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1 Dr Annick DATRY Service de Parasitologie et Mycologie Hôpital Pitié Salpêtrière 47 bd de l Hôpital Paris Tél : annick.datry@psl.aphp.fr Paris, le 21 juin 2013 Cher confrère, Concerne : Résultats des confrontations de Biologie Médicale: Série 2 Mycologie 2013 Nombre de réponses reçues : 242 sur 249 participants 1) Echantillon 1 (bouchon bleu) Il s agit d un enfant africain, âgé de 8 ans qui présente des petites plaques d alopécie au niveau du cuir chevelu Résultats Trichophyton tonsurans Techniques d identification Le prélèvement a été ensemencé sur milieu de Sabouraud-chloramphénicol-actidione. Examen macroscopique +++ Examen microscopique : prélever un fragment de la colonie que l on dilacère dans 2 gouttes de lactophénol ou bleu-lactophénol, ou utiliser la technique du scotch. On recherche au microscope les éléments caractéristiques des dermatophytes : filaments, microconidies, macroconidies et ornementations particulières Caractéristiques morphologiques : - Voir annexe Thérapeutique recommandée Le traitement s effectue : - par voie locale : application biquotidienne d un imidazolé en lotion. Il est souvent nécessaire de raser les cheveux autour des lésions. - par voie générale : griseofulvine per os (15 à 20 mg / kg / jour) pendant 6 à 8 semaines. Cette teigne étant anthropophile, il est nécessaire de rechercher un contact infestant dans l entourage familial ou scolaire Commentaires concernant les réponses - Réponses exactes : Trichophyton tonsurans, 130 fois - Réponses inexactes ou incomplètes : - Microsporum audouini, 36 fois - Trichophyton rubrum, 33 fois - Trichophyton soudanense, 19 fois - Trichophyton mentagrophytes, 14 fois - Trichophyton sp, 9 fois - Non effectuée au laboratoire, 1 fois - Réponse non retournée, 7 fois

2 2) Echantillon 2 (bouchon vert) Il s agit d une patient caucasien immunodéprimé, âgé de 50 ans et admis en réanimation. Il est fébrile et une hémoculture positive permet d identifier une levure Résultats Trichosporon asahii Techniques de laboratoire utilisées Ensemencement sur milieu de Sabouraud - chloramphénicol sans actidione. Même technique d identification que pour l échantillon Caractéristiques morphologiques - Voir annexe Thérapeutique recommandée Les formes profondes sont de mauvais pronostic. L amphotéricine B est la molécule de choix, mais la guérison est rarement obtenue sans la maîtrise de la pathologie sous-jacente Commentaires concernant les réponses La présence de Candida guillermondii dans certains échantillons à analyser résulte d une contamination probable de notre part, que nous ne réussissons pas à élucider. - Réponses exactes : - Trichosporon asahii ou Trichosporon sp, 140 fois - Réponses inexactes ou incomplètes : - Candida guillermondii, 44 fois - Cryptococcus sp, 34 fois - Candida famata, 6 fois - Candida albicans, 4 fois - Geotrichum candidum, 3 fois - Candida parapsilosis, 3 fois - Torulopsis candida, 1 fois - Non effectuée au laboratoire, 3 fois - Pas de réponse, 4 fois - Réponse non retournée, 7 fois

3 3) Echantillon 3 (à Ensemencer) Lavage bronchiolo-alvéolaire provenant d un patient qui présente une pneumopathie avec des images aspécifiques au scanner thoracique Résultats Aspergillus flavus Techniques de laboratoire utilisées L examen direct permet d objectiver des filaments. Ensemencer ensuite sur milieu de Sabouraud-chloramphénicol Caractéristiques morphologiques - Voir annexe Thérapeutique recommandée Il est recommandé de traiter par voriconazole Commentaires concernant les réponses La présence de Candida guillermondii dans certains échantillons à analyser résulte d une contamination probable de notre part, que nous ne réussissons pas à élucider. - Réponses exactes : Aspergillus flavus, 87 fois - Réponses inexactes ou incomplètes : - Candida guillermondii, 111 fois - Aspergillus sp, 15 fois - Aspergillus fumigatus, 10 fois - Candida famata, 5 fois - Saccharomyces sp, 4 fois - Candida glabrata, 2 fois - Candida parapsilosis, 2 fois - Cryptococcus laurentii, 2 fois - Candida lusitaniae, 1 fois - Mucor sp, 1 fois - Pas de réponse, 1 fois - Non effectuée au laboratoire, 1 fois - Réponse non retournée, 7 fois

4 ANNEXE 1 Trichophyton tonsurans Ce champignon est très rarement isolé en France, plus souvent en Afrique du nord et sur le continent américain. Examen macroscopique La croissance est assez lente (2 semaines). Les colonies sont duveteuses, planes ou avec un petit dôme central, parfois poudreuses, cérébriformes ou cratériformes. Elles sont de couleur blanche à beige, voire jaunâtre. Examen microscopique On observe : - des filaments irréguliers avec quelques chlamydospores - des microconidies nombreuses, piriformes disposées en acladium - des macroconidies exceptionnelles, allongées à paroi lisse. Cuir chevelu d un enfant Examen direct de culture Culture sur milieu de Sabouraud (recto) Culture sur milieu de Sabouraud (verso)

5 ANNEXE 2 Trichosporon asahii Les levures du genre Trichosporon sont largement répandues dans la nature et 6 espèces sont particulièrement inféodées à l homme. Elles sont saprophytes de la peau, mais aussi du pharynx et du tube digestif. Elles sont responsables d infections superficielles et profondes. Les infections profondes peuvent être localisées ou disséminées chez des sujets profondément immunodéprimés et grevées d une lourde mortalité. Dans ces derniers cas, 3 espèces sont en cause : Tr.asahii, Tr. mucoides et Tr. inkin. Diagnostic mycologique : - Examen macroscopique On observe des colonies en dôme, sèches, blanches, d aspect farineux avec des bords fissurés. - Examen microscopique On observe de nombreuses arthrospores, arrondies, en tonnelets (5 x 7,5µm) ou plus rarement allongées (10 x 2,5µm) - Diagnostic d espèce Croissance à 37 Assimilation des sucres :L arabinose positive Inositol, raffinose, sorbitol, melibiose négatifs Résistante à l actidione Réduction des sels de tétrazolium : positive Culture sur milieu chromogène Examen direct de la culture

6 ANNEXE 3 Aspergillus flavus Les Aspergillus sont des moisissures cosmopolites, très répandues dans l environnement. Ils vivent aux dépens de matières organiques en décomposition et se développent dans les silos, les composts, les balles de foin, les céréales et diverses plantes. Les spores sont produites en très grand nombre et leur petite taille favorise leur dissémination dans l air et leur passage par le tractus respiratoire jusqu aux alvéoles pulmonaires. A.fumigatus, puis A. flavus sont les espèces les plus souvent incriminées en pathologie humaine. Diagnostic mycologique d A. flavus Examen macroscopique On observe des colonies aériennes, poudreuses, de couleur jaune-vert à vert olive caractéristique. Le revers est incolore à gris rose. Si les sclérotes sont abondants, le revers est brun-rouge foncé. Examen microscopique On observe : une tête aspergillaire radiaire ou en colonne un conidiophore incolore, piqueté ou très rugueux une vésicule hémisphérique de taille variable 1 ou 2 rangées de stérigmates (phialides et métules) recouvrant toute la vésicule des conidies globuleuses et lisses la présence de sclérotes rouge-bru foncé ou noirs examen direct LBA après coloration Musto

7 Culture sur milieu de Malt examen direct de la culture

8 ANNEXE 4: Diagrammes Echantillon 1 (bouchon bleu) Trichophyton tonsurans MYCOSES Nbre de réponse 242 sur 249 % Identification des mycoses Trichophyton tonsurans ,72 Microsporum audouini 36 14,88 Trichophyton rubrum 33 13,64 Trichophyton soudanense 19 7,85 Trichophyton mentagrophytes 14 5,79 Trichophyton sp 9 3,72 Non effectuer au laboratoire 1 0,41 Total ,00

9 Echantillon 2 (bouchon vert) Trichosporon asahii MYCOSES Nbre de réponse 242 sur 249 % Identification des mycoses Trichosporon asahii ou Trichosporon ,85 Candida guillermondii 44 18,18 Cryptococcus sp 34 14,05 Candida famata 6 2,48 Candida albicans 4 1,65 Candida parapsilosis 3 1,24 Geotrichum candidum 3 1,24 Torulopsis candida 1 0,41 Pas de réponse 4 1,65 Non effectuer au laboratoire 3 1,24 Total ,00

10 Echantillon 3 (à Ensemencer) Aspergillus flavus MYCOSES Nbre de réponse 242 sur 249 % Identification des mycoses Aspergillus flavus et sp ,30 Candida guillermondii ,80 Cryptococcus sp 2 0,8 Candida famata 5 2 Candida glabrata 2 0,8 Candida parapsilosis 2 0,8 Saccharomyces sp 4 1,65 Candida lusitaniae 1 0,4 Mucor sp 1 0,4 Pas de réponse et Non effectué au laboratoire 4 1,65 Total ,00