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1 Dr Annick DATRY Service de Parasitologie et Mycologie Hôpital Pitié Salpêtrière 47 bd de l Hôpital Paris Tél : annick.datry@psl.aphp.fr Paris, le 15 avril 2013 Cher confrère, Concerne : Résultats des confrontations de Biologie Médicale: Série1 Mycologie 2013 Nombre de réponses reçues : 239 sur 248 participants 1) Echantillon 1 (bouchon bleu) Il s agit d un jeune homme de 20 ans, adepte des piscines, qui présente une lésion du gros orteil du pied droit Résultats Trichophyton rubrum Techniques d identification Le prélèvement a été ensemencé sur milieu de Sabouraud-chloramphénicol-actidione. Examen macroscopique +++ Examen microscopique : prélever un fragment de la colonie que l on dilacère dans 2 gouttes de lactophénol ou bleu-lactophénol, ou utiliser la technique du scotch. On recherche au microscope les éléments caractéristiques des dermatophytes : filaments, microconidies, macroconidies et ornementations particulières Caractéristiques morphologiques : - Voir annexe Thérapeutique recommandée Terbinafine cp (1 cp / j X 6 mois au moins) et traitement local (vernis amorolfine, 1 application / semaine) Commentaires concernant les réponses - Réponses exactes : Trichophyton rubrum, 195 fois - Réponses inexactes ou incomplètes : - Trichophyton mentagrophytes, 10 fois - Trichophyton mentagrophytes vté interdigitale, 9 fois - Acremonium sp, 2 fois - Absidia sp, 1 fois - Dermatophyte, 1 fois - Microsporum audouinii ou variété langeronii, 1 fois - Onychocola canadiensis, 1 fois - Trichophyton mentagrophyte varieté nodulare, 1 fois - Trichophyton rubrum vté africaine, 1 fois - Trichophyton schoenleinii, 1 fois - Trichophyton soudanense, 1 fois - Trichophyton sp, 1 fois - Trichophyton violaceum et vté glabrum, 1 fois - Pas de réponse, 7 fois - Absence de culture ou d'éléments mycéliens, 6 fois - Réponse non retournée, 9 fois

2 2) Echantillon 2 (bouchon vert) Il s agit d une patiente africaine âgée de 30 ans qui présente des lésions au niveau des ongles des pieds Résultats Trichoderma spp Techniques de laboratoire utilisées Ensemencement sur milieu de Sabouraud - chloramphénicol sans actidione Même technique d identification que pour l échantillon Caractéristiques morphologiques - Voir annexe Thérapeutique recommandée Le traitement médical est très difficile Commentaires concernant les réponses - Réponses exactes : - Trichoderma spp, 159 fois - Réponses inexactes ou incomplètes : - Chrysosporium sp, 12 fois - Scedosporium sp, 11 fois - Trichophyton sp, 9 fois - Aspergillus sp, 5 fois - Mucor sp, 4 fois - Scopulariopsis sp, 4 fois - Candida sp, 3 fois - Fusarium sp, 3 fois - Alternaria sp, 2 fois - Cladosporium sp, 2 fois - Trichosporon sp, 2 fois - Acremonium sp, 1 fois - Beauveria sp Bassiana, 1 fois - Botrytis, 1 fois - Epidermophyton floccosum, 1 fois - Geotrichum candidum, 1 fois - Microsporum audouinii ou vté langeronii, 1 fois - Onychola Canadensis, 1 fois - Paecilomyces sp, 1 fois - Penicillium sp, 1 fois - Rhizopus sp, 1 fois - Rhyzomucor, 1 fois - Scedosporium apiospermium, 1 fois - Pas de réponse, 6 fois - Non identifié, 2 fois - Absence de culture ou d'éléments mycéliens, 2 fois - Absence de subculture, 1 fois - Réponse non retournée, 9 fois

3 3) Echantillon 3 (à Ensemencer) Ecouvillon du conduit auditif externe chez un patient ayant consulté pour prurit à ce niveau Résultats Candida rugosa Techniques de laboratoire utilisées Ensemencer sur milieu de Sabouraud-chloramphénicol et Sabouraud-chloramphénicol-actidione ou ensemencement direct sur milieu chromogène (Chromagar) Caractéristiques morphologiques - Voir annexe Thérapeutique recommandée Il est recommandé de traiter par fluconazole (antifongigramme souhaitable) Commentaires concernant les réponses - Réponses exactes : Candida rugosa, 140 fois - Réponses inexactes ou incomplètes : - Candida albicans, 22 fois - Trichosporon sp, 19 fois - Candida catenulata, 16 fois - Candida krusei, 13 fois - Candida sp, 6 fois - Candida parapsilosis, 5 fois - Candida ciferri, 2 fois - Candida lipolytica, 2 fois - Candida non albicans, 2 fois - Malassezia sp, 2 fois - Candida tropicalis, 1 fois - Candida zeylanoïdes, 1 fois - Cryptococcus neoformans, 1 fois - Geotrichum candidum, 1 fois - Trichoderma, 1 fois - Pas de réponse, 2 fois - Levure non identifiée, 1 fois - Absence de culture ou d'éléments mycéliens, 1 fois - Non effectué au laboratoire, 1 fois - Réponse non retournée, 9 fois

4 ANNEXE 1 Trichophyton rubrum Champignon cosmopolite, c est l espèce la plus fréquente en France. Elle représente 70% de tous les dermatophytes isolés. Strictement anthropophile, elle se transmet par l intermédiaire des lieux publics humides où l on marche pieds nus (piscines, douches collectives, saunas ). Elle est responsable de lésions de la peau glabre et d onyxis. Elle ne donne pas d atteinte des cheveux. Diagnostic mycologique Examen macroscopique Sa croissance est rapide et dès le 5 ème jour apparaît une petite colonie glabre, blanc crème, sur laquelle sont observés des filaments collés et dressés (mèches). Puis la colonie se couvre de filaments et devient duveteuse avec un dôme central. Le recto est blanc. Au revers, apparaît un pigment rouge foncé qui colore la colonie en rouge-brun à violet. Ce pigment transparaît souvent sur le recto en formant un anneau rouge-brun ciculaire autour du dôme central réalisant une image en cocarde. La production du pigment est très variable selon les souches. Examen microscopique Pour les souches autochtones, l aspect est en général très pauvre : - filaments fins en raquettes avec parfois quelques excroissances triangulaires - microconidies plus ou moins nombreuses, piriformes et disposées en acladium - macroconidies absentes - pas d ornementations particulières. En l absence de pigment et de fructification, le diagnostic différentiel se pose avec T. mentagrophytes var. interdigitale. ANNEXE 2 Trichoderma spp Ce champignon cosmopolite, est un saprophyte fréquent du sol. IL est ainsi souvent isolé comme contaminant des cultures. Son rôle pathogène est minime. Examen macroscopique Sa croissance est rapide et exubérante : il déborde sur les parois du tube de culture. La colonie est laineuse à floconneuse devenant rapidement jaune à vert vif. Examen microscopique On observe : - des conidiophores simples ou ramifiés en verticille - des phialides en forme de bouteilles courtes, isolées ou en verticille par groupe de 3 - conidies globuleuses, lisses ou verruqueuses,hyalines ou vertes, produites en amas ou «fausses têtes» au sommet des phialides. La sporulation est souvent si abondante que ne l on voit plus les phialides (repiquer la souche et examiner la culture dès le 2 nd jour).

5 ANNEXE 3 Candida rugosa Cette levure se trouve dans les produits d origine laitière et dans l eau. Cette espèce est souvent isolée chez l homme sans qu elle paraisse vraiment pathogène. Diagnostic mycologique Examen macroscopique Les colonies sont sèches à grisâtres, d apparence terne, mate, souvent plissée.. Examen microscopique Les levures sont ovoïdes à allongées, parfois incurvées, mesurant (2-4 X 7-15 µm). Diagnostic de genre Sur PCB ou RAT, il existe une pseudomycelium court avec peu de blastospores. Diagnostic d espèce Fermentation des sucres absente. Assimilation des sucres : galactose positive ; saccharose, maltose, raffinose. lactose négative Réduction du tétrazolium positive. Nitrate de potassium négatif Sensible à l actidione Sur milieu Chromagar les colonies sont vertes et le diagnostic d espèce peut être réalisé par spectrométrie de masse.

6 ANNEXE 4 : Illustrations en images Echantillon 1 (bouchon bleu) Trichophyton rubrum Lésion au niveau de l ongle Culture sur milieu de Sabouraud

7 Examen microscopique de la culture

8 Echantillon 2 (bouchon vert) Trichoderma spp. 1- Culture sur milieu de Sabouraud 2- Examen microscopique de la culture

9 Echantillon 3 (à Ensemencer) Candida rugosa 1- Culture sur milieu Chromagar 2- Examen direct de la culture

10 ANNEXE 5 : Diagrammes Echantillon 1 (bouchon bleu) Trichophyton rubrum MYCOSES Nbre de réponse % Identification des 239 sur 248 mycoses Trichophyton rubrum ,59 Trichophyton mentagrophytes 10 4,18 Trichophyton mentagrophytes variété interdigitale 9 3,77 Acremonium sp. 2 0,84 Absidia sp. 1 0,42 Dermatophyte 1 0,42 Microsporum audouinii ou variété langeronii 1 0,42 Onychocola canadiensis 1 0,42 Trichophyton mentagrophyte varieté nodulare 1 0,42 Trichophyton rubrum variété africaine 1 0,42 Trichophyton schoenleinii 1 0,42 Trichophyton soudanense 1 0,42 Trichophyton sp 1 0,42 Trichophyton violaceum et variété glabrum 1 0,42 Pas de réponse 7 2,93 Absence de culture ou d'éléments mycéliens 6 2,51 Total ,00

11 Echantillon 2 (bouchon vert) Trichoderma sp MYCOSES Nbre de réponse % Identification 239 sur 248 des mycoses Trichoderma sp ,53 Chrysosporium sp 12 5,02 Scedosporium sp 11 4,60 Trichophyton sp 9 3,77 Aspergillus sp 5 2,09 Mucor sp 4 1,67 Scopulariopsis sp 4 1,67 Candida sp 3 1,26 Fusarium sp 3 1,26 Alternaria sp 2 0,84 Cladosporium sp 2 0,84 Trichosporon sp 2 0,84 Acremonium sp 1 0,42 Beauveria sp Bassiana 1 0,42 Botrytis 1 0,42 Epidermophyton floccosum 1 0,42 Geotrichum candidum 1 0,42 Microsporum audouinii ou variété langeronii 1 0,42 Onychola canadensis 1 0,42 Paecilomyces sp 1 0,42 Penicillium sp 1 0,42 Rhizopus sp 1 0,42 Rhyzomucor 1 0,42 Scedosporium apiospermium 1 0,42 Pas de réponse 6 2,51 Non identifié 2 0,84 Absence de culture ou d'éléments mycéliens 2 0,84 Absence de subculture 1 0,42 Total ,00

12 Echantillon 3 (à Ensemencer) Candida rugosa Nbre de réponse % Identification MYCOSES 239 sur 248 des mycoses Candida rugosa ,58 Candida albicans 22 9,21 Trichosporon sp 19 7,95 Candida catenulata 16 6,69 Candida krusei 13 5,44 Candida sp 6 2,51 Candida parapsilosis 5 2,09 Candida ciferri 2 0,84 Candida lipolytica 2 0,84 Candida non albicans 2 0,84 Malassezia sp 2 0,84 Candida tropicalis 1 0,42 Candida zeylanoïdes 1 0,42 Cryptococcus neoformans 1 0,42 Geotrichum candidum 1 0,42 Trichoderma 1 0,42 Pas de réponse 2 0,84 Levure non identifiée 1 0,42 Absence de culture ou d'éléments mycéliens 1 0,42 Non effectué au laboratoire 1 0,42 Total ,00