L'EXAMEN DE LABORATOIRE DANS LES TROUBLES DU MÉTABOLISME CELLULAIRE TP 4-5

Transcription

1 L'EXAMEN DE LABORATOIRE DANS LES TROUBLES DU MÉTABOLISME CELLULAIRE TP

2

3

4 LES MÉCANISMES DES TROUBLES DU MÉTABOLISME DES GLUCIDES

5 L EXAMEN DE LABORATOIRE DOSAGE DU GLUCOSE SANGUINE Le prélèvement de sang - est utilisé très fréquemment en médecine vétérinaire et de nombreuses analyses sont réalisables au laboratoire. Après des analyses plus poussées mais dont les résultats sont plus longs à obtenir, il est possible de faire un traitement étiologique. Le sang permet de relier les fonctions entre elles par le transport des molécules et des anticorps. - il est possible de diagnostiquer certaines maladies par des analyses réalisées sur ce substrat et les résultats permettent de mettre en place par la suite des prélèvements plus adaptés.

6 DES BONNES PRATIQUES En fonction de l analyse demandée, il faut un tube avec un conservateur particulier ou sans conservateur le cas échéant. On utilise ainsi: - un tube à EDTA pour l hématologie ; - un tube citraté pour l étude de la coagulation (fibrinogène); - un tube hépariné pour l équilibre acido-basique ; - un tube hépariné si l analyse se fait sur sang total; - un tube sec si c est sur sérum pour les analyses biochimiques - un tube avec oxalate pour éviter la glycolyse (glucose, lactates) et conserver les plaquettes. Les conditions de prélèvement ont également leur importance car en cas de stress, on observe une hausse de la glycémie et neutrophilie. - Il faut en tenir compte lors de l interprétation. La conservation doit se faire dans l idéal au froid. Il ne faut pas que la glace rentre directement en contact avec le tube de verre sous peine de faire geler le sang, rendant l analyse ininterprétable.

7 DOSAGE DU GLUCOSE (METHODE STAT-FAX 1904) Le dosage du glucose plasmatique est réalisé par une méthode enzymatique colorimétrique. En présence de la glucose-oxydase, le glucose est oxydé en acide gluconique et peroxyded hydrogène. Ce dernier, en présence de la peroxydase et du phénol, oxyde un chromogène (4-aminoantipyrine) incolore en un colorant rouge à structure quinoneimine. L absorption est mesurée à une longueur d onde de 505 nm et l intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration en glucose.

8 GLUCOSE DANS LE SANG - L animal doit être à jeun depuis au moins 12 heures et 16 heures au plus. Le glucose peut être mesuré dans le plasma, dans le sérum ou dans le sang après déprotéinisation ou directement. Les valeurs obtenues dépendent du type de prélèvement: - les valeurs plasmatiques sont environ 12 à 13 % plus élevées que la glycémie mesurée sur le sang, étant donnée la différence de contenu en eau des érythrocytes et du plasma. Le sang prélevé est recueilli dans des tubes contenant l EDTA préalablement étiquetés et numérotés pour chaque patiente, puis centrifugés à 3000 tours pendant 15 min. Le plasma est conservé pour le dosage de glucose, des triglycérides, du cholestérol total. Le dosage du glucose se fait le jour même du prélèvement. Les échantillons ont été stockés au congélateur pendant un temps très court, nedépassant pas un mois, afin d éviter la dégradation des protéines et des lipides.

9 L EXAMEN DE LABORATOIRE DANS LES DYSLIPIDEMIES Dosage de: - lipides sanguine totales; - triglycerides; - cholestérol totale; - acides gras libres; - lipides complexe ou les lipoides; - Lécithine - Phosphatidyl-glycérol - Phosphatidyl-inositol - Sphingomyéline - Sphingolipides - Céramide - Sphingolipidoses - Cérébroside.

10

11 DOSAGE DES TRIGLYCÉRIDES (METHODE STAT-FAX 1904) Les triglycérides du plasma sont dosés par une méthode colorimétrique-enzymatique. Les triglycérides plasmatiques sont déterminés après hydrolyse-enzymatique en présence d une lipase. L'indicateur est la quinoneimine formée à partir de peroxyde d'hydrogène, de 4-amino-antipyrine sous l'action catalytiquede la peroxydase. La concentration est déterminée à une longueur d onde 505 nm et s exprime en g/l.

12 DOSAGE DU CHOLESTÉROL TOTAL (METHODE STAT-FAX 1904) Le cholestérol du plasma et sont dosés par une méthode colorimétrique-enzymatique (STAT-FAX 1983). Les esters de cholestérol sont hydrolysés par la cholestérol-ester-hydrolase encholestérol libre et acides gras. Le cholestérol libre produit et celui préexistant est oxydé par une enzyme la cholestérol-oxydase en 4 cholesterone et peroxyde d hydrogène. Ce dernier enprésence de peroxydase, oxyde le chromogène en un composé coloré en rouge. La concentration en quinoneimine colorée mesurée à 505 nm est directement proportionnelle à la quantité de cholestérol contenue dans le plasma et est exprimée en g/l.

13 ENREGISTRER LES RESULTATS Parameter Equipe Glucose (mg/dl ou mmol/l) Hyperglycemie Glucose (mg/dl ou mmol/l) Hypoglycemie Cholesterol () Tryglycerides () Equipe 1 Equipe 2 Equipe 3 Valeurs de référence

14

15

16

17

18 L EXAMEN DE LABORATOIRE MÉTABOLISME DES PROTÉINES OBJECTIVES: Dosage des protéines plasmatiques totales: - méthode colorimétrique. - méthode par réfractométrie. Dosage des fractions des protéines plasmatiques: - dosage de l Albumine; - détermination des Globulines. Determination du rapport Albumines/Globulines: chez les chiens Dosage des paraprotéines ou de paraproteinemie: -proteine C reactive, protéines tumoralles.

19

20 POURQUOI FAIRE UNE ANALYSE DES PROTÉINES SÉRIQUES/PLASMATIQUES? L analyse des protéines sériques (du sérum) est utile dans de nombreuses situations pour: 1) orienter un diagnostic, 2) préciser la gravité d une maladie, 3) suivre l efficacité d un traitement. - dans le cas de n importe quelle type de maladie (bactérienne, virale, tumorale etc, etc) - dans le cas d une maladie qui affecte le métabolisme de protéines (glucose, lipide etc)

21 CE DOSAGE PEUT ÊTRE PRESCRIT EN CAS DE: - un syndrome inflammatoire; - l altération de l état général; - les anomalies de l hémogramme; - les douleurs osseuses ou articulaires qui ne peuvent pas être expliquées; - différents forme clinique de néoplasies; - des troubles hépatiques; - manifestation d insuffisance rénale.

22 LA DOSAGE DES PROTÉINES TOTALES Les méthodes de dosage des protéines totales sont nombreuses et présentent chacune des caractéristiques différentes: - sensibilité, - interférents, - réponse plus ou moins différente selon la composition en acides aminés. Le choix d'une méthode dépend donc du contexte. - par l'intermédiaire du dosage de l'azote total, - par mesure de l'absorbance intrinsèque à 280 nm, - par méthodes photométriques après mise en œuvre d'une réaction chimique ou d une coloration.

23 RÉSULTATS D UNE ANALYSE DES PROTÉINES SÉRIQUES Les Hyper protidémies l augmentation des protéines plasmatiques totales est observée dans de nombreuses situations cliniques, comme une altération: - relative - une déshydratation (coup de chaleur, diarrhée, vomissements); -absolu - au cours de diverses maladies comme le myélome, les inflammations corniques qui entrainent une augmentation de la masse de protéines circulantes. Les hypo protidémies - diminutions de la concentration de protéines totales peuvent être causées par: - un défaut d'apport (malnutrition), un défaut d absorption ou de synthèse (insuffisance hépatique), - par une perte anormale au niveau du rein; - par une surcharge hydrique (hémodilution).

24 L'ÉLECTROPHORÈSE SERIQUE L'électrophorèse sérique des protéines est une technique qui consiste à séparer les différentes classes ou fractions des protéines qui se trouvent dans le sang. - permet d'observer une diminution ou une augmentation relative ou absolue de chacune de ces classes ou fractions (albumines et globulines). Comme le dosage des protéines totales, elle est utilisée pour évaluer l'état général, notamment: - le bon fonctionnement du foie, - pour étudier différents états pathologiques tels qu'une inflammation ou une altération des défenses immunitaires ou une prolifération tumorale maligne etc.

25 PRINCIPE DE L'ÉLECTROPHORÈSE L'électrophorèse est une technique biochimique de séparation fondée sur le fait que des molécules portant des charges électriques différentes migrent à des vitesses différentes lorsqu'elles sont placées dans un champ électrique. - l électrophorèse est une technique de routine dans les laboratoires où on l utilise pour séparer notamment les protéines et les acides nucléiques.

26 PROTOCOL D'ÉLECTROPHORÈSE Le protocole d'électrophorèse comporte le dépôt des échantillons, la mise en place des gels, la migration électrophorétique, la fixation du gel et sa coloration puis une décoloration du fond. - Une fois séchés, les gels peuvent être conservés indéfiniment.

27 Piste d'électrophorèse et analyse densitométrique

28

29

30 ENREGISTRER LES RESULTATS Parameter Equipe Proteines totales (g/dl ou g/l) Hyperproteinemia Proteines totales (g/dl ou g/l) Hypoproteinemia Albumines (g/dl ou g/l) Globulines (g/dl ou g/l) Rapport A/G Equipe 1 Equipe 2 Equipe 3 Valeurs de référence

31 L INTERPRETATION D ÉLECTROPHORÈSE L analyse par électrophorèse sérique ou plasmatique montre la répartition des principales protéines sanguines et trace un profil caractéristique, qui pourra être interprété par le médecin. - en cas de syndrome inflammatoire, par exemple, le tracé sera typique, montrant une augmentation des alpha-globulines (hyperalphaglobulinémie) et une diminution de l albumine. - L augmentation des bêta-globulines, quant à elle, peut signifier la présence d une carence en fer, d une hypothyroïdie ou d une obstruction biliaire. - Le syndrome néphrotique (dysfonctionnement des reins) sera quant à lui caractérisé par une hypoalbuminémie et une hyperalphaglobulinémie.

32

33

34

35