Rapport annuel d'activité, année Laboratoire National de Référence. Peste équine

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1 Rapport annuel d'activité, année 214 Laboratoire National de Référence Peste équine Nom du responsable du LNR Sylvie Lecollinet Nom de l'unité où l'activité du LNR est mise en œuvre UMR1161 Virologie INRA, ANSES, ENVA Nom du laboratoire où l'activité du LNR est mise en œuvre Laboratoire de Santé Animale de Maisons-Alfort Nombre de laboratoires agréés et/ou reconnus dans le réseau Précisez la catégorisation du danger (en SA) sinon la justification de l'existence du mandat de LNR La peste équine est un danger sanitaire de catégorie 1. 1

2 Introduction Les faits marquants de l'année - Participation à deux EILA peste équine à l'échelon européen et international Ces deux EILA ont été organisés par le LR-UE peste équine (Laboratorio Central de Veterinaria, Algete-Madrid, Espagne). Le premier EILA, concernant le diagnostic sérologique et moléculaire de la peste équine et l'ensemble des laboratoires nationaux de référence de l'union Européenne, a eu lieu en juillet-août 214. Le deuxième EILA a été organisé en fin d'année avec le soutien de l'organisation Mondiale de la Santé Animale pour comparer et harmoniser les techniques de diagnostic moléculaire de la peste équine au niveau international (avec 6 laboratoires de référence d'europe, d'afrique ou d'amérique); les résultats ont été envoyés courant janvier Méthodes développées ou révisées Nombre de méthodes développées ou révisées proposées à l autorité compétente Nombre de méthodes développées ou révisées qui sont susceptibles d être prêtes pour être proposées à l autorité compétente au cours de l année N+1 2. Matériels biologiques ou chimiques, matériaux de référence et échantillons et souches d'intérêt Décrire ici les collections d'échantillons biologiques ou d'autre nature (environnement, aliment...) conservés par le LNR; indiquer les méthodes de conservation, la température, le nombre de "repositories", le nombre d'échantillons par souche, l'enregistrement associé...). 1. Souches virales Souches virales Nombre de Souches ou lots Lieu et date d isolement ou Origine AHSV-1 ref 1 South Africa AHSV-2 ref 1 South Africa AHSV-3 ref 1 South Africa AHSV-4 ref 1 South Africa AHSV-5 ref 1 South Africa AHSV-6 ref 1 South Africa 2

3 AHSV-7 ref 1 South Africa AHSV-8 ref 1 South Africa AHSV-9 ref 1 South Africa AHSV-1 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-2 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-3 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-4 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-5 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-6 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-7 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-8 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-9 USDA 1 Plum Island USDA AHSV-3 1 Zimbabwe 1993 AHSV-5 1 Zimbabwe 1993 AHSV-7 1 Zimbabwe 1993 AHSV-4 MAR 1 Maroc 1991 AHSV-4 ESP 1 Espagne 1991 AHSV-9 SENE 1 Sénégal 2 AHSV-2 MALI 1 Mali 27 Les souches virales sont conservées à -8 C, au sein d'un laboratoire confiné de niveau 3. Des fiches (Fiche Procédure A VIRO V.5.1) sont renseignées (origine du prélèvement initial, espèce, historique de passage ) et archivées dans X:\VIRO\Enregistrement\5 Consommable \ ConsommableBiologique\Collection\AHSV. 2. Sérums et autres échantillons (sang EDTA, organe), sont conservés à -2 C (sérums) ou à -8 C (autres échantillons) lorsqu'un test diagnostic ou une enquête a permis de démontrer l'infection ou la vaccination des équidés. Nous disposons d'une sérothèque d'environ 3 sérums; quelques autres échantillons (environ 1) sont également disponibles. Ces échantillons, leurs nombres et statut sont enregistrés dans des documents excel spécifiques à chaque enquête ou s'il s'agit d'échantillons reçus dans le cadre d'une demande analytique, ils gardent systématiquement leur identification LIMS lors de leur entrée en échantillothèque. Nombre de souches/échantillons reçu(e)s et mis(es) en collection dans l'année Nombre de souches/échantillons maintenu(e)s au total 25 3

4 3. Activités d'analyse 3.1 Analyses officielles de première intention Nombre d'analyses de première intention réalisées dans l'année (de biotypie, sérotypie, caractérisation moléculaire...) 11 Détaillez ici par type d'analyse de première intention Il s'agit d'analyses par ELISA compétition peste équine (11 analyses en 214) Analyses officielles de confirmation Nombre d'analyses de seconde intention réalisées dans l'année (de biotypie, sérotypie, caractérisation moléculaire...) 72 Détaillez ici par type d'analyse de confirmation Il s'agit d'analyses par séroneutralisation peste équine, réalisées lorsque des échantillons ont été trouvés positifs en anticorps anti-virus peste équine par ELISA de compétition. Taux de confirmations par type d'analyse (= nombre de résultats confirmés / nombre d'analyses officielles de seconde intention réalisées) 72/ Autres analyses Nombre estimé d'autres analyses (non officielles) réalisées dans l'année en lien avec le mandat de LNR 172 Détaillez ici par type d'autres analyses Analyses Luminex pour la validation de nouvelles méthodes sérologiques pour le diagnostic de la peste équine 4

5 4. Activités de production et de contrôle de matériaux de référence et de réactifs biologiques Le LNR produit-il et fournit-il des réactifs? Le LNR fournit-il des matériaux de référence? Le LNR réalise-t-il des contrôles de réactifs commerciaux? 5. Activités d'expertise scientifique et technique 5.1. Demandes d expertise scientifique et technique du ministère (chargé de l agriculture, santé, etc ) ou d instances communautaires et internationales qui concernent votre domaine de compétence Nombre de rapports d'est rendus dans l'année 5.2. Autres expertises Les membres de l'équipe du LNR peuvent avoir des activités d'expertise (internes: CES, GT ou externe: EFSA...) ou des activités auprès de commissions de normalisation (Afnor...). Détaillez ici ces activités et estimez le temps qui y est consacré. sans objet 5.3. Dossiers de demande d'agrément Nombre de dossiers de demande d'agrément étudiés dans l'année 5

6 5.4. Activités de conseil aux professionnels Détaillez ici ces activités et estimez le temps qui y est consacré Ces activités de conseil font suite à des contacts téléphoniques ou s provenant de cabinets vétérinaires ou de propriétaires d équidés (environ 2 par semaine). Ils font l'objet d'une prise en charge immédiate ou rapide (24h) (réponse aux questions, aide au diagnostic différentiel et conseils sur le diagnostic de laboratoire, transfert aux personnes compétentes si besoin). Temps consacré : 2% d'1 ETP. 6. Animation du réseau de laboratoires officiels 6.1. Organisation d'eila Précisez ici le nombre d'eila organisés par le LNR au cours de l année N Nom (s) et nombre(s) d'eila que vous prévoyez d'organiser au cours de l année N+1 Pas d'eila peste équine prévu en 215 Précisez le nombre d'eil (hors EILA - dont EILV en lien avec méthodes en cours de validation telles que précisées dans le paragraphe 1) organisés par le LNR au cours de l année N Précisez le nombre d'eil (hors EILA) que vous prévoyez d'organiser au cours de l année N Formation, organisation d'ateliers, accueil de stagiaires Nombre de journées d'échange et de restitution rassemblant les laboratoires agréés du réseau, organisées dans l'année 6

7 Nombre de sessions de formation des personnels des laboratoires agréés aux méthodes utilisées pour les contrôles officiels, organisées dans l'année 6.3. EILA auxquels le LNR a participé dans l'année Détaillez les EILA auxquels le LNR a participé dans l'année, dans le cadre : National; UE (EILA organisé par le LRUE); International Participation à deux EILA organisés par le LR-UE peste équine (LCV) (voir section faits marquants), l'un sur les diagnostics moléculaire et sérologiques à l'échelon européen (LNR des pays membres de l'union Européenne) en milieu d'année 214 et l'autre sur le diagnostic moléculaire uniquement à l'échelle internationale en fin d'année Participation aux activités de surveillance 7.1 PS/PC Existe-t-il un ou plusieurs PS/PC élaboré(s) par l'autorité sanitaire dans le champ du LNR? Plan de surveillance de la peste équine 7.2 Activités de surveillance hors PS/PC Dispositif(s) hors PS/PC Indiquer si le LNR est intégré à un (ou des) dispositif(s) de surveillance (hors PS/PC)? 8. Activités de recherche en lien avec l activité de référence 8.1. Recherches méthodologiques pour la référence Détaillez ici les recherches méthodologiques que vous avez réalisées dans l'année : objectifs, partenariats, apports du LNR, projets retenus dans le cadre d'appels à projets... - Développement d'une méthode diagnostique sérologique multiplex pour le virus de la peste équine - technologie luminex (collaboration Faculté Vétérinaire de Madrid, Almudena Sánchez-Matamoros et Jose-Manuel Sanchez-Vizcaino) Contexte : la peste équine est une maladie vectorielle majeure des équidés, qui se caractérise par une évolution grave, le plus souvent mortelle, de troubles fébriles intenses 7

8 associés à des atteintes sévères des fonctions cardiaque et respiratoire. Elle est due, comme le virus de la fièvre catarrhale ovine des ruminants, à un Orbivirus transmis par des moucherons piqueurs du genre Culicoides. Plusieurs épizooties spectaculaires ont sorti le virus de la peste équine de son berceau africain et attiré l'attention des autorités vétérinaires sanitaires sur son pouvoir de diffusion et la rapidité de sa propagation. La surveillance de cette maladie en Europe nécessite une amélioration des outils diagnostiques. Objectif : développement d'une méthode diagnostique multiplex pour la différentiation des animaux infectés et vaccinés (DIVA), reposant sur l'utilisation de la technologie luminex et des protéines recombinantes VP7 (antigène conservé entre les souches et présenté au système immunitaire lors d'infection ou de vaccination) et NS3 (antigène conservé et non présenté lors de vaccination avec un vaccin recombinant ou sous-unitaire). Résultats : Les résultats obtenus en 213 (voir RA LNR peste équine 213) ont été complétés et ont permis de démontrer la sensibilité de l'approche Luminex VP7 peste équine par rapport aux ELISA de compétition ou tests de neutralisation existants. Une publication scientifique est sous presse (Transboundary and Emerging diseases) et une autre a été soumise fin 214. Perspectives : les performances et les résultats DIVA obtenus font de cette technique luminex une approche diagnostique innovante et prometteuse, dans le cadre de la surveillance de la peste équine en Europe. Par : Cécile Beck, Corinne Sailleau, Sylvie Lecollinet, Stéphan Zientara 8.2. Recherches associées pour la référence Détaillez ici les recherches associées auxquelles vous avez participé dans l'année (participations à des études cliniques, études d'incidences, modèles d'infections expérimentales, études toxicologiques, essais vaccinaux...): objectifs, partenariats, apports du LNR, projets retenus dans le cadre d'appels à projets... - Développement d'un modèle murin d'infection expérimentale par le virus de la peste équine Dans le cadre du projet IFCE ANVIE (collaboration CERMN, IPP, Labéo Frank Duncombe, ANSES Dozulé et LSAn Maisons-Alfort), un modèle murin d'infection expérimentale par le virus de la peste équine a été développé au laboratoire, dans le but de pouvoir évaluer le potentiel thérapeutique d'une nouvelle molécule antivirale développée par le CERMN. 9. Relations avec le CNR Existence d'un CNR 8

9 1. Autres mandats Le LNR détient-il d'autres mandats de référence dans le même domaine de compétences Oui Si oui, précisez : Encéphalites virales des équidés : encéphalite West-Nile Annexes Listes des publications et communications: - Publications scientifiques internationales 214/ Sánchez-Matamoros A, Beck C, Kukielka D, Lecollinet S, Blaise-Boisseau S, Garnier A, Rueda P, Zientara S, Sánchez-Vizcaíno JM. Development of a Microsphere-based Immunoassay for Serological Detection of African Horse Sickness Virus and Comparison with Other Diagnostic Techniques. Transbound Emerg Dis. 215 Feb 19. doi: /tbed Publications nationales à destination des socioprofessionnels Zientara S, Faverjon C, Leblond A, Lecollinet S La peste équine: épidémiologie, diagnostic et prévention. Pratique Vétérinaire Equine, numéro spécial Infectiologie, 46 : Conférences invitées 215 Rencontres du RESPE sur les maladies vectorielles, à destination des vétérinaires sentinelles et des socioprofessionnels équins Présentation «Emergences des virus de la fièvre catarrhale ovine et Schmallenberg : quelles leçons pour la filière équine?» - Hippodrome de Vincennes, 2 novembre, S. Zientara - Communications internationales Communications orales Congrès annuel EPIZONE, Copenhague, Danemark, septembre 214 Sánchez-Matamoros A, Beck C, Kukielka D, Lecollinet S, Blaise-Boisseau S, Garnier A, Rueda P, Zientara S, Sánchez-Vizcaíno JM. New Diagnostic Technique for Serological Detection of African Horse Sickness Virus: Luminex Technology. 9