Travail à faire : Introduction. But. Mode opératoire. Dilutions. Ensemencement. Résultats obtenus. Interprétation et discussion. Conclusion.

Transcription

1 Travail à faire : Intrductin. But. Mde pératire. Dilutins. Ensemencement. Résultats btenus. Interprétatin et discussin. Cnclusin. 1

2 Intrductin : Les analyses micrbilgiques ne snt pas un indicateur fiable à 100 % de la qualité sanitaire des denrées prduites destinées à la cmmercialisatin, la cnservatin u la cnsmmatin mais elles snt utiles. Elles nus renseignent sur le type des micr-rganismes que renferme le prduit à analyser car la principale cause de dégradatin de ces denrées est les micr-rganismes pathgènes. But : Le but du TP cnsiste à faire une analyse micrbilgique du lait par : Dénmbrement des germes aérbies mésphiles ttaux sur milieu PCA. Et du L ben : Dénmbrement des clifrmes ttaux sur milieu VBL+clche de Durham. Dénmbrement des levures et misissures sur milieu OGA. Mde pératire : Les dilutins : Les dilutins cnsistent à atteindre la cncentratin la plus faible pur effectuer une bnne analyse micrbilgique du lait et du L ben. Pur l btentin de la dilutin 10-1 : On prélève 1ml du prduit à analyser à l aide d une pipette graduée stérile qu n va ajuter à 9ml d eau physilgique puis hmgénéiser bien le cntenu ; à partir de ce tube et avec la même pipette n prélève 1ml du prduit et n le met dans la bite de pétri PCA (Lait). Pur l btentin de la dilutin 10-2 : On prélève 1ml du tube de la dilutin précédente (10-1 ) à l aide de la même pipette qu n va ajuter à un tube cntenant 9ml d eau physilgique ; n jette la pipette. A l aide d une nuvelle pipette graduée stérile, n prélève 1ml du prduit de ce tube et n le met dans la bite de PCA (Lait) ; 1ml dans chacun des tris tubes VBL+clche de DURHAM et 0,1ml dans la bite OGA (L ben). A partir de la dilutin 10-2 et de la même façn, n prépare les autres dilutins jusqu à 10-6 pur le milieu PCA et 10-5 pur le milieu OGA et les tubes VBL+clche de DURHAM. Remarque : Les manipulatins divent être faites dans la zne stérile. 2

3 Les dilutins divent être faites en milieu aseptique. Hmgénéiser bien les tubes entre chaque dilutin. Changer les pipettes après chaque dilutin. L ensemencement : a) Dénmbrement en prfndeur : Milieu PCA. A l aide d une pipette graduée stérile n prélève 1ml du lait qu n va ensemencer dans une bite de pétri sur laquelle n va : éculer le milieu PCA fndu et refridi à C ; hmgénéiser légèrement ; Laisser se slidifier ; Ajuter une deuxième cuche fine de même milieu ; Laisser se slidifier à nuveau; ensuite returner les bites de Pétri ; Incuber à l étuve réglée à 37 C pendant 24 heures ; b) Dénmbrement en surface : Milieu OGA. Le milieu de culture étant déjà culé et refridi dans les bites de pétri. A l aide d une pipette graduée stérile n prélève 0,1ml du L ben qu n va ensemencer en surface de ce milieu. A l aide d un râteau en verre, n va étaler le prduit sur la tute la surface de la bite. Returner les bites de pétri. Incuber à l étuve réglée à C pendant 36 à 72 heures. 3

4 Résultats btenus : Sur milieu slide : (PCA, OGA). En tenant cmpte que les bites de pétri cmprtant entre 30 et 300 clnies. Cmpter le nmbre de clnies (n) dans la bite de pétri chisie qu n va multiplier par le taux de dilutin et n va btenir le nmbre de germes /ml du prduit à analyser. Dénmbrement des germes ttaux sur le milieu PCA (Lait) : Nmbre de germe /ml = n taux de dilutin. Nmbre de clnies = 111 Taux de dilutin = 10-3 nmbre de germes ttaux = UFC /ml Dénmbrement des levures et misissures sur milieu OGA (L ben) : Nmbre de germe /ml = n taux de dilutin 10. Nmbre de clnies..= 25 Dilutin..= 10-4 nmbre de levures et misissures est de = UFC/ml Sur milieu liquide :(milieu VBL+clche de DURHAM). Utiliser la table de Mac-grady. Si la clche cntient au mins 10% de sn vlume en gaz prduit par fermentatin du lactse, le tube est cnsidéré psitif. Cmpter le nmbre de tubes psitif dans chaque série de tris tubes et déterminer le nmbre caractéristique à tris chiffres qui, reprté dans la table de Mac-Grady pur btenir le nmbre le plus prbable de bactéries (germes par ml). Dénmbrement des clifrmes sur le milieu VBL : Dilutin Résultats (tube psitif)

5 Cmme tus les tubes snt psitifs dnc n va lire les deux dernières dilutins et cnsidérer la dilutin suivante négative c'est-à-dire 10-6 et le chiffre btenu est 330 dnc d après la table de Mac-Grady le nmbre crrespnd à 25 germes dans la dilutin dnc au mins germes/ml du L ben. Interprétatin : D après les résultats btenus, n cnstate que le nmbre de germes ttaux, les levures et misissures, ainsi que les clifrmes dépasse largement les nrmes ceci peut être s expliqué par des cntaminatins accrue que le lait a subi durant : La traite : équipements de traite cntaminés et mal lavés. Le transprt et le stckage à la ferme u à l usine. La transfrmatin du lait en L ben. Elles peuvent être due à : La litière et aliments. Mamelles mal lavées. Etat de santé de l animal. La manipulatin hrs de la zne stérile Cnclusin : A partir des résultats btenues, n peut cnclure que le lait est cntaminé par les germes ttaux et L ben par les levures et misissures ainsi que par Escherichia cli qui indique une cntaminatin fécale, dnc ces prduits laitiers snt indésirables à la cnsmmatin. 5