SÉRODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS
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- Émilien Plamondon
- il y a 7 ans
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1 Fiche sujet - candidat La syphilis, maladie hautement contagieuse, est essentiellement transmise au cours des rapports sexuels et par voie transplacentaire. Il s'agit d'une maladie bactérienne causée par le Tréponème pâle. Un test utilisant des antigènes de la syphilis (V.D.R.L.) permet d établir un diagnostic à partir du sérum d un individu. On cherche à déterminer si un individu est séropositif pour la syphilis. Matériel : - un microscope, 3 lames à concavité en verre, 3 lamelles, 3 cure-dents, des gants - un flacon de VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) avec des antigènes de la syphilis (fixés sur des particules de latex) - sérum S d un individu à tester - sérum S d un individu non atteint - sérum S2 d un individu atteint - 4 micropipettes, 4 pipettes pasteur ou équivalent, une cuvette avec eau de Javel (attention, produit ménager toxique), chronomètre, marqueur. Activités et déroulement des activités. Justifier l utilisation des trois sérums (S, S et S2) dans le protocole proposé. 2. Réaliser les manipulations en respectant le protocole fourni. 3. Observer les préparations au microscope et identifier le ou les résultats positifs. Appeler l examinateur pour vérification et fourniture éventuelle d un document de secours. 4. Représenter par un schéma les associations moléculaires obtenues dans les trois tests réalisés. Utiliser pour cela les symboles proposés dans la fiche document-candidat. 5. Déduire de la lecture des résultats si l individu est séropositif pour la syphilis. 6. Remettre le microscope dans l état prêt à l emploi et ranger le poste de travail. Capacités et principaux critères d évaluation Comprendre la manipulation Réaliser une manipulation d après un protocole Respect des étapes du protocole Utilisation maîtrisée du matériel Organisation de la paillasse Utiliser le microscope Traduire une observation par un schéma Appliquer une démarche explicative Gérer et organiser le poste de travail, respecter les consignes de sécurité Barème
2 Fiche technique - candidat PROTOCOLE - Organiser votre plan de travail pour manipuler proprement et en respectant les consignes de sécurité. 2- Repérer les lames avec le marqueur. 3- Déposer à l aide d une micropipette, d une pipette pasteur ou équivalent une goutte (environ 20µL) de sérum S dans la concavité d une lame en verre. 4- Renouveler l étape 3 pour les sérums S2 et S. Un sérum par concavité. Veiller à placer les instruments utilisés dans l eau de Javel. 5- Agiter le réactif VDRL et déposer goutte (environ 20µL) de VDRL latex dans chacune des concavités contenant les sérums. 6- A l aide des 3 cure-dents, mélanger les sérums et VDRL latex de chaque concavité pendant 3 min, par mouvements de rotation. 7- Ajouter une lamelle sur chaque concavité. 8- Après les observations, placer le matériel utilisé dans l eau de Javel.
3 Fiche document - candidat. Principe de la méthode Parmi les antigènes tréponémiques (Ag) qui déclenchent la formation d'anticorps spécifiques, se trouvent des phospholipides. Le VDRL Latex utilisé ici est constitué de particules de latex sur lesquelles sont fixés les phospholipides tréponémiques (fig. cidessous). Ce test permet d'effectuer rapidement sur une lame de verre à concavité le diagnostic de la syphilis à partir d'un sérum. En effet, la présence de nombreux anticorps dans la solution test entraîne la formation d un complexe immun visible au microscope. Schématisations fournies pour réponse à la question 4
4 Fiche réponse - candidat ETABLISSEMENT : Classe : NOM : Prénom : A rendre à l issue de l épreuve - Utiliser le verso si nécessaire
5 Fiche barème d évaluation Nom des candidats Capacités et critères d évaluation (en gras, pendant la séance) Barème. Comprendre la manipulation - Les sérums S et S2 sont les témoins. La comparaison de leur réaction avec celle du sérum S permettra de faire un diagnostic Réaliser une manipulation d après un protocole - respect des différentes étapes du protocole - utilisation maîtrisée du matériel (y compris gants et blouse) - propreté des préparations obtenues 3. Utiliser le microscope - réalisation des réglages (objectifs, éclairage, diaphragme, condenseur, mise au point ) - identification des résultats 4. Traduire des informations par un schéma - respect des modèles proposés - mécanisme d'agglutination clairement représenté et seulement dans le ou les tests positifs (au moins 2 boules de latex dans le cas où c est positif) - titre ou légende significatifs du mécanisme. 5. Adopter une démarche explicative : - cohérence de la déduction avec les résultats observés 3 6. Gestion et organisation de la paillasse (rangement final inclus), respect des consignes de sécurité. Note /
6 Fiche laboratoire et évaluateur Matériel : - un microscope avec objectifs X4, X0, X40, 3 lames à concavité en verre, 3 lamelles, 3 cure-dents, des gants - un flacon de VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) avec des antigènes de la syphilis (fixés sur des particules de latex) - sérum S d un individu à tester - sérum S d un individu non atteint - sérum S2 d un individu atteint - 4 micropipettes, 4 pipettes pasteur ou équivalent, une cuvette avec eau de Javel, chronomètre, marqueur. PREPARATION A prévoir : - Dès réception des sujets, commander, en prévoyant un délai de réception, un kit «Sérodiagnostic de la Syphilis» (protocole fourni dans le kit). Conservation au froid. - Sérum physiologique à 9 suivant le KIT. - Prévoir dans la salle un "poste central" pour le flacon VDRL et les sérums de réserve. Préparer les sérums : sérum de lapin immunisé étiqueté S2, un sérum de lapin non immunisé étiqueté S(ou sérum fictif Na + Cl - 9 g.l - ) et le sérum à tester étiqueté S. Varier les rotations en choisissant soit le sérum de lapin immunisé soit le sérum de lapin non immunisé (ou sérum fictif) Adapter éventuellement le protocole en fonction du kit utilisé. NB : on pourra installer dans la salle un ou des postes avec sérum d individu atteint et un ou des postes avec sérum d individu non atteint pour varier les résultats. A L ATTENTION DE L EVALUATEUR : - La mise au point devra être présentée avec l'utilisation d'un grossissement permettant l'observation de l'agglutination (généralement l'utilisation du plus faible objectif est suffisante). - La mise au point sera considérée comme correcte lorsque l'examinateur obtiendra une mise au point adaptée à sa vue en utilisant seulement la vis micrométrique, cette dernière ne devant pas être bloquée. - L'examinateur veillera aux respects des consignes : utilisation d'une pipette par sérum, rangement de la paillasse et matériel utilisé dans l eau de javel. Ces gestes techniques sont particulièrement importants en immunologie (comme l utilisation des gants et de la blouse). - Il n'est pas attendu de commentaire au sujet des résultats, ceux ci peuvent être présentés uniquement à l'aide de schémas. - A la fin de l étape 3, en cas d échec, on fournira au candidat une fiche de secours (impression couleur sur papier de bonne qualité, ou affichage à l écran du fichier Serosyphilis_secours ou Serosyphilis_secours2 selon le cas). Prescriptions Autorisations (oui-non) Blouse Gants Lunettes Calculette Papier brouillon Oui, non fournie Oui, fournis non non Fourni par l établissement
7 Fiche secours candidat Images numérisées de l observation microscopique des résultats (X 400) : Avec le sérum S Avec le sérum S2. Avec le Sérum S
8 Fiche secours candidat 2 Images numérisées de l observation microscopique des résultats (X 400) : Avec le sérum S Avec le sérum S. Avec le Sérum S2
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