Rotavirose et diarrhée chez le poulain pur sang arabe en Tunisie

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1 ARTICLE ORIGINAL Rotavirose et diarrhée chez le poulain pur sang arabe en Tunisie A. CHABCHOUB, F. LANDOLSI, M. CHERKAOUI, M. EZZAOUIA et A. GHORBEL Service de Pathologie Médicale des Équidés et Carnivores, Législation Vétérinaire, École Nationale de Médecine Vétérinaire, 2020 Sidi-Thabet, Tunisie Fondation Nationale d Amélioration de la Race Chevaline, 2020 Sidi-Thabet, Tunisie Toute correspondance relative à cet article doit être adressée au Dr CHABCHOUB RÉSUMÉ Les auteurs recherchent par la technique d'agglutination passive sur particule de latex le rotavirus lors de diarrhée chez le poulain. Soixante et onze poulains pur sang arabes ont été explorés. Cinquante parmi eux présentent de la diarrhée lors de l'exploration et 21 poulains sains ont été considérés comme témoins. Le rotavirus équin a été retrouvé dans les fèces de 6 poulains parmi les 50 sujets à diarrhée soit une incidence de 12 % contre 2 parmi 21 individus sains (soit 9,5 %). Des corrélations en fonction du statut sanitaire, de l'âge et du sexe ont été dégagées. MOTS-CLÉS : rotavirus - diarrhée - cheval. SUMMARY Rotavirus and diarrhea in arabian foal in Tunisia. By A. CHAB- CHOUB, F. LANDOLSI, M. CHERKAOUI, M. EZZAOUIA and A. GHORBEL. The authors search, by a rapid test based on latex agglutination, for rotavirus in faeces of foals with diarrhea. Seventy-one arab thoroughbred foals were explored, among them 50 showing diarrhea at the time of the exploration and 21 safe foals were taken as a control group. Rotavirus were found in faeces of 6 foals among 50 foals with diarrhea (12%). Some correlation according to age, sex and heath statut were brought out. KEY-WORDS : rotavirus - diarrhea - horse. Introduction Chez le poulain, la diarrhée est une pathologie fréquemment rencontrée durant la période précédant le sevrage. URQUART [23] estime que 80 % des poulains ont eu durant les six premiers mois de la vie au moins un épisode diarrhéique. L'origine de tel trouble est multiple et le facteur primitif ne peut pas toujours être identifié avec certitude [12]. Des études récentes montrent que le plus souvent les virus sont les premiers facteurs pathogènes et que les bactéries sont des agents de surinfection et complication qui aggravent l'entérite virale [5]. Les virus les plus souvent incriminés lors de la diarrhée du poulain sont les adénovirus, les coronavirus et les rotavirus [21]. Si les adénovirus et les coronavirus équins sont mal connus, l'existence et le rôle prédominant des rotavirus sont actuellement bien établis [20]. Il nous a semblé intéressant de réaliser pour la première fois au Maghreb la recherche, par le biais de la technique d'agglutination passive sur particule de latex, des rotavirus dans le syndrome diarrhique du poulain pur sang arabe. 1. Matériel et méthodes A) CHEVAUX Soixante et onze poulains de race pur-sang arabe, âgés de moins de trois mois ont été explorés. Les animaux prélevés ont été répartis en deux groupes. Un premier groupe (lot D) constitué de 50 poulains présentant une diarrhée lors de nos visites et un second groupe (lot T) comprend 21 poulains témoins, ne présentant aucune manifestation pathologique.

2 410 CHABCHOUB (A.) ET COLLABORATEURS B) MATERIEL POUR LA RÉALISATION DE L AGGLUTI- NATION PASSIVE AU LATEX (APL) Nous avons utilisé le kit ROTALEX*. Il est fabriqué par le laboratoire ORION DIAGNOSTICA 1 et commercialisé par le laboratoire FUMOUZE DIAGNOSTICS. Ce kit contient le latex réactif ROTALEX, le latex contrôle ROTALEX, le contrôle positif ROTALEX, 20 lames à usage unique, des agitateurs à usage unique. Pour la préparation de l'échantillon fécal, le fabriquant du kit propose deux techniques, la technique de centrifugation et la technique de filtration. Nous avons choisi de réaliser la première technique et avons donc utilisé une centrifugeuse de marque HETTICH ZENTRIFUGEN 2, Modèle UNIVER- SAL 16A, des pipettes pasteur et des tubes en plastique de 5 ml pour la dilution des selles. C) LES PRÉLÈVEMENTS Durant la saison de monte 1998, nous avons effectué deux visites par semaine au haras. Au cours de ces visites, nous avons passé en revue l'état de santé de chaque poulain présent sur les lieux, afin de repérer les individus à prélever. Les prélèvements de matières fécales sont recueillis directement dans l'ampoule rectale du poulain. D) RECHERCHE DU ROTAVIRUS PAR LA TECHNIQUE D APL 1. Orion Corporation Orion Diagnostica, P.O. Box 83, SF Espoo, Finland. 2. Hettich. Gartenstr. 100, D-78532, Tuttlingen. 1) Principe de l'apl Le procédé consiste à sensibiliser des particules de latex en les incubant avec des immunoglobulines dirigées contre l'antigène de groupe des rotavirus. En présence de cet antigène, les particules sensibilisées sont agglutinées par la formation de liaisons antigène-anticorps. Pour éviter les résultats erronés par agglutination non spécifique, on utilise, en plus, pour chaque échantillon, un contrôle formé par des particules de latex non sensibilisées. Ce contrôle ne doit jamais agglutiner, sinon le résultat est dit non interprétable. 2) Mode opératoire Les échantillons ont été étudiés selon le mode opératoire suivant : l'échantillon de selles est dilué au 1/10 ème avec le tampon rotalex. Cette dilution est suivie d'une agitation mécanique. On laisse ensuite la suspension reposer durant 15 mn. On mélange à nouveau puis on centrifuge pendant 5 mn à 3000 g. On prélève grâce à une pipette pasteur 0,5 ml à 1 ml de surnageant et on dépose sur chacune des deux cases de la lame une goutte, soit 50 microlitres environ. On prend soin d'identifier les deux cases, par exemple R et C. On ajoute une goutte de latex réactif sur la case R et une goutte de latex contrôle sur la case C. On mélange soigneusement les deux gouttes présentes dans chacune des cases et on les étale sur toute la surface des cercles. On imprime à la lame un mouvement lent de rotation puis, en utilisant une loupe grossissante, on lit la réaction. 3) Lecture et interprétation de la réaction d'apl La lecture de la réaction doit se faire dans les deux minutes qui suivent la dernière étape de la réalisation de la technique. On note alors la présence ou l'absence d'agglutination, visible à l'œil nu, dans chacune des deux cases de la lame. E) ÉTUDE STATISTIQUE La différence entre les groupes a été établie par un test non paramétrique, le test χ 2. La différence a été considérée comme significative au risque d'erreur de 5 %. 2. Résultats A) INCIDENCE GLOBALE DES ROTAVIRUS Chez les 71 poulains testés, 8 poulains se sont révélés positifs à l'agglutination passive au latex, soit une incidence globale de 11,26 %. Six sujets sur les cinquante poulains à diarrhée sont positifs à l'apl. L'incidence des rotavirus chez les poulains diarrhéiques est égale à 12 %. Pour le lot témoin, 2 poulains sur 21 sont positifs à l'apl, soit une incidence de 9,52 %. La différence entre l incidence des rotavirus chez les deux lots n est pas statistiquement significative. Ces résultats sont consignés dans le tableau I. B) INCIDENCE DES ROTAVIRUS EN FONCTION DE L'ÂGE L'incidence des rotavirus selon l'âge révèle l'absence de l'agent pathogène chez les poulains âgés de plus d'un mois (soit une incidence de 0 %) mais 12,9 % des poulains âgés de moins d'un mois sont positifs à l'apl (tableau II). Chez les poulains diarrhéiques (lot D), âgés de moins de 4 semaines, l'incidence des rotavirus est égale à 13,95 %. Elle est par contre de 10,52 % chez les poulains témoins âgés de moins de 4 semaines (lot T). La différence est non significative. Aucune différence significative n a été observée entre l incidence des rotavirus chez les poulains de moins de 4 semaines et celles concernant les sujets âgés de plus de 4 semaines. Ceci serait dû au trop faible effectif. C) INCIDENCE DES ROTAVIRUS EN FONCTION DU SEXE L'incidence des rotavirus selon le sexe montre que les individus de sexe femelle sont les plus touchés (tableau III). En effet chez les femelles diarrhéiques (lot D) l'incidence est de 20 %, alors qu'elle est de 4 % chez les mâles du même groupe. L'incidence des rotavirus chez les mâles témoins (lot T) est nulle. Elle est par contre de 15,38 % chez les femelles du même lot. Le rotavirus a été retrouvé chez 18,42 % des femelles des deux groupes contre uniquement 3,03 % chez l'ensemble des mâles

3 ROTAVIROSE ET DIARRHÉE CHEZ LE POULAIN PUR SANG ARABE EN TUNISIE 411 La différence est statistiquement significative entre l incidence des rotavirus chez les femelles et les mâles. 3. Discussion Au préalable discutons la méthodologie préconisée. Durant la saison de monte de 1998, 207 juments poulinières sont rentrées au haras de Sidi Thabet pour mettre bas et/ou être saillies. Cet élevage est de ce fait le plus représentatif des élevages de pur sang-arabe en Tunisie, non seulement du point de vue effectif et activité, mais aussi parce que les animaux accueillis sont de provenances diverses. Le nombre des poulains pur sang arabes ayant fréquenté le haras de Sidi Thabet durant la saison de monte de 1998 est de 139. Les 71 poulains étudiés représentent donc un taux de 51,07 % par rapport à l'ensemble des poulains présents en La taille de notre échantillon est donc représentative de l'effectif total des poulains présents au haras en Ainsi, le nombre des poulains testés ayant présenté une épisode diarrhéique lors de nos visites est égal à 50, soit un taux de 35,97 % par rapport à l'effectif total. Nous avons exclu la diarrhée de chaleur, qui est une diarrhée transitoire qui apparaît entre le 4 ème et le 14 ème jour de vie du poulain. Elle correspond aux premières chaleurs de la jument après le part [19]. APL : Agglutination passive sur latex TABLEAU I. Incidence globale des rotavirus chez les poulains à diarrhée et témoins explorés. A.P.L. : Agglutination passive au latex TABLEAU II. Incidence des rotavirus chez les poulains à diarrhée et témoins explorés en fonction de l âge. A.P.L. : Agglutination passive au latex (S) : Valeurs significatives TABLEAU III. Incidence des rotavirus chez les poulains à diarrhée et témoins explorés en fonction du sexe.

4 412 CHABCHOUB (A.) ET COLLABORATEURS Quand au nombre de poulains témoins, il est égal à 21, soit un taux de 29,57 % par rapport à notre échantillon et 15,1 % par rapport à l'effectif total des poulains issus du haras de Sidi Thabet. La technique d'agglutination passive sur particules de latex a été utilisée dans ce travail. C'est une technique d'apparition relativement récente. Elle figure parmi les techniques les plus rapides et les plus facilement réalisables en matière de recherche des rotavirus [2]. Elle peut être utilisée pour la recherche de rotavirus de différentes espèces notamment du rotavirus humain [2], du rotavirus bovin [10] et du rotavirus équin [18]. Le kit "ROTALEX*" est initialement destiné à la recherche du rotavirus humain. Cependant, l'existence d'antigènes de groupe communs à tous les rotavirus permet d'utiliser ce kit pour la détection de rotavirus appartenant à diverses espèces animales, notamment pour la détection du rotavirus équin [7, 18]. Les auteurs qui ont comparé l'a.p.l. à d'autres méthodes de détection des rotavirus, ont affirmé que le kit ROTALEX* est doté d'une grande fiabilité [2, 7]. En effet la comparaison entre la microscopie électronique et le test ROTALEX*, au cours d'une étude portant sur 100 échantillons de fèces humains a démontré que la concordance dans les résultats négatifs a été parfaite et que la concordance a été bonne avec les résultats positifs puisqu'elle a été obtenue dans plus de 88 % des cas [2]. Une comparaison entre la technique ELISA et le Kit ROTALEX montre qu'il y a concordance complète entre ces deux méthodes lorsqu'elles sont pratiquées sur des poulains entéritiques [7]. La concordance entre ces deux méthodes, pratiquées sur des poulains n'ayant pas de diarrhée est par contre de 95,3 % [7]. La comparaison entre deux méthodes ne permettant pratiquement jamais d'obtenir une concordance de 100 %, la technique d'a.p.l n'en demeure pas moins une méthode de choix pour le dépistage des rotavirus. Sur le plan technique, l'a.p.l nous a paru facile à réaliser, rapide et nécessitant peu de matériel pour sa mise en œuvre. De plus l'a.p.l nécessite un temps de réalisation n'excédant guère 30 minutes. La lecture du test est également rapide puisque l'on obtient le résultat 1 à 2 minutes après adjonction du réactif. L'agglutination est clairement visible, cependant la lecture peut être facilitée par l'emploi d'une loupe. L'A.P.L est donc tout à fait adaptée à l'utilisation sur le terrain pour un diagnostic rapide et fiable de routine, contrairement aux méthodes sérologiques qui peuvent aider à effectuer des enquêtes rétrospectives. En effet, en raison du délais d'apparition des anticorps anti-rotavirus, ces méthodes ne peuvent aider à déceler l'infection qu'une dizaine de jours après le début de celle-ci [3]. Ceci retarde considérablement l'établissement d'un diagnostic et par conséquent la mise en place d une conduite thérapeutique éventuelle. Le rotavirus équin a été mis en évidence chez 6 sujets parmi 50 poulains diarrhéiques. Ce qui représente une incidence de 12 %. De ce fait, nous pouvons affirmer avec certitude la présence du rotavirus équin en Tunisie. L'incidence des rotavirus chez les poulains atteints de diarrhée est comparable à ce qui a été rapporté par HOLLAND et coll. [9] qui trouvent un taux de 11,66 %, dans une étude réalisée sur 90 poulains, dont 60 présentaient de la diarrhée. Par contre, GILLESPIE [8] aboutit à un taux de 61,9 %, dans une étude concernant 105 poulains atteints de diarrhée. PLATEAU et coll. [16] ainsi que CONNER [5] rapportent des taux intermédiaires (respectivement 27 et 30 %). Le diagnostic expérimental reste donc, le seul moyen sûr et efficace pour détecter le rotavirus. Il apparaît que l'incidence des rotavirus chez les poulains diarrhéiques issus du haras de Sidi Thabet soit faible. Cela est certainement dû à une hygiène d'élevage irréprochable et à une grande expérience dans ce domaine. Malgré la présence du rotavirus équin dans leurs fèces, deux poulains parmi les vingt et un témoins ne présentent aucun signe de diarrhée. L'incidence des rotavirus chez les poulains témoins est égale à 9,52 %. Ce chiffre est comparable à celui cité par FETON [7] lors d'une étude comparable concernant 57 poulains témoins. En effet, FETON estime que l'incidence des rotavirus chez les poulains témoins est égale à 10 % [7]. Le fait que l'on puisse trouver des poulains porteurs de rotavirus sans qu'ils n'en expriment les symptômes, laisse à penser que la quantité de virus présente dans la lumière intestinale et l'immunité du poulain, conditionnent l'apparition de la diarrhée. L'étude statistique n'a montré aucune différence significative entre l'incidence des rotavirus chez les poulains diarrhéiques et celle des poulains témoins. Tout porte à croire que le rotavirus équin serait très peu ou pas du tout en cause dans les diarrhées observée au haras de Sidi Thabet. Le caractère bénin de ces diarrhées nous oriente vers des étiologies non infectieuses ou infectieuses à germes peu virulents. Dans tous les cas, la diarrhée ne semble pas constituer un problème d'élevage au haras de Sidi Thabet. Il serait donc intéressant d'étudier l'incidence des rotavirus sur un plus grand effectif, issu d'élevages équins autres que celui de Sidi Thabet, où les conditions d'élevage ne sont pas toujours aussi satisfaisantes. En outre, il serait judicieux d'associer à la recherche virologique, des études parasitologiques et bactériologiques afin de mieux cerner les étiologies des diarrhées néonatales du poulain. L'âge des poulains est important à considérer. En effet, 86,05 % des poulains à diarrhée ont moins de 4 semaines d'âge. De même, tous les poulains testés positifs ont moins d'un mois. L'étude statistique n'a pas révélé de différence significative entre l'incidence des rotavirus chez les poulains âgés de plus de 4 semaines et ceux âgés de moins de 4 semaines en raison du faible nombre de ces derniers. Néanmoins, en s'appuyant sur les résultats d'autres auteurs, on peut affirmer que ce sont les poulains âgés de moins d'un mois qui sont les plus exposés à l'infection par le rotavirus [7].

5 ROTAVIROSE ET DIARRHÉE CHEZ LE POULAIN PUR SANG ARABE EN TUNISIE 413 Cette diminution de l'infection par le rotavirus avec l'âge (au delà d'un mois) pourrait être expliquée par le fait que les récepteurs du virus situés à la surface des cellules épithéliales de l'intestin tendent à diminuer avec l'âge [24]. D'un autre côté, la répartition des cas positifs montre que l'infection due aux rotavirus prédomine chez les femelles. C'est ainsi que l'on observe 7 cas de positifs sur 38 chez les femelles contre seulement 1 cas sur 33 chez les mâles. L'étude statistique montre une différence significative entre ces deux chiffres. Cependant, nous ne voyons aucune explication à cette différence. La question qui reste posée est quelle est la relation exacte entre rotavirus et diarrhée du poulain. Dans notre étude, il apparaît que le rotavirus équin n'influence pas l'apparition de la diarrhée du poulain. Ce qui nous amène à discuter des facteurs liés à la pathogénicité du virus. Cette dernière pourrait bien être influencée par la virulence de la souche virale en cause. Chez l'espèce bovine, il est désormais prouvé qu'il existe une virulence inégale des souches de rotavirus impliquées dans la diarrhée néonatale du veau [1]. Le profil électrophorétique des polypeptides des souches les moins virulentes diffèrent de celui des souches les plus pathogènes [4]. Une constatation identique a été faite par TZIPORI et coll. [22] lors d'une étude qui consistait à inoculer le rotavirus équin à des poulains nouveau-nés. La souche utilisée s'est révélée peu pathogène et son profil électrophorétique différait légèrement de ceux des souches plus virulentes utilisées dans des travaux similaires [22]. Une étude réalisée sur des souriceaux a démontré que le gène 4, codant pour la protéine virale 4 (VP4), serait responsable de la virulence des souches pathogènes de rotavirus [14]. Cette protéine joue un rôle dans l'attachement, la pénétration et le tropisme cellulaire du rotavirus [14]. Des poulains peuvent être porteurs de rotavirus sans en exprimer les symptômes [17], ce qui laisse à penser que la qualité du transfert de l'immunité passive d'origine maternelle serait à l'origine de l'expression ou non du pouvoir pathogène du rotavirus, à l'image de ce qui a été rapporté chez l'espèce bovine [13] Enfin, l'aptitude du rotavirus à provoquer la diarrhée, est augmentée lors d'association bactérienne, notamment lors d'association rotavirus-colibacille [15]. En effet, l'inoculation du rotavirus seul à des poulains de 1 à 2 jours d'âge, provoque dans la moitié des cas l'apparition d'une diarrhée. Par contre l'inoculation d'un rotavirus et d'un colibacille pathogène pour le veau, induit systématiquement des troubles diarrhéiques sévères [22]. Un nombre important de chevaux adultes possèdent des anticorps anti-rotavirus [11]. Ceci est en faveur du fait que l'infection serait dans la plupart des cas asymptomatique [11]. L'expression du pouvoir pathogène est influencé par la virulence des souches en cause, par l'âge des sujets et probablement par l'efficacité du transfert de l'immunité passive d'origine maternelle. Les chevaux adultes et les poulains porteurs sains pourraient multiplier et disséminer le virus. La grande résistance de ce dernier contribue à sa persistance dans le milieu extérieur [6]. Le rotavirus équin à lui seul, peut être responsable de diarrhée chez des sujets prédisposés. Dans d'autres cas, il peut être initiateur d'infection entéritique et agir en concomitance avec une infection bactérienne. Conclusion L importance de la rotavirose de poulain dans le monde nous a amené à rechercher son impact en Tunisie. Lors de cette enquête, réalisée sur 71 poulains pur-sang arabes âgés de moins de trois mois, nous avons mis en évidence le rotavirus équin chez 6 sujets parmi 50 poulains diarrhéiques, soit une incidence de 12 %. Cette incidence reste faible, comparée à d autres études similaires et aucune différence significative entre l incidence des rotavirus chez les poulains à diarrhée et celle relative aux poulains témoins n a été observée. L hygiène et les conditions d élevage rigoureuses pratiquées au haras de Sidi Thabet ne saurait expliquer, en totalité ce résultat, ce qui nous amène à nous poser un certain nombre de questions concernant la pathogénicité du rotavirus équin. En effet, la pathogénicité du rotavirus du poulain dépend probablement de la virulence des souches en cause, à l image des observations faites chez l espèce bovine. En outre, l efficacité du transfert de l immunité passive d origine maternelle, pourrait jouer un rôle capital dans l expression du pouvoir pathogène du virus. Le diagnostic de la rotavirose du poulain, peut être effectué simplement en faisant appel à des méthodes comme l agglutination passive au latex. Cette technique offre l avantage d être rapide, fiable et facile à mettre en œuvre. Elle peut, par conséquent, être utilisée sur le terrain par le praticien, pour établir un diagnostic rapide de la maladie. Cette étude pourrait être complétée par des travaux visant à mettre en évidence le lien éventuel qui pourrait exister entre l infection par le rotavirus équin et l efficacité du transfert de l immunité d origine maternelle chez le poulain. Bibliographie 1. BEN TANFOUS A. : Les diarrhées chez le veau à rotavirus, enquête sérologique en Tunisie.Thèse Doc. Méd. 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6 414 CHABCHOUB (A.) ET COLLABORATEURS 10. LABBAYE M. : Application de la technique d agglutination sur particules de latex à la détection des rotavirus dans les fecès des veaux. Thèse Doc. Méd. Vét., Lyon, LANSIVAL B., SCHWERS A., CLAEYS B., DAGENAIS L., MAEMHOUDT M., PASTORET P.P. et ANTOINE H. : Fréquence de l infection par le rotavirus chez les chevaux en Belgique. Ann. Méd. Vét., 1981, 125, MERRITT A.M. : Pathophysiology of diarrhoea in the foal. Proc. Ass. Am. Eq. Pract. 1979, 25, MOON H.W. : Mecanisms in the pathogenesis of diarrhea : A review. J. Am. Vet. Med. Ass., 1978, 172, OFFIT P.A., BLAVAT G., GREEBERG H.B. et CLARK H.F. : Molecular basis of rotavirus virulence : Role of gene segment 4. J. Virol., 1984, 57, PASTORET P.P. et SCHOENAERS F. : Les diarrhées néonatales d origine virale chez le veau. Ann. Méd. Vét., 1977, 21, PLATEAU E., DAUGUET C., CRUCIERE C., JACQUET A., VAIS- SAIRE J., CHEYROUX M. et GAYOT G. : Première mise en évidence d un rotavirus chez le poulain en France. Bull. Soc. Vét. Prat. de France, 1982, 66, PLATEAU E., VAISSAIRE J., SOULE C. et JACQUET A. : Les diarrhées du poulain. Prat. Vét. Equine, 1985, 17, PLATEAU E., STIOT V., COLLOBERT C. et SOREL P. : Les diarrhées à rotavirus du poulain : épidémiologie et essais de prophylaxie médicale. Bull. Soc. Prat. de France, 1990, 74, ROSSDALE P.D. et RICKETTS S.W. : Le poulain : élevage et soins vétérinaires, 417 pages, Maloine S.A. Éditeur, Paris, SAMAILLE J.P. : Pathologies gastro-intestinales du poulain. Lettre hebdo du vétérinaire, (Supplément Cheval). 1986, (81), SPENSLEY M.S. : Diagnosing and treating diarrhea in neonatal foals. Eq. Practice, 1987, 9, TZIPORI S., MAKIN T., SMITH M. et KRAUTIL F. : Enteritis in foals induced by rotavirus and enterotoxenic Escherchia coli. Aust. Vet. J., 1982, 58, URQUART K. Diarrhea in foals. In Practice., 1981, 3, WOLF J.L., CUKOR G., BLACKLOW N.R., DANBRAUSKAS R. et TRIER J.S. : Susceptibility of mice to rotavirus infection : effects of age and administration of corticosteroids. Infect. Immun., 1981, 33,