Evolutions technologiques, coût, accessibilité et POCs Point of Care. Pr Christine ROUZIOUX Université Paris Descartes

Transcription

1 Evolutions technologiques, coût, accessibilité et POCs Point of Care Pr Christine ROUZIOUX Université Paris Descartes

2 ADN VIH : présent Provirus intégré dans le chromosome des lymphocytes CD4 infectés Charge virale cellulaire: Diagnostic chez l enfant par PCR en temps HIV-1 (HIV-2) ARN HIV: présent dans les particules virales libres dans le plasma sanguin Test de Charge Virale CV ou VL Technique de PCR en temps réel VL: Plasma or serum, sang total, DBS

3 Objectif du traitement : réduire la charge virale pour bloquer la destruction des CD4 et induire une restauration immunitaire Mesurer la CV peut participer au renforcement du SUCCES virologique de l observance Préserver un capital thérapeutique: faire durer le plus longtemps possible le succès pour éviter de devoir passer aux traitements de 2 ème ligne (chers et peu accessibles) Enjeu individuel: de bonne restauratrion immunitaire +. Enjeu collectif: économique, réduction de risque de transmission Algorithmes à définir : ex alternance avec CD4

4 La technique de biologie moléculaire la plus utilisée est la PCR en temps réel : 2 étapes: Extraction/purification de l acide nucléïque : ARN VIH Amplification du gène + Détection du produit amplifié in real time Comparaison à une gamme standard: résultat quantitatif en nombre de copies d ARN VIH/ml

5

6

7 Worldwide prevalence of HIV-1subtypes, CRFs and URFs HIV-1 group M : > 30 Millions infected subjects 9 non recombinants subtypes (20-30% divergence) A-BD-C-F-G-H-J-K 50 CRFs et >100s of Unique Recombinant Forms

8 Comparisons of HIV-1 RNA assays Results with the WHO reference panel NISBC 01/466 A B C D AE F AG-GH H N O Strain 92UG037 92TH014 98TZ017 94UG114 92TH001 93BR020 RU570 V1525 YBF30 MVP5180 Origin Uganda Thailand Tanzania Uganda Thailand Brazil Russia Gabon Cameroon Cameroon Monitor 3,38 3,15 3,43 3,5 3,63 3,67 3,76 4,11 3, Nuclisens 3,55 3,53 3,59 3,81 3,53 2,33-2, bdna 3,06 3,2 3,07 3,49 3,33 3,47 3,25 3,58 2, LCx 3,57 3,4 3,44 3,71 3,64 3,53 3,34 3,62 2,48 2,18 - Real-time PCR G ,44 3,45 4,08 3,72 3,72 3,4 4,46 4, Increase in HIV-1 diversity: new recombinants viruses > 50 CRF Importance of epidemiological molecular surveys in all countries

9 Equipements for NA extraction Combinations of Equipment and reagents provided by different suppliers, organized within Open Sub-networks : Reagents + Consumables Equipements for Amplification and Detection 16, 32, 96 samples Quiagen (Artus), Bieocentric 24, 48, 96 samples Training Maintenance Hot-line Quality control Training Maintenance Hot-line

10 Nombreuses innovations en développement: Automates d extraction: différents types : extraction seule, ou extraction et distribution des réactifs Réactifs: nouvelles chimies Machines de PCR en temps réel : nouvelles machines plus rapides, plus solides, logiciels plus faciles

11

12 From PROMEGA

13

14

15 Automated extraction: equipment open: Polyvalent for different types of samples : whole blood, blood plasma, urines, BAL, DBS.. Nucleic acid extraction: DNA and RNA Quantitatives Real time PCR : HIV1- RNA, HIV1-DNA : early infants diagnosis HIV2-RNA, HIV 2-DNA : early infant diagnosis TB, HBV, HCV, PCR mutations for resistant strains HSV, VZV, CMV, EBV Chlamydiae, Respiratory infections: Adenoviruses, RSV, Metapneumovirus, para-influenzae Influenzae A and B: H1N1

16 Est un exemple de «preuve de concept» de la faisabilité des systèmes ouverts dans les pays du Sud PCR en temps réel, ARN-HIV-1, ARN-HIV-2, HIV1+2 ADN; adapté à la diversité génétique Utilisable sur différents types de machines. Prix de réactifs 8.8 Euros (Biocentric), <5 E ADN VIH tests produits depuis 2005 Elle a été validée par de nombreuses publications: Pour l ARN-VIH-1: Dabis, Rouet, Danel, Leroy, Ekouevi, Camelia NEJM) Pour l ADN-VIH-1: Viard, Goujard, Hoen, Dalmasso (Plos One) Avettand-Fenoel (2009)

17

18 Initialement: tests au lit du malade, tests faisables par le médecin, très simples, qualitatifs et très rapides CV VIH: recherches faites pour un test moléculaire très simplifié et de faible technicité (zones rurales) Plusieurs tests sont en cours de développement et Aucun n est encore disponible, ni validé par un marquage CEE ou FDA. Pas de publications ni d études à grande échelle Présentations congrès: prototypes Disponibilité annoncée pour 2014, 2015 voire plus Coût???? Cible 15 dollars

19 Category Technology General Principle In early clinical validation LIAT (IQUUM) Multiplex real-time PCR NAT technology that could be adapted SAMBA (DRW) HDA (Biohelix) GeneXpert Cepheid BD Max (Handylab) Enigma (Enigma diagnostics) Twist Dx Early development EO-NAT HIV (wave 80) Isothermal amplification, Dipstick readout, plan for automation and visual read-out Helicase dependent amplification Multiple targets, real-time TB, MRSA Real-time microfluidic PCR Influenza Recombinase polymerase amplification (RPA) Semi-Bio North-western University p24 Eiken chemical Inverness, Abbott etc Department of Molecular Medicine and Haematology

20 Liat Tube 1. Collect sample 2. Scan barcode 3. Insert the tube Time to result: 1hour Get results 200ul plasma Assay chemistry: silica magnetic bead extraction & multiplex real-time PCR detection Internal control strategy: RNA process control to minimize likelihood of a false negative readout Liat Analyzer IQuum, Inc. 2010

21 Liat Assay VL (log10) y = x R 2 = Reference Assay VL(log10) 92% correlation with Abbott m2000 with 75 clinical specimens (clades A, B, C, and D) Training took 5 minutes Easy to use Assay takes 60 minutes Fiscus, unpublished data 2010 (IAS, Vienna)

22 Simple amplification-based assay (SAMBA) Cartridge prototype machine Lee H H et al. J Infect Dis. 2010;201:S65-S71

23 GeneXpert TB, Enterovirus, Papillomavirus HIV

24

25 CONCLUSIONS Nous sommes en pleine phase d évolution technologique Divers fabricants de machines ou de réactifs sont dans les starting blocks pour développer des test de CV Les systèmes ouverts sont intéressants à plusieurs titres: Ouverts aux innovations Ouverts à de multiples diagnostiques L arrivée de nouveaux fabricants est essentielle pour induire de la concurrence et faire baisser les prix qui représentent le plus gros obstacle à la charge virale. La baisse des coûts est un des moyens qui va permettre d ouvrir l accès à la charge virale pour les patients du SUD.