossier de validation pour le dénombrement des Bacillus cereus présomptifs dans les denrées alimentaires suivant la norme ISO Le dossier de validation initial a été clôturé le 04/05/2006. Il a été adapté suite à la mise en application de la nouvelle procédure de validation LAB-00-P-180. Y a été ajoutée : - la validation pour les matrices de la catégorie 3 définie dans la norme ISO Validation initiale Cette validation initiale a été réalisée en Les matrices utilisées pour cette validation sont de la viande hachée de bœuf (catégorie 2) et du lait pasteurisé (catégorie 1) artificiellement contaminés par une solution contenant des Bacillus cereus. 2.1 Matériaux utilisés - Matériel de référence SRM (lot : 7l-0511) - Eau peptone tamponnée (lot : ) - Gélose MYP (lot : ) - Gélose au sang (lot : 61893) 2.2 Organisation Détermination de la répétabilité : Préparation des échantillons pour l essai : - Viande hachée de bœuf : A une prise d essai de 10g de viande, ajouter 2ml de standard SRM et 88ml d eau peptonée tamponnée. - Lait : A une prise d essai de 9.5ml de lait, ajouter 0.5ml de standard SRM. Personnes ayant participé à cette validation : A. Brasseur, F. Marlier, M. Martin, C. Schauwers et MC Wilem. Pour pouvoir analyser les résultats suivant le norme ISO 5725, les solutions mères ont été analysées lors de 8 situations avec 6 répétitions pour chaque situation. Pour les deux types de matrices, les boîtes de gélose MYP ont été ensemencées avec 0.1ml des solutions mères. Les boîtes ensemencées ont été placées à 30 C (incubateur 303) le 28/02/06 à 11h00. Elles ont été lues le 01/03/06 à 11h00. Pour la confirmation, les géloses au sang ont été placées à 30 C (incubateur 303) le 01/03/06 à 12h00. Elles ont été lues le 02/03/06. Le détail des résultats peut être consulté au laboratoire (annexe 1). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
7 Détermination de l incertitude de mesure / écart type de reproductibilité : L incertitude de mesure a été déterminée conformément à la norme ISO Pour chaque type de matrice, 10 échantillons ont été analysés 2 fois en variant les conditions de recherche : analystes, balances et incubateurs différents. 2.3 Résultats Détermination de la répétabilité : La répétabilité pour les 2 types de matrice a été calculée conformément à la norme ISO Les tableaux présentant les tests de Grubbs et de Cochran peuvent être consultés dans l annexe 2. Les résultats suivants ont été obtenus : Répétabilité Matrice de catégorie 1 Matrice de catégorie log ufc/g ou ml 0.26 log ufc/g Détermination de l incertitude de mesure / écart type de reproductibilité : Catégorie 1 Echantillons Résultats analyste A Résultats analyste B Ecart type de reproductibilité (log ufc/g ou ml) Incertitude de mesure (log ufc/g ou ml) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
8 Catégorie 2 Echantillons Résultats analyste A Résultats analyste B Ecart type de reproductibilité Incertitude de mesure Le détail des résultats peut être consulté au laboratoire. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
9 3. Complément de validation Ce complément de validation concerne les matrices relevant de la catégorie 3 selon la norme ISO Matériaux utilisés - Matériel de référence SRM (lots : 7u-1106 et 7v-1206) - Eau peptone tamponnée (lot : 3K0602) - Gélose MYP (lot : ) - Gélose au sang (lot : ) 3.2. Organisation Détermination de la répétabilité : Préparation des échantillons pour l essai : - Salade de crustacés: A une prise d essai de 10g, ajouter 3 flacons de standard SRM et 86ml d eau peptonée tamponnée (solution mère). Personnes ayant participé à cette validation : O. Closset, A. Georges, F. Marlier, S. Petit, B. Polderman, S. Randour et G. Yurt. Pour pouvoir analyser les résultats suivant le norme ISO 5725, les solutions mères ont été analysées lors de 8 situations avec 6 répétitions pour chaque situation. Les boîtes de gélose MYP ont été ensemencées avec 0.1ml de la solution mère. Les boîtes ensemencées ont été placées à 30 C (incubateur 442) le 05/02/16 à 12h30. Elles ont été lues le 06/02/14 à 09h00. Pour la confirmation, les géloses au sang ont été placées à 30 C (incubateur 442) le 06/02/14 à 09h30. Elles ont été lues le 07/02/14. Le détail des résultats peut être consulté au laboratoire (annexe 3). Détermination de l incertitude de mesure / écart type de reproductibilité : L incertitude a été déterminée conformément à la norme ISO échantillons ont été analysés 2 fois en variant les conditions de recherche : analystes, balances et incubateurs différents. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
10 3.3. Résultats Détermination de la répétabilité : La répétabilité a été calculée conformément à la norme ISO Les tableaux présentant les tests de Grubbs et de Cochran peuvent être consultés dans l annexe 4. Les résultats suivants ont été obtenus : Répétabilité Matrice de catégorie log ufc/g Détermination de l incertitude de mesure / écart type de reproductibilité : Catégorie 3 Echantillons Résultats analyste A Résultats analyste B Ecart type de reproductibilité Incertitude de mesure Le détail des résultats peut être consulté au laboratoire. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
11 4. Justesse Analyse d échantillons certifiés (Standards SRM) : Date Analyste Résultat obtenu (ufc/ml) Résultat obtenu (log ufc/ml) Résultat attendu (log ufc/ml) Janvier Février Avril Mai Juin Août Septembre Ecart observé entre le résultat attendu et le résultat obtenu (log ufc/ml) Pour les tests retenus, aucun écart n est supérieur à 0.09 log en valeur absolue. 5. Tests interlaboratoires Organisateur Date Matrice z-scores FEPAS Septembre 2007 Riz 0.2 BIPEA Avril 2008 Viande 0.92 Novembre 2008 Viande 0.61 Janvier 2009 Viande 1.09 Mai 2009 Viande 0.11 Novembre 2009 Viande 0.44 Février 2010 Viande 0.25 Mai 2010 Viande 0.25 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
12 Octobre 2010 Viande SLV Janvier 2009 Aliment lyophilisé 0.47 ; 0.64 Janvier 2010 Aliment lyophilisé 0.62 ; 0.19 QM (LGC Février 2009 Poudre de lait 0.10 ; 0.21 Standards) Mars 2010 Poudre de lait 0.40 ; 0.46 Mars 2012 Poudre de lait 1.22 ; Conclusions Détermination de la répétabilité, de l écart type de reproductibilité et de l incertitude de mesure : Catégories 1 : liquides et poudres Catégories 2 : mélanges de solides Catégories 3 : petits et très petits solides Répétabilité Ecart type de reproductibilité Incertitude de mesure Etude de la justesse Pour les tests retenus, aucun écart n est supérieur à 0.09 log en valeur absolue. La justesse a également été prouvée par l obtention de bons résultats lors de la participation à des tests interlaboratoires. Qualification du personnel Les personnes ayant participé à cette validation sont qualifiées pour le dénombrement de la flore mésophile aérobie totale. Elles devront régulièrement participer à des analyses interlaboratoires et obtenir des résultats satisfaisants. 4. Annexes - Annexe 1 : Validation initiale Détail des résultats - Annexe 2 : Validation initiale Tests de Grubbs et de Cochran (matrices 1 et 2) - Annexe 3 : Complément de validation Détail des résultats - Annexe 4 : Tests de Grubbs et de Cochran Matrice 3 - Annexe photos LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
13 Annexe 1 Validation initiale Détail des résultats Le détail des résultats peut être consulté au laboratoire. Annexe 2 : Validation initiale Tests de Grubbs et de Cochran Le détail des tests peut être consulté au laboratoire. Annexe 3 : Complément de validation Détail des résultats Le détail des résultats peut être consulté au laboratoire. Annexe 4 : Complément de validation - Tests de Grubbs et de Cochran Le détail des tests peut être consulté au laboratoire. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
14 Annexe photos Ensemencement de la gélose MYP Aspect des colonies caractéristiques sur gélose MYP LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
15 Résultat positif d hémolyse sur gélose au sang LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13
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