1 Culture Cellulaire Microplaques 2 HTS- 3 Immunologie/ HLA 4 Microbiologie/ Bactériologie Containers 5 Tubes/ 6 Pipetage

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2 8 Protein Crystallisation Informations Techniques 8 I 2 Applications en Technique par Diffusion 8 I 4 CrystalQuick TM Puits 8 I 4 CrystalDrop TM Couvercle 8 I 6 ComboPlate TM 24 Puits 8 I 7 CrystalBridge TM 8 I 7 Lamelles 8 l 7 Application en Technique Microbatch 8 I 8 Plaques Terasaki 60 Puits 8 I 8 Plaques Terasaki 72 Puits 8 I 8 Plaque IMP@CT TM Puits 8 I 9 Plaque IMP@CT TM 156 Puits 8 I 9 CrystalSlide TM 8 l 10 2 HTS

3 Cristallisation de Protéines Une méthode reconnue pour la détermination des structures protéiques est l analyse aux rayons X des cristaux. La détermination de la structure tridimensionnelle des protéines a contribué à des avancées majeures en recherche fondamentale, plus particulièrement en génomiques structurales et en pharmaceutique. La méthode la plus couramment utilisée pour la cristallisation des protéines est la diffusion de vapeur, laquelle intègre les méthodes de goutte assise et de goutte suspendue (Fig. 1a et Fig. 1b). Une goutte de solution protéine est mélangée avec une goutte de solution réactif, toutes deux incubées avec un volume important de solution réactif dans un puits scellé. Les gradients de concentration entre la goutte échantillon et la solution du réservoir s équilibrent par diffusion, ce qui induit le process de cristallisation si toutes les conditions sont réunies. Lamelle Graisse silicone VIEWseal TM Echantillon Huile Réactif Echantillon a) Goutte suspendue b) Goutte assise c) Microbatch Figure 1: Méthodes de cristallisation a) Goutte suspendue b) Goutte assise c) Microbatch La méthode microbatch (Fig. 1c), où la goutte échantillon est recouverte avec de l huile, est également très répandue. Dans cette technique, le choix de l huile détermine le taux de diffusion de l eau dans la goutte échantillon à travers l huile. De nombreux facteurs affectent la cristallisation des protéines. Comme les conditions optimales de cristallisation ne peuvent généralement être prédites, un grand nombre de tentatives est souvent nécessaire pour déterminer et optimiser les conditions appropriées. La cristallisation de protéines représente donc encore un frein majeur dans l analyse structurale. L utilisation des technologies à haut débit, tels les robots de pipetage et les microplaques standardisées, permet de tester un nombre important de conditions de cristallisation en un temps court et avec relativement peu de protéines. La gamme CrystalStar Greiner BioOne réunit les plaques de cristallisation et les accessoires destinés spécifiquement pour la cristallisation haut débit. Format Nous accordons une grande importance au fait que nos plaques pour cristallisation de protéines puissent être utilisées avec les systèmes automatisés. A l exception des plaques Terasaki, toutes les plaques de cristallisation présentent des dimensions externes et des tolérances conformes aux standards ANSI/SBS Pour plus d information visitez notre site: /technical_information 2 HTS 8 2

4 ! Etiquetage Code à Barres Un étiquetage code à barres à façon est disponible sur demande pour toutes les plaques de cristallisation, à l exception des plaques Terasaki. a) b) 2 HTS Matériau Toutes les plaques de cristallisation Greiner BioOne, à l exception des plaque, sont en polystyrène. Elles sont caractérisées par une haute transparence et d excellentes propriétés optiques. Hydrophobes Les microplaques ayant une surface hydrophobe sont particulièrement bien adaptées pour la cristallisation nanolitre des protéines membranaires. Les propriétés de la surface hydrophobe visent à neutraliser efficacement l étalement de gouttes contenant du détergent, et particulièrement les gouttes renfermant des précipités surfactants, tels que MPD (Fig. 2). De plus, le ménisque de la solution mère est considérablement réduit dans le réservoir, de sorte que les sources de contamination, lors de la diffusion de la solution mère vers le puits de cristallisation, sont évitées. Plaques Les plaques sont spécialement conçues pour l utilisation en lumière polarisée. Les plaques pour applications en goutte assise sont en polyoléfine, qui se caractérise par une très faible birefringence comparé aux plaques polystyrène (Fig. ). La haute transparence, la haute résistance chimique et la faible absorption de l eau sont des caractéristiques supplémentaires des plaques. Figure 2: Comparaison (a) CrystalQuick Plus (surface hydrophobique) avec (b) standard. Image de gouttes de 100 nl de noctylglucoside 50 mm aimablement fournies par Karl Harlos, The Wellcome Trust Center for Human Genetics, Oxford, UK. 1a) 2a) Figure : Plaques en lumière polarisée: (a) Version standard avec forte biréfringence, (b) version avec faible biréfringence. (1) PR, (2) PQ, () LP a) 1b) 2b) b) Couvercle CrystalDrop Couvercle CrystalDrop PQ (Puits carrés) PQ (Puits carrés) Plus PQ (Puits carrés) Plus PQ (Puits carrés) PR (Puits ronds) PR (Puits ronds) LP (Profile bas) LP (Profile bas) Plus LP (Profile bas) Plaque Terasaki Plaque Terasaki Plaque IMP@CT Plaque IMP@CT Plaque IMP@CT VIEWseal CrystalBridge Lamelles, 18 mm ø, épaisseur 2 (0,19 0,22 mm) Lamelles, 22 mm ø, épaisseur 2 (0,19 0,22 mm) Lamelles, 22 mm ø, épaisseur 5 (0,5 0,6 mm) Nombre de Puits Echantillons Diffusion Microbatch Accessoires Nombre de Réservoirs Propriété spéciale prégraissée prégraissée hydrophobe, hydrophobe hydrophobe µclear verre, siliconé verre, siliconé verre, siliconé Table 1: Vue d ensemble des plaques de cristallisation CrystalStar et accessoires. 8

5 Applications en Technique par Diffusion 2 HTS Applications en Technique par Diffusion Plaques Puits pour Applications en Goutte Assise En collaboration avec Génomics Institut de la fondation de recherche Novartis (GNF) à San Diego (USA), l institut Max Planck (MPI) et Protein Structure Factory (PSF) à Berlin, Greiner BioOne a développé une série de plaques de cristallisation puits pour les applications en goutte assise. Chacun des réservoirs présente une eforme surélevée avec un ou trois puits de cristallisation. Les plaques sont optimisées pour le scellage avec le film adhésif VIEWseal TM ( p. 12 l 4). En association avec le couvercle CrystalDrop TM, des expériences simultanées sont possibles entre les méthodes de goutte assise et goutte suspendue. Les dimensions extérieures et les tolérances des microplaques CrystalQuick TM sont compatibles avec les applications automatisées. Toutes les microplaques CrystalQuick TM sont disponibles en version pour l utilisation en lumière polarisée. Les microplaques avec une surface hydrophobe figurent dans le tableau sous la dénomination CrystalQuick TM Plus. CrystalQuick TM PQ (Puits carrés Fig. 1, Fig. 2) Avec trois puits de cristallisation par réservoir, les puits carrés PQ permettent de tester échantillons par plaque. Le fond des puits confère d excellentes propriétés optiques. Le volume maximum des gouttes de cristallisation est de 4 µl (US Patent No B2). Figure : Profil de puits, CrystalQuick TM PR Figure 4: Cristaux obtenus sur CrystalQuick TM PR. Photo aimablement fournie par B. Blattmann, NCCR Structural Biology, Suisse. CrystalQuick TM LP (Profile bas Fig. 5, Fig. 6) Les plaques de cristallisation LP sont caractérisées par d excellentes propriétés optiques. La récupération du cristal est facilitée grâce aux angles du puits de cristallisation. Le profil bas réduit le volume de stockage. Figure 1: Profil de puits, CrystalQuick TM PQ Figure 5: Profil de puits, CrystalQuick TM LP Figure 2: Cristallisation de lysozyme dans CrystalQuick TM PQ CrystalQuick TM PR (Puits ronds Fig., Fig. 4) Avec trois puits de cristallisation par réservoir, les puits ronds CrystalQuick TM PR permettent de tester échantillons par plaque. Le fond des puits de cristallisation est concave. Le volume maximum des gouttes de cristallisation est de 1,9 µl mm Figure 6: Cristallisation de lysozyme dans CrystalQuick TM LP, RoboDesign International Inc., Carlsbad (USA)! Nouveau: Toutes les plaques CrystalQuick TM disposent maintenant d un réperage alphanumérique des puits. 8 4

6 Applications en Technique par Diffusion CrystalQuick TM Puits CrystalQuick TM Plus Puits Couvercles et films p. 12 I 2 Couvercle CrystalDrop TM pour méthode en goutte suspendue p. 8 I 6 2 HTS Plaques de cristallisation pour applications en goutte assise avec différents profils de puits et différents matériaux Nouveau: Repérage alphanumérique des puits CrystalQuick TM standard standard standard Profil de puits Fond du puits Puits/Réservoir rond (PR) concave rond (PR) concave 1 1 Volume max. du puits [µl] Volume par réservoir [µl] Hauteur [mm] 4,1 4,1 1,9 1,9, ,0 (profile bas) 20/80, ,0 (profile bas) 20/80 CrystalQuick TM Plus Plus Plus Plus Profil de puits Fond du puits hydrophobe, hydrophobe hydrophobe Puits/Réservoir Volume max. du puits [µl] Volume par réservoir [µl] Hauteur [mm] 4,1 4,1 1, ,0 (low profile) 20/80 8 5

7 2 HTS Applications en Technique par Diffusion Couvercle CrystalDrop TM pour les Applications en Goutte Suspendue Couvercle CrystalDrop TM Couvercles et films supplémentaires p. 12 I 2 Plaques CrystalQuick TM p. 8 I 5 Couvercle pour plaques CrystalQuick TM Permet un scellage individuel des puits Couvercles prégraissés disponibles Le couvercle CrystalDrop a été développé en coopération avec Institut Max Planck (MPI) et Protein Strucutre Factory (PSF) de Berlin pour une utilisation spécifique en cristallisation haut débit. Les 192 puits de CrystalDrop permettent de placer les gouttes échantillon en positions prédéfinies. La grille sérigraphiée facilite la lecture automatisée des gouttes de cristallisation. Les canaux autour de chacune des positions permettent un scellage individuel pour chaque puits par l application de graisse silicone. L association CrystalDrop et permet de réaliser en parallèle jusqu à gouttes assises et 192 gouttes suspendues (soit un total de 480 gouttes de cristallisation par plaque). CrystalDrop est recommandé pour l application des gouttes de cristallisation et pour la manipulation des plaques par robots. CrystalDrop est aussi disponible en version prégraissée (Fig. 7). Figure 7: Couvercle CrystalDrop prégraissée Format Couvercle CrystalDrop pour plaques puits Couvercle CrystalDrop pour plaques prégraissé puits Puits/Réservoir 2 2 ø Puits [mm] Longueur [mm] x largeur [mm] x hauteur [mm] 2,7 127,5 x 84,8 x 6,0 2,7 127,5 x 84,8 x 6,0 5/80 5/40 8 6

8 ComboPlate TM 24 Puits, CrystalBridge TM et Lamelles Applications en Technique par Diffusion ComboPlate TM 24 Puits, CrystalBridge TM et Lamelles 2 HTS ComboPlate TM a été développée comme une eforme universelle de cristallisation au format 24 puits en collaboration avec Hampton Research (Fig. 8). Le polystyrène clair en association avec des fonds s exempts de distorsions, offre des qualités optiques excellentes. Un anneau surélevé ai sur chaque puits réduit le risque de contamination croisée et permet de sceller les puits avec de la graisse silicone et lamelles (ø 18 mm) ou bien avec le film VIEWseal (référence ). Un couvercle légèrement surélevé protège les lames et le film durant le transport et le stockage. Figure 8: Profil de puits, ComboPlate TM 24 puits Couvercles et films p. 12 I 2 Plaque de cristallisation universelle 24 puits! Figure 9: avec lamelles Couvercles prégraissés disponibles Lamelles siliconées disponibles La est également disponible en version prégraissée ou en version pour l utilisation en lumière polarisée. Greiner BioOne propose des lamelles siliconées (rondes, ø 18 mm) (Fig. 9) comme accessoires à la et aussi pour plaques Linbro (rondes, ø 22 mm). CrystalBridge Les expériences en goutte assise sont possibles en utilisant les inserts CrystalBridge, lesquels s ajustent parfaitement au sein des puits. Le puits à fond concave intégré dans CrystalBridge possède un volume de 45 µl. Si nécessaire, les inserts CrystalBridge peuvent être transférés dans un autre puits durant l expérience CrystalBridge Format Fond du puits 24 puits prégraissé 24 puits 24 puits 1 puits concave ø Puits [mm] 16, 16, 16, 4,6 Volume max. du puits [µl] Couvercle /24 6/24 6/ lamelles rondes verre siliconé lamelles rondes verre siliconé lamelles rondes verre siliconé ø [mm] Épaisseur [mm] ,19 0,22 0,19 0,22 0,5 0,6 100/ / /1000 Nouveau 8 7

9 2 HTS Application en Technique Microbatch Application en Technique Microbatch Plaques Terasaki 60 Puits et 72 Puits Plaques Terasaki 60 Puits et 72 Puits Surface traitée des Plaques Terasaki p. I 11 Plaques Terasaki 60 Puits et 72 Puits Les plaques Terasaki sont très utilisées pour la cristallisation en microbatch. La goutte de cristallisation est localisée au centre du fait de la géométrie conique du puits, et le fond du puits permet un suivi optimal (Fig. 10). Le bord des plaques Terasaki permet de remplir tous les puits avec l huile en simultané. Du fait des petites dimensions externes et du profil bas des plaques Terasaki, l espace requis pour le stockage est relativement réduit. Les plaques Terasaki sont livrées avec un couvercle approprié. Les plaques sont aussi disponibles avec un traitement de surface ( p. I11). Le traitement des microplaques influence l étalement de la goutte au fond du puits. Figure 10: Profil de puits, plaque Terasaki Plaque Terasaki Plaque Terasaki Format Profil du puits Fond du puits 60 puits conique 72 puits conique ø Fond du puits [mm] Volume max du puits [µl] Longueur [mm] x largeur [mm] x hauteur [mm] 1, 11,5 8, x 58 x 10 1, 11,5 8, x 58 x 10 Traitement de surface 10/580 10/

10 Plaque Puits et 156 Puits Plaques Les plaques concernent la cristallisation haut débit, spécialement conçues pour les applications microbatch sous huile. Les plaques se caractérisent par des puits coniques avec un fond. La forme conique des puits a pour effet de centrer les gouttes de cristallisation, même quand les volumes d échantillon sont faibles. Le fond du puits permet un suivi optimal des échantillons de cristallisation. Un couvercle approprié est disponible. Plaques IMP@CT Puits (Fig. 11) La plaque IMP@CT puits a été développée par Greiner BioOne en coopération avec Hampton Research (USA) et Allan D Arcy. Le double rebord des plaques signifie que les puits peuvent être remplis séparément ou simultanément avec l huile. Le remplissage du double rebord des plaques IMP@CT avec un gel aqueux permet de contrôler l évaporation de l eau des gouttes de cristallisation. La microplaque IMP@CT puits est également disponible en version noire µclear. Cette microplaque est caractérisée par une diffusion de lumière réduite inter puits et par une faible biréfringence. a) b) Application en Technique Microbatch Plaque IMP@CT 156 Puits, (Fig. 12) La plaque IMP@CT 156 puits a été développée en coopération avec l Institut de Recherche HauptmanWoodward Medical de Buffalo (USA) pour une utilisation en système automatique à haut débit. La géométrie optimisée du puits permet aux gouttes de cristallisation avec un volume très faible d être localisées au centre des puits. Les fonds s, lisses des puits engendrent des conditions optimales pour le suivi et l évaluation des échantillons de cristallisation. La plaque IMP@CT 156 puits est utilisée en lumière polarisée. a) b) Figure 12a: Profil de puits, plaque IMP@CT 156 puits Figure 12b: Cristallisation de lysozyme dans la plaque IMP@CT 156 puits, avec l approbation de l Institut HauptmanWoodward de Buffalo (USA) 2 HTS Figure 11a: Profil de puits, plaque IMP@CT, puits Figure 11b: Cristaux de proteine dans une plaque IMP@CT puits 67 0 Plaque IMP@CT Puits et 156 Puits Couvercles et films p. 12 I 2 Plaques pour cristallisation sous huile Format IMP@CT transparent puits IMP@CT noir, fond µclear puits IMP@CT transparent, 156 puits Volume max. du puits [µl] ø Fond du puits [mm] Hauteur [mm] 8,0 1, 8,0 1, 10,1 0,9 10,4 15/60 8 9

11 2 HTS CrystalSlide TM CrystalSlide TM Plateforme multicanaux pour contrediffusion Greiner BioOne a développé, en collaboration avec le laboratoire de Peter Kuhn, du Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA, une nouvelle eforme pour la technique de contrediffusion dans un format de lame microscope standard. Cette eforme présente 12 canaux (0,1 mm x 0,1 mm x 20 mm) pour expérimentations de contrediffusion. a) Le remplissage des réservoirs est optimisé pour l utilisation des pointes cristal Greiner BioOne ( p. 6 l 5). La manipulation automatisée est facilitée par l insertion de 4 lames dans un portoir aux dimensions standard d une microplaque. De par sa conception et ses propriétés matière, CrystalSlide est parfaitement adaptée pour l analyse in situ sous rayons X, lumière polarisée ou UV (Fig. 1). b) c) Figure 1: Image d un cristal de protéine sur CrystalSlide. Champ lumineux (a), polarisé (b) et fluorescence UV (c). Images aimablement fournies par Peter Kuhn, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA. Figure 14: Schéma de CrystalSlide CrystalSlide TM Nouveau Pointes Cristal p. 6 l 5 Manuel d utilisation CrystalSlide TM (réf. F07 05) Plateforme multicanaux pour contrediffusion Portoir disponible sur demande Dimensions de lame (L x L) [mm] Dimensions du canal (L x L x H) [mm] Nombre de canaux par lame Volume du canal [µl] Qté par boîte/carton CrystalSlide TM, UVtransmissible, Xray transmissible 75 x x 0,1 x 0, /