Détermination quantitative de la migration du 2,4- TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA par UPLC-MS/MS. Date d application

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1 Agence fédérale pour la Sécurité de la Chaîne alimentaire Administration des Laboratoires MET-LFSAL-120A Détermination quantitative de la migration du 2,4- Version V04 Date d application Rédaction par : Révision par : Autorisation de publication par : Fabian Etienne-Thewissen Marianne Aubry (Quality Manager) Fabian Etienne-Thewissen Gestion et localisation de la version valide : LFSAL : fichier M\Qualité\méthode\LAB23 I-MET120A Destinataires : Collaborateurs de la section Phyto/Résidus Mots clefs : Amines aromatiques, Matériaux, Contact, migration, simulant B, UPLC, spectrométrie de masse LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

2 Aperçu des modifications Révision Motif de la révision Partie du par/date * texte/portée de la révision 27/11/2012 Adaptation dans le texte Ensemble de la méthode 14/01/2013 NC Belac Audit L : adaptation du point «incertitude de mesure» Point /03/2013 Modification suite aux remarques pour la publication Point 4,6,8 * L écart entre la date actuelle et celle de la dernière révision ne peut pas dépasser 5 ans. LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

3 TABLE DES MATIERES 1. OBJECTIF CHAMP D APPLICATION DOCUMENTS LÉGAUX ET NORMATIFS DÉFINITIONS ET ABRÉVIATIONS PRINCIPE CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE CONSIGNES DE SÉCURITÉ ET MESURES SPÉCIFIQUES RÉACTIFS ET ADDITIFS RÉACTIFS SOLUTIONS APPAREILS METHODE CONDITIONS CHROMATOGRAPHIQUES ESSAIS DE MIGRATION : PRÉPARATION DE L ÉCHANTILLON DOPÉ : SÉQUENCE D ANALYSE CONTRÔLE DE LA QUALITÉ VÉRIFICATION DE LA STABILITÉ DU SYSTÈME CHROMATOGRAPHIQUE IDENTIFICATION DES PICS CONTRÔLE DE LA DROITE D ÉTALONNAGE CONTROLE DU BLANC SIMULANT RENDEMENT DU SIMULANT DOPÉ CALCUL ET RAPPORTAGE RÉFÉRENCE AUX PROCÉDURES, INSTRUCTIONS, DOCUMENTS, FORMULAIRES OU LISTES Y AFFÉRENTS PROCÉDURES FORMULAIRES ANNEXES... 9 LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

4 1. Objectif L objectif de cette méthode vise à quantifier la migration du 2,4 toluenedianiline, de l aniline et du 4,4 methylenedianiline dans le simulant B au départ d ustensiles et objets en polyamide destinés à être au contact de denrées alimentaires. La méthode doit atteindre la limite de quantification de 3 µg/kg de simulant pour chaque amine aromatique. 2. Champ d application La méthode s applique aux objets en polyamide dont l essai de migration est réalisé à l aide du simulant B. L essai de migration est réalisé en suivant les instructions du «Technical guidelines on testing the migration of primary aromatic amines from polyamide kitchenware and of formaldehyde from melamine kitchenware». EUR EN ère édition. 3. Documents légaux et normatifs - Règlement (UE) N 284/ «Technical guidelines on testing the migration of primary aromatic amines from polyamide kitchenware and of formaldehyde from melamine kitchenware». EUR EN ère edition (Version 7 Avril 2011) - Règlement (UE) 4. Définitions et abréviations MRM 2,4-TDA Multiple Reaction Monitoring 2,4 toluenediamine 4,4 MDA 4,4 méthylènedianiline Simulant B solution d eau distillée à 3% acide acétique (P/V) ACN UPLC MS ES+ IP IQ IC EC ev acétonitrile ultra performance liquid chromatography mass spectrometry electrospray positif ion précurseur ion de quantification ion de confirmation énergie de collision électronvolt 5. Principe L extrait de l essai de migration est neutralisé à l aide d ammoniaque et analysé par chromatographie liquide avec détection par spectrométrie de masse en mode MRM. LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

5 6. Caractéristiques de performance (Voir dossier de validation) Incertitude de mesure : - 2,4TDA : 52,2 % - Aniline : 25,1% - 4,4MDA : 29,7% 7. Consignes de sécurité et mesures spécifiques Suivre les instructions de sécurité spécifiées sur les fiches de sécurité des réactifs et dans le logbook de l appareil. 8. Réactifs et additifs 8.1 Réactifs Eau ultra-pure Eau déminéralisée Acide acétique 100% p.a Acétonitrile UPLC Ammoniaque 25% Diaminotoluene 98% Diaminodiphenylmethane 99% Aniline 99,5% Acide Formique 99% 8.2 Solutions Solution acide formique à 0,1% : En jaugé de 500 ml, prélever 0,5 ml d acide formique et porter au trait avec de l eau ultra-pure Simulant B : H 2 O/HAC 3% : En jaugé d 1 litre, peser 30g d acide acétique et porter au trait à l aide d eau déminéralisée Simulant B neutralisé : Le simulant B est amené à ph 7,4 (+/- 0,5) à l aide d amoniaque Solutions d étalonnage : Les solutions sont préparées lors de chaque série d analyses Solution mère (100 mg/l) : En jaugé de 100 ml, peser à 0,1 mg près environ 10 mg d amines aromatiques. Ajouter 90 ml de méthanol, dissoudre 5 minutes au bain à l ultra-son, puis porter au trait à l aide de méthanol Solution fille (10 µg/l) : En jaugé de 100 ml, prélever 10 µl de la solution mère et porter au trait avec le simulant B neutralisé. LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

6 Solutions étalons (1 µg/l 10 µg/l) : En vial, préparer les solutions d étalonnage comme décris dans le tableau ci-dessous : Niveau Concentration Solution fille ( ) Simulant B neutralisé µg/l µl µl L L L L L L Solutions de dopage : Solution mère (100 mg/l) : En jaugé de 100 ml, peser environ 10 mg d amines aromatiques. Ajouter 50 ml de méthanol et dissoudre 5 minutes au bain à l ultra-son. Porter au trait à l aide de méthanol Solution de dopage (1 mg/l) : En jaugé de 100 ml, prélever 1000 µl de la solution mère et porter au trait avec le simulant B neutralisé. 9 Appareils 9.1. Chaîne UPLC équipée : - d un détecteur de masse de type triple quadrupôle - d une colonne analytique permettant une résolution correcte des amines aromatiques. La colonne HSS T3, 2,1 mm x 50 mm, 1,8 µ (Waters) est donnée à titre d exemple Balance analytique ; 9.3. Bain à ultrasons ; 9.4. Réfrigérateur entre 0 et 8 C pour la conservation des solutions à injecter ; 9.5. Vortex ; 9.6. Verrerie classique de laboratoire ; 9.7. Etuves 9.8. Micropipettes LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

7 10 Méthode Les solvants utilisés sont de qualité UPLC Paramètres UPLC-MS/MS UPLC : Gradient d élution : Phase mobile A : H2O + 0,1% d acide formique Phase mobile B : Acetonitrile Temps Débit %A %B (ml/mn) Volume d injection : 5 µl Température de la colonne : 45 C Température autosampler : 15 C Solvant de rinçage de l aiguille, de la seringue, du wash seal : H2O/méthanol 80/20 Détecteur de masse : Polarité : ES+ Température de la source : 150 C Température de désolvatation : 650 C Débit de gaz de désolvatation : 1000 l/heure Débit de gaz cone : 150L/heure Débit de gaz collision : 0.2 ml/minute Paramètres MRM : Précurseur IQ IC EC (ev) 2,4-TDA ,4-TDA ANL ANL ,4-MDA ,4-MDA M-PDA Essais de migration : Se référer au Technical guidelines on testing the migration of primary aromatic amines from polyamide kitchenware and of formaldehyde from melamine kitchenware» (EUR EN). A la fin de l essai de migration, prélever 100 ml du simulant B et ajouter 4 ml d ammoniaque à 25%. Une aliquote est transférée en vial pour l analyse UPLC-MS/MS. LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

8 10.3 Echantillon dopé : Dans un flacon, verser 100 ml de simulant B et ajouter 300 µl de la solution décrite au point Placer le flacon à l étuve lors de la 3 ème migration des échantillons et suivre les conditions appliquées aux échantillons. A la fin de l essai de migration, ajouter 4 ml d ammoniaque à 25%. Une aliquote est transférée en vial pour l analyse UPLC-MS/MS Séquence d analyse Un maximum de 10 échantillons sera injecté entre deux contrôles (L2 et L4), le nombre sera adapté en fonction de la série : ex pour 14 échantillons, les contrôles seront placés après 7 échantillons. Séquence d injection :. solution d étalonnage à 1 µg/l : 1x. solution d étalonnage à 2 µg/l : 1x. solution d étalonnage à 9 µg/l 1x. échantillon dopé : 1x. blanc : 1x. solution de contrôle (L2) : 1x. solution de contrôle (L4) : 1x. solution de l échantillon 1 : 1x. solution de l échantillon 2 : 1x. maximum solution de l échantillon 10 : 1x. solution de contrôle (L2) : 1x. solution de contrôle (L4) : 1x. solution de l échantillon 11 : 1x. solution de l échantillon 12 : 1x. solution du dernier échantillon : 1x. solution de contrôle (L2) : 1x. solution de contrôle (L4) : 1x. blanc : 1x 11 Contrôle de la qualité 11.1 Vérification de la stabilité du système chromatographique Laisser l UPLC conditionner avec la phase initiale du gradient d élution jusqu à stabilisation de la ligne de base Identification des pics Identifier les amines aromatiques dans la solution d échantillon en comparant les temps de rétention avec les temps de rétention des solutions de contrôle l encadrant. Le temps de rétention ne peut différer de plus de 5 % Contrôle 1 ère ligne Contrôle de la droite d étalonnage La déviation entre la concentration mesurée et la concentration théorique doit être inférieure à 20%. Sinon, recommencer la préparation des solutions et réinjecter la séquence (toutes les LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

9 solutions peuvent être réinjectées dans les 24 heures suivant leur préparation si elles ont été conservées dans un réfrigérateur en flacon fermé) Contrôle du blanc simulant Afin de vérifier que la quantité d amines aromatiques apportée par le matériel et le simulant utilisés pour la préparation des échantillons est négligeable par rapport aux quantités déterminées dans ceux-ci, la valeur du bruit de fond (dans le blanc simulant) mesuré sur la largeur du pic au temps de rétention de l analyte ne devra pas dépasser 0,0005 mg/l. Sinon, rechercher l origine du problème et y remédier Justesse La concentration en amines aromatiques dans l extrait du simulant B dopé à 0,003 mg/kg devra être comprise dans l intervalle de la concentration théorique (0,003 mg/kg) associé à l incertitude de mesure déterminée avec le simulant B à la même concentration Contrôles seconde et troisième ligne : Des contrôles seconde et troisième ligne seront réalisés selon la procédure : «LAB 23 P 020 Gestion des contrôles qualité». Comme l essai de migration en contrôle seconde ligne ne peut être réalisé sur un échantillon précédemment analysé, le contrôle seconde ligne sera réalisé sur l extrait d un échantillon de la séquence dopé en aveugle. 12 Calcul et rapportage Rapporter les surfaces/hauteurs des pics des solutions étalons par rapport aux concentrations correspondantes en µg/l. La droite d étalonnage est du type y = ax + b, où : y = aire/hauteur du pic de l analyte dans la solution étalon a = pente b = intercept à l origine On peut déterminer la quantité d analyte X présente dans la solution de migration de l échantillon en µg/l selon la formule suivante : X= (Y-b)/a x 1.04 Le résultat final pour l échantillon est exprimé en µg/kg en tenant compte du facteur conventionnel de 6 et du vrai rapport surface/volume selon la formule : Concentration en µg/kg : X/1000 x V (ml)/s (dm²) x 6 Avec : - X = concentration de ll extrait de migration exprimé en µg/l - V = volume utilisé pour l essai de migration exprimé en ml - S = surface de l échantillon exprimée en dm² LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v /17

10 13 Référence aux procédures, instructions, documents, formulaires ou listes y afférents 13.1 Procédures 13.2 Formulaires LAB23 F543-PR38 Rapport d exécution «Dosage du 2,4TDA, de l aniline et du 4,4MDA par UPLC- MS/MS» 13.3 Instructions LAB23 I 302 LAB23 I 302 Matériaux contact -préparation échantillon 10/17 LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v

11 14.1 Annexes 1 Les paramètres de la méthode chromatographique et de la méthode de détection ci-dessous sont donnés à titre d exemple. 11/17 LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v

12 12/17 LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v

16 14.2 Annexes 2 Les chromatogrammes ci-dessous sont donnés à titre d exemple. La séparation chromatographique est réalisée sur une colonne HSS-T3 (HSS T3, 2,1 mm x 50 mm, 1,8 µ (Waters). La détection est réalisée en mode MRM au départ de l ion parent en suivant un ion de quantification et un ion de confirmation. 16/17 LAB 23 I-MET LFSAL120A Dosage du 2.4-TDA, de l aniline et de la 4,4 MDA v