Obtenir les distances relatives afin de générer une courbe étalon et pour déterminer les tailles des fragments

Transcription

1 Obtenir les distances relatives afin de générer une courbe étalon et pour déterminer les tailles des fragments Obtenez la photo de votre gel Ouvrir Word puis cliquer sur Insert>Picture. Retrouver votre photo. Votre photo devrait être insérée dans votre document comme ci-dessous. Utilisez la barre d'agrandissement au bas de l'écran pour obtenir une image aussi grande qu'acceptable. Ceci ne changera pas la taille réelle de l'image, mais seulement sont affichage. Cliquer sur "Insert" dans la barre du menu Shapes> et choisir l'outil pour une ligne.

2 Utiliser l'outil pour une ligne afin de tracer une ligne droite au travers du haut du gel à la hauteur de puits tel qu'illustré ci-dessous: Ceci fera de sorte à ce qu'un nouveau menu apparaîtra à la droite de l'écran qui montre les dimensions de la ligne. Vous pouvez accéder ce menu en tout temps en double cliquant sur la ligne. Afin de vous assurer que la ligne est parfaitement droite ajuster la hauteur à 0 si cela n'est pas déjà le cas. Afin d'obtenir les distances, pour chacune des bandes de votre échelle de poids moléculaire choisir l'outil pour une ligne encore une fois. Cette fois-ci tracer une ligne verticale à partir de votre ligne paraphe jusqu'au centre de la première bande de votre échelle. Cette fois-ci, ajuster la largeur à 0 si ceci n'est pas déjà le cas. Notez que vous pouvez déplacer, une fois sélectionnée, la ligne à l'aide des touches avec les flèches. De plus, vous pouvez changer la hauteur (longueur) de la ligne dans le menu des dimensions. Obtenir la distance du puits (ligne référence initiale) jusqu'à la bande de l'échelle de poids moléculaire. Pour ce faire, double cliquer sur la ligne verticale et enregistrer la valeur pour la hauteur indiquée dans le menu des dimensions. Répéter cette approche pour chacune des bandes de l'échelle. Vous pouvez rapidement faire cela en tout simplement changeant la hauteur de la ligne verticale afin qu'elle corresponde à la prochaine bande et ensuite enregistrer la nouvelle valeur.

3 Générer votre courbe étalon avec Excel Ouvrir Excel et faire l'entrée de vos données pour votre échelle de poids moléculaire dans deux colonnes. La première colonne devrait contenir les tailles et la deuxième les distances de migrations correspondantes. Sélectionner les deux colonnes de données, puis cliquer sur "Insert" dans le menu du haut. Choisir l'option "scatter" du nouveau menu et ensuite l'icône pour "scatter" encore une fois. Une version préliminaire de votre graphique apparaîtra sur votre feuille Excel. Pour plus de facilité, cliquer sur l'option "Move Chart sur la nouvelle barre de menu et choisir l'option "New Sheet". Votre graphique sera affiché de façon indépendante.

4 Maintenant, nous allons apporter des modifications afin de pouvoir travailler avec ce graphique et le rendre présentable pour la remise de vos devoirs. Enlever la légende en cliquant dessus et en la supprimant à l'aide de la touche "delete". Changer le titre pour quelque chose d'approprié. Ajouter des étiquettes appropriées aux axes: Cliquer sur "Layout>Axis Titles poursuivre de façon appropriée. Ajouter les linges de grilles majeures et mineures: sélectionner l'axe en cliquant avec le bouton droit de la souris sur n'importe laquelle des valeurs. Ensuite, choisir "add major and minor grid lines".

5 Maintenant, convertir votre axe des Y à une échelle logarithmique: À l'aide du bouton droit de la souris, cliquer sur n'importe quelle valeur sur l'axe des Y puis choisir l'option "format axis". Choisir l'option "logarithmic scale" Enfin, régler la valeur minimale à une valeur appropriée de telle façon a ce que svos données occupe autant de l'espace disponible. Dans ce cas-ci, j'ai choisi 100. Vous avez presque fini. Choisir l'option "page layout" à partir du menu puis > orientation>portrait. Maintenant, étirer votre graphique afin qu'il occupe autant de la page que possible. Votre graphique devrait ressembler comme celui ci-dessous. Sauvegardé et imprimé.

6 Obtenir les tailles pour vos digestions par enzymes de restriction Suivre les directives dans la première partie de ce document afin d'obtenir les distances de migration pour chacune des bandes générées d'une digestion complète. Ceci doit être fait à partir de la même image de laquelle votre courbe étalon a été générée. Sur une version imprimée de votre courbe étalon, utiliser un crayon à mine afin de tracer la meilleure tendance. N'UTILISEZ PAS Excel pour faire ceci. Retrouver sur la version imprimée de votre graphique les distances de migration correspondantes à chacune des bandes puis déterminer la taille correspondante. N'UTILISEZ PAS Excel pour le faire. Par exemple, une distance de migration de 2.4 cm correspond à approximativement 3.6 Kpb d'après l'exemple ci-dessus.