TD-SEC MODE OPÉRATOIRE

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1 TD-SEC MODE OPÉRATOIRE RESPONSABLE : Marlène LEJARS SUPPLÉANT : Christine BRESSY Modifications : Version v01 Version v02 (ajout page 7, b) temps de solubilisation) Version v03 (ajout p7, 4.a) concentrations optimales, modification débit purge p5 et p10) Rédigé par : Marlène LEJARS Vérifié par : The Hy DUONG Date de révision : 27/02/ /06/ /07/2013 Validé par : Marlène LEJARS 1

2 SOMMAIRE 1. PRÉSENTATION DE L APPAREIL PRÉCAUTIONS D EMPLOI MISE EN SERVICE Cas n 1 : l appareil n a pas été utilisé depuis plusieurs jours Cas n 2 : l appareil a été utilisé récemment (<2 jours) et est en mode recyclage (débit à 0,1mL/min) PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS ACQUISITION ARRÊT DE MANIPULATION DIVERS Vérification de la calibration Changement de la bouteille de THF TRAITEMENT DES DONNÉES Détermination des masses molaires Superposition de chromatogrammes

3 1. PRÉSENTATION DE L APPAREIL L appareil se compose d un GPCmax (passeur-automatique), d un TDA302 (four + colonnes + 3 détecteurs) et d un 4 ème détecteur UV comme le montrent les Figures 1 et 2. Figure 1 : Détails du module GPCmax (a) Figure 2 : (a) Module TDA302, et (b) détecteur UV. (b) On trouve également derrière le détecteur UV, une bouteille «drain» qui récupère les solvants utilisés lors du rinçage de la seringue. Figure 3 : Bouteille «drain» 3

4 2. PRÉCAUTIONS D EMPLOI a) Cet appareil fonctionne en phase solvant THF. Vérifier que le produit à analyser est bien soluble dans le THF. b) Toujours utiliser du THF, qualité HPLC et de préférence stabilisé. c) Toujours filtrer la solution à analyser (filtre 0,20µm). d) Vérifier le niveau de solvant restant dans la bouteille d entrée. Si le niveau est trop bas, suivre la procédure de changement de bouteille ( 7.2). Vérifier que la bouteille en sortie («THF poubelle») n est pas pleine. La changer par une bouteille vide le cas échéant. e) Vérifier la pression dans le circuit avant et après l analyse de vos échantillons. Les noter dans le cahier de suivi de la TD-SEC. La pression est généralement comprise entre 5 et 7MPa, à un débit de 1mL/min. Prévenir un responsable en cas d augmentation de pression. f) À la fin des analyses, le débit de circulation du solvant doit être diminué à 0,1mL/min et le système doit être mis en mode «recyclage» (tuyau de sortie positionné dans la bouteille de THF en entrée). g) Vider la bouteille «drain» de temps en temps. 4

5 3. MISE EN SERVICE Dans ce manuel, le module GPCmax, le four du TDA et l ordinateur sont considérés comme déjà allumés. Si ce n est pas le cas, les mettre sous tension et attendre que le four atteigne la température de consigne (30 C) Cas n 1 : l appareil n a pas été utilisé depuis plusieurs jours a) Ouvrir le logiciel OmniSec dont le raccourci est sur le bureau. Si besoin : User Id = admin, password = admin b) Mise en route de la pompe (si flow = 0mL/min et Pump = OFF) : Cliquer sur l icône GPCmax, dans la barre d outils à gauche. Dans la fenêtre GPCmax, indiquer 1 ml/min dans la case «Flow Rate/Normal» et vérifier que 0,1 ml/min est indiqué dans la case «Flow Rate/Stand-by». Valider en cliquant sur «Apply». Actionner la pompe en cliquant sur «Pomp On». Le débit augmente jusqu à 1 ml/min. c) Purge des détecteurs Dans barre d outils à gauche, cliquer sur l icône RI pour purger le détecteur RI (5 min), puis sur DP pour purger le détecteur DP (5 min). d) Nettoyage de la seringue : Cliquer sur l icône GPCmax, dans la barre d outils à gauche. Dans la fenêtre qui s ouvre, sélectionner «3 washes», puis cliquer sur «Wash Now» et «OK». Sélection du nombre de lavage + bouton de lancement Boutons Pump On et Off Bouton GPCmax Indication des valeurs de débit 5

6 e) Parallèlement, allumer : - le TDA (dans la porte, interrupteur de droite «A1 DC POWER»), - le laser du détecteur de diffusion de lumière, en cliquant sur le bouton «LASER» en façade, jusqu à ce que le voyant laser devienne rouge. - le détecteur UV (si besoin) : bouton on/off à l arrière du boitier. Stabilisation nécessaire = 30 MINUTES Cas n 2 : l appareil a été utilisé récemment (<2 jours) et est en mode recyclage (débit à 0,1mL/min) Dans la fenêtre GPCmax, indiquer 1 ml/min dans la case «Flow Rate/Normal» et vérifier que 0,1 ml/min est indiqué dans la case «Flow Rate/Stand-by». Valider en cliquant sur «Apply» ou «OK». Allumer les détecteurs (voir ci-dessus). Attendre 45 MINUTES pour stabiliser le système. 6

7 4. PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS a) Solubiliser le polymère à analyser dans du THF HPLC. La concentration optimale dépend de la masse molaire du polymère. Des valeurs indicatives de concentration en fonction de la gamme de masse molaire sont données dans le tableau ci-dessous. Masse molaire (g/mol) Concentration (mg/ml) < , > ,5 b) S assurer que le polymère est totalement solubilisé avant de l analyser. La durée de solubilisation est généralement d une demi-journée pour les polymères de faible masse molaire mais pour des polymères de plus de g/mol, laisser le polymère se dissoudre pendant au moins 24h. c) Filtrer la solution à l aide d un filtre PTFE de porosité 0,20 µm adaptable sur seringue luer-lock et l introduire directement dans les vials spécifiques à la TD-SEC (Figure 4). d) Refermer le vial avec un bouchon spécifique TD-SEC. Attention : - Ne pas confondre les filtres 0,20 µm avec les filtres 0,45 µm. - N utiliser que les vials spécifiques à la TD-SEC qui sont stockés dans le placard sous la TD- SEC. Ne pas confondre avec les vials de la LC-MS qui sont stockés dans l armoire X 182. Figure 4 : Vial TD-SEC + bouchon, filtre 0,2µm adaptable sur seringue luer-lock. Figure 5 : Porte-vials. e) Déposer le vial dans un emplacement vide d un des deux porte-vials (Figure 5). Bien repérer le numéro de position du vial. 7

8 5. ACQUISITION a) Dans le logiciel OmniSec, cliquer sur l icône «Edit Sample Sequence». b) Dans la fenêtre qui s ouvre : - Sélectionner dans la barre déroulante en haut à droite, le nom du sous-répertoire dans lequel seront enregistrés vos fichiers. - Mentionner pour chaque échantillon (1 par ligne) : Sample ID : nom de l échantillon. Conc : concentration (mg/ml) de l échantillon si connue, sinon laisser la valeur par défaut. Inj Vol : 100µL, volume d injection par défaut. Injs : 1, nombre d injection réalisé sur cet échantillon, 1 par défaut. Pre-injection commands : cliquer sur flèche, entrer la position du vial dans le porte-vials, valider avec. - Sélectionner «stand by flow rate at end of sequence» pour remettre le débit à 0,1mL/min à la fin des analyses (dans le cas où aucune autre analyse TD-SEC n est prévue dans la journée). - Valider en cliquant sur OK. 8

9 c) S assurer que la système est stabilisé (45min à partir de la mise en place du débit à 1mL/min, dont 30min pour la stabilisation du détecteur UV le cas échéant). d) METTRE LA SORTIE LE TUYAU DE SORTIE DANS LA BOUTEILLE «THF POUBELLE». e) Cliquer sur l icône «Start sample sequence» pour lancer la séquence d analyse. f) Cliquer sur «View Acquisition status» pour afficher l acquisition des détecteurs 6. ARRÊT DE MANIPULATION Si aucun autre échantillon n est à analyser dans la journée : a) Si besoin, remettre le débit à 0,1mL/min en indiquant cette valeur dans «Flow rate/normal», dans le module GPCmax. b) Remettre le recyclage (tuyau de sortie dans la bouteille de THF en entrée) c) Éteindre le TDA 302 (interrupteur A1 DC PWR). d) Éteindre la lampe de l UV (sur la façade : flèche de droite jusqu à atteindre «ON» puis flèche du bas pour mettre en «OFF». ATTENDRE 15 MINUTES, pour que la lampe refroidisse, puis éteindre à l arrière. 9

10 7. DIVERS 7.1. Vérification de la calibration À faire régulièrement : Afin de vérifier que la calibration est toujours correcte, analyser lors d une série d échantillon un étalon PS280K (solution dans le frigo), le traiter et vérifier que M w = ± 10 % Changement de la bouteille de THF a) Stopper la pompe : «GPCmax/Pomp Off». b) Quand le débit est à 0 ml/min, enlever la crépine, le tuyau de recyclage et le tuyau de rinçage et les mettre dans la nouvelle bouteille. c) Purger les tuyaux : - Ouvrir la porte d accès à la pompe et à la purge - Placer la seringue sur le tube, dévisser et aspirer 3x10 ml à l aide de la seringue (Figure 6). - Revisser la purge Figure 6 : Purge des tuyaux après changement de bouteille de THF. d) Remettre en route la pompe : «GPCmax/Pomp On», à un débit de 1 ml/min. e) Cliquer sur purge RI, puis purge DP. f) Remplacer la bouteille de «THF poubelle» par une bouteille vide. 10

11 8. TRAITEMENT DES DONNÉES 8.1. Détermination des masses molaires a) Ouvrir le fichier (.vdt). b) Les signaux des différents détecteurs sont visualisables en cliquant sur les onglets RI, UV, RALS, LALS, IV-DP, IV-IP. Il est possible de zoomer sur une zone par cliquer/glisser. c) Placer de part et d autre du pic, la ligne de base et les limites d intégration pour tous les signaux : - Ligne de base : Shift + clic droit - Limites d intégration : Shift + clic gauche. La touche Shift permet d effectuer les marquages sur tous les détecteurs à la fois. Pour un seul détecteur, remplacer la touche Shift par la touche Ctrl. d) Sélectionner une méthode de calcul PS calib jjmmaa.vcm en cliquant sur l icône ou sur l onglet «Method/Open» Remarque : la méthode doit se trouver dans le même dossier que les fichiers analysés. e) Modifier la méthode («Method/Edit Method» ou en cliquant sur F8), puis en cliquant sur l onglet «Sample» dans la fenêtre qui s ouvre. 11

12 Si concentration connue et dn/dc inconnu : Indiquer dn/dc=0 et décocher «Calculate concentration from detector». Si dn/dc connu et concentration inconnue : Indiquer la valeur de dn/dc et cocher «Calculate concentration from detector». Cliquer sur «OK». f) Cliquer sur l icône Execute ou sur F5. g) Une fenêtre s affiche avec les résultats Superposition de chromatogrammes a) Ouvrir un premier fichier (.vdt). b) Cliquer sur l onglet «Tools/Overlay View». Une deuxième fenêtre s ouvre. c) Ouvrir les fichiers suivants, ils se cumuleront dans la fenêtre «Overlay window». 12

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