Structure de l Opéron Tryptophane

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1 Régulation de la transcription (procaryote) Structure de l Opéron Tryptophane Opéron anabolique 5 gènes de structure nécessaires à la synthèse du tryptophane Trp Trp Trp Trp Trp 1

2 Régulation de la transcription (procaryote) Opéron Tryptophane 2

3 Régulation de la transcription (procaryote) Opéron Tryptophane Absence de Trp Présence de Trp Le complexe Trp répresseur se fixe à l opérateur. 3

4 Régulation de la transcription (procaryote) Structure 3D du répresseur Trp Le Trp est un co répresseur. 4

5 Régulation de la transcription (procaryote) Structure 3D du répresseur Trp 5

6 Régulation de la transcription (procaryote) 2 nd mécanisme de régulation de l opéron Trp : l atténuation réponds à la concentration d ARNt Trp 6

7 Régulation de la transcription (procaryote) 2 nd mécanisme de régulation de l opéron Trp : l atténuation Transcription et traduction simultanées Si [ARNt Trp ] élevée Formation d une Tige boucle qui décroche l ARN polymérase Si [ARNt Trp ] faible Formation d un Tige boucle alternative qui ne perturbe pas la transcription 7

8 Régulation de la transcription (procaryote) 2 nd mécanisme de régulation de l opéron Trp : l atténuation Taux Trp élevé : Terminaison de la transcription Taux Trp faible : La transcription continue. 8

9 Régulation de la transcription (procaryote) 9

10 Régulation de la transcription (procaryote) 10

11 Régulation de la transcription (procaryote) Opéron lactose et Opéron Trp régulation négative Opéron Lac Opéron Trp 11

12 Régulation de la transcription (eucaryote) La régulation de l expression génique chez les eucaryotes Rappel structure des gènes Les gènes de classes II promoteur distal promoteur proximal promoteur minimal / Enhancers et silencers séquences activatrices en amont TATA box Inr liaison des facteurs régulateurs liaison des facteurs généraux et de l ARN pol II REGULATION DE LA TRANSCRIPTION FORMATION DU COMPLEXE INITIATEUR 12

13 Régulation de la transcription (eucaryote) La régulation de l expression génique chez les eucaryotes 13

14 Régulation de la transcription (eucaryote) Mécanismes d action des activateurs Courbure de l ADN 14

15 Régulation de la transcription (eucaryote) Régulation combinatoire De nombreux facteurs de transcription plusieurs possibilités d interactions pour une régulation combinatoire 15

16 Régulation de la transcription (eucaryote) Activation des facteurs de transcription 16

17 Régulation de la transcription La régulation de l expression génique peut intervenir à toutes les étapes du processus d expression. 17

18 Régulation de la transcription (eucaryote) 18

19 Régulation de la transcription (eucaryote) L épissage alternatif Différents ARNm à partir d un pré ARNm (plusieurs combinaisons d exons) épissage alternatif du pré-messager de -tropomyosine dans différents types cellulaires 19

20 Les techniques pour mesurer la quantité d ARNm dans les cellules Techniques d hybridation : Northern Blot Techniques utilisant la PCR : RT PCR 20

21 Détection de l ARN Techniques d hybridation Northern blot Principe 1 Séparation des fragments d ARN selon leur taille 2 Transfert sur une membrane (nitrocellulose) 3 Hybridation des sondes marquées et détection 21

22 Techniques d hybridation Northern Blot 22

23 Comment marquer l ADN de façon radioactive? (préparation de sondes) Marquage interne Préparation des sondes Marquage terminal Random priming 23

24 Détection de l ARN / Techniques Marquage des sondes nucléotides radio marqués 32 P digoxigénine (DIG), composés fluorescents 32 P 32 P Marquage froid Marquage radioactif 24

25 Détection de l ARN / Techniques Northern blot analysis of EGFR, EGF and TGF- in the normal pancreas and pancreatic cancer. Pancreatic RNA was extracted using the guanidine isothiocyanate method. The membrane was probed with the 32 P labeled EGFR, EGF or TGF cdna and, as a loading control, the 7S cdna. Nature Protocols 4, (2008) Published online: 11 December

26 Détection de l ARN / Techniques Technique de PCR (Polymerase Chain Reaction) Amplification en chaîne Succession de réplication cycles Etape 1: Dénaturation: 1mn 94 C Etape 2: Hybridation: 30sec, 60 C Oligos sens et anti sens!! Etape 3: Elongation dntp, ADN Pol 26

27 Détection de l ARN / Techniques Technique de PCR (Polymerase Chain Reaction) Amplification exponentielle 2 36 = 6, copies 27

28 Détection de l ARN / Techniques Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) 28

29 Détection de l ARN / Techniques Au cours des cycles, le nombre de fragments de taille définie par la position des amorces augmente de manière exponentielle. 29

30 Détection de l ARN / Techniques Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) Utilisation d ADN polymérases thermorésistantes : exemple: Taq polymérase (Thermus aquaticus) 30

31 Détection de l ARN / Techniques Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) Gel d agarose 31

32 RT PCR (Reverse Transcription PCR) Technique pour détecter l expression d ARN. Synthèse du brin complémentaire à l ARN par la Transcriptase Reverse > cdna 32

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