INDICATIONS de la CGH ARRAY en DIAGNOSTIC PRENATAL (ACPA) Réseau Naître et Grandir en LR 5 ème Journée Régionale d Echographie Jean CHIESA

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1 INDICATIONS de la CGH ARRAY en DIAGNOSTIC PRENATAL (ACPA) Réseau Naître et Grandir en LR 5 ème Journée Régionale d Echographie Jean CHIESA 09 Octobre 2015

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3 Principe de la CGH array Nanotechnologie Micro réseau ADN Principe simple Hybridation comparative Criblage Pangénomique BAC : bacs Oligonucléotides 60 k (8) 180 k (4) k (2) 1M (1) Snip Résolution X 1000 Echantillon ADN Contrôle

4 Les Prélèvements Prélèvements Ovulaires Villosités choriales (45-65 mg) EPP Liquide amniotique (> 30 ml) LA natif CGH après culture si LA hémorragique 17 % d artefact 1 cas fausse trisomie Sang fœtal Vérification contamination maternelle Prélèvements Parentaux 1 tube héparine/2 tubes EDTA Vérifications des CNVs Banque ADN : QPCR Culot cytogénétique : FISH Réalisation d un éventuel caryotype parental Vérification de contamination maternelle

5 Fraction 1 du prélèvement Culture de secours Caryotype a minima Vérification CNV par HIS Conseil génétique ADN de secours pour ACPA ADN pour ACPA si LA hémorragique Banque ADN Autres demandes génétiques

6 Fraction 2 du prélèvement : Résultats Préliminaires Amio PCR Identité vigilance Diagnostic de sexe Exclusion d une +21, +13 et +18 Exclusion triploïdie Contamination maternelle Ex Analyse microsatellite 13, 18, 21, X et Y FastFish 13,18,21,X et Y Triploïdie

7 Fraction 3 du prélèvement ACPA : Caryotype Moléculaire X Y CNV -1 +1

8 Réarrangements Considérés Pathogènes Trisomies / monosomie X Rendu immédiat Micro Réarrangements (trisomie partielle, délétion) Connus Rapportés dans au moins 3 publications Confirmation sur le fœtus FISH pour les délétions (culot cytogénétique) QPCR pour les gains (banque ADN) Vérifications parentales Origine mat, pat ou de novo FISH pour les délétions QPCR pour les gains

9 Ch8 Critères de Validations 15 Mb Confirmé par HIS De novo

10 CH 1p32.36 Ch9q34.2 Del 1p32.36/Dup9q34.2 Evoque une translocation déséquilibrée Trcp(1;9)(p32.26;q34.2) Caryotype Parental HIS origine Paternelle

11 Ch1 Ch1

12 Variant à Conséquence Clinique Inconnu (VOUS) Figure dans le Compte Rendu de la puce Les parents doivent en être informé Conseil Génétique Cas pratique : couple consanguin P1G2 Syndrome Poly malformatif Cardiopathie complexe : Hypoplasie VG, atrésie mitrale et interruption arche aortique Asplénie Caryotype BT normal 46,XX

13 Gain : 1.5 mb Chr7 Critères de sélection Région non polymorphique De Novo +++ Taille :1.5 Mb Contenu 10 gènes MEOX2 Homéo gène de la cardiogenèse 8 articles

14 Découvertes fortuites CNV gènes tumoraux (Rb) : signalés CNV maladies liées à l X : signalés Myopthie de Duchenne /Becker Dél hétérozygote Autosomique Récessive Pas signalées Sauf si fréquence hétérozygotes > 1/50 Amyotrophie spinale infantile (2 cas en 2014) Délétions homozygotes AR : signalés CNV maladies révélations tardives BRCA 1-2

15 Prescription ACPA en DPN Arrêté du 7 juin 2013 du JO Caractéristiques Génétiques Information claire et loyale du patient Consentement Eclairé Spécifique Le Prescripteur Médecin Généticien Médecin non généticien Indications La prise en charge Les conséquences familiales RCP en CPDPN

16 Indications de L ACPA Indications Chromosomiques Caractérisation d une anomalie du caryotype Marqueur chromosomique Remaniement chromosomique équilibré De novo Hérité + Signes d appels échographiques Signes d Appels Echographiques CN > 3.5 mm +++ RCIU < 3 ème P Syndrome poly malformatif Petits signes isolés (au cas par cas) Indications Exclues MS T1 T2 DPNI +++ Age maternel Anxiété maternelle Remaniement chromosomique équilibré hérité et sans SAE

17 Limites de l ACPA Les Translocations Equilibrées Aucune importance pour l IMG Les Mosaïques < 5 % Les Triploïdies : 69 chromosomes Normalisation des «load ratio» hybridation Les mutations ponctuelles génétiques Biologie Moléculaire (séquençage) Découvertes Imprévues Révélation d une maladie sans rapport avec le problème clinique Autisme (125 gènes) Conseil génétique

18 Conclusion Technique substitutive au caryotype DPN Constitutionnel Post natal Microremaniements Chromosomiques Taux de détection sera X? en DPN Technique Complexe Quantité et qualité du prélèvement BT>45 mg +++ LA non précoce et non hémorragique Prélèvement des deux parents 15 jours de délai pour un résultat BT +++ Culture obligatoire

19 Bilan 2014 CGH array S A E L A B T MFIU Sang fœtal CGH a % de diagnostic supplémentaire 2013/2014 La fin de nos certitudes cliniques 22q11 : nos 3 premiers cas (jamais évoqué en staf) Holoproencéphalie et cardiopathie / Agénésie rénale bilatérale / Hydramnios petite bouche Prenatal Diagnosis Aout 2015 : Prévalence 22q11.2 équivalente à la trisomie (1/850) Mutations à Pénétrance variable Délétion 2q11.2, del16p13.11, dup 22q11.2 Micro remaniements parentaux La fin programmée du caryotype en DPN