ANALYSE BACTERIOLOGIQUE QUANTITATIVE ET QUALITATIVE DE BIOPSIES OSSEUSES DE PIEDS DIABETIQUES ET RECHERCHE DES FACTEURS DE PATHOGENICITE

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1 ANALYSE BACTERIOLOGIQUE QUANTITATIVE ET QUALITATIVE DE BIOPSIES OSSEUSES DE PIEDS DIABETIQUES ET RECHERCHE DES FACTEURS DE PATHOGENICITE Florence BAUDOUX Diabétologue CHRU de Lille 04 octobre 2011

2 ey, S.D. et al. Incidence, outcomes, and cost of foot ulcers in patients with diabetes. Diabetes Care 22, (1999). r MG. The fate of the second leg in the diabetic amputee. Diabetes 1960;9:100-3 house, F.W., Jurgensen, C. & Block, M.A. The later life of the diabetic amputee. Another look at fate of the second leg. Diabetes 17, (1968). Pourquoi s intéresser à l ostéite dans l infection du pied diabétique? L infection osseuse complique 1 /3 à 2/3 des plaies chroniques du pied 36% des patients qui ont une ostéite subissent une amputation durant le suivi. 68% des patients qui ont subi une amputation seront amputés une seconde fois dans les 5 ans; Mortalité dans les 5 ans suivant l amputation initiale est de 50%.

3 Objectifs de l étude Caractériser la microbiologie de l ostéite du pied diabétique Quantité Qualité Caractériser l organisation des bactéries dans l os Caractériser les staphylocoques Capacité d adhérence Capacité à créer un biofilm

4 Matériel et méthode Etude prospective réalisée entre février 2010 à mai Tout patient diabétique présentant une ostéite du pied nécessitant une biopsie osseuse et/ou une amputation. Ostéite prouvée par clinique + radio ou IRM

5 Hôpital Claude Huriez, CHRU Lille Centre hospitalier de Tourcoing 2 à 3 biopsies osseuses 1 à 2 biopsies Quantitatif, qualitatif 1 biopsie MEB Laboratoire de bacteriologie clinique, Faculté de Pharmacie U995 Université Lille 1

6 n= 38 prélèvements ; 35 patients 65,8% d hommes 89.4% diabétiques de type II âge moyen 65 ans. 55% chirurgie orthopédique du CH de Tourcoing 33% étaient conclus stériles (n=7) par le laboratoire de routine. 45% chirurgie vasculaire du CHRU de Lille. 23% étaient conclus stériles (n=4).

7 3,7 log d ufc/ g 5000 bactéries par gramme d os

8 Veillonella 2 Bactérie identifiée dans l ostéite nb Cocci Gram+ Staphylococcus aureus 12 Staphylococcus capitis 2 Staphylococcus caprae 2 Staphylococcus epidermidis 9 Staphylococcus lugdunensis 2 Staphylococcus pettenkoferi 2 Staphylococcus sciuri 1 Staphylococcus simulans 1 Staphylococcus warneri 2 Staphylococcus sp 1 Micrococcus luteus 1 Micrococcus sp 1 Streptococcus agalactiae 1 Enterococcus faecalis 5 77 souches identifiées: 28% staphylocoques coagulase négative 15,3% Staphyloccus aureus 12,8% Corynebacterium Enterococcus faecium 1 Bacille Gram+ Corynebacterium 10 Dermabacter hominis 2 Bacille Gram - Entérobactérie Citrobacter diversus 1 Enterobacter cloacae 3 Escherichia coli 2 Serratia liquefaciens 1 Serratia marcescens 2 Proteus mirabilis 3 Providencia rettgeri 1 Morganella morganii 1 Autres BGN Pseudomonas aeruginosa 1 Anaérobie Anaerococcus prevotii 1 Finegoldia magna 2 Propionibacterium acnes 2 Ostéite chronique: 1,76 bactéries/ plvt 15.4% des souches sont des anaérobies 28,6% des plvts: présence d anaérobies.

9 Caractéristiques des staphylocoques Capacité à dégrader le collagène Gélatinase Exprimée par 58% des staphylocoques 11/12 des S.aureus 8/22 des staphylocoques coagulase négative

10 Capacité à produire un exopolysaccharide Test au Rouge congo 65% de positivité 70% des Staphylococcus aureus Sur plaie chronique 55 souches de S. aureus: 69% + 20 souches S. epidermidis 73% + Nasopharynx 146 Staphylococcus epidermidis 58,9% + Los, R. et al. A comparative analysis of phenotypic and genotypic methods for the determination of the biofilm-forming abilities of Staphylococcus epidermidis. FEMS Microbiol. Lett 310, (2010) Podbielska, A., Galkowska, H., Stelmach, E., Mlynarczyk, G. & Olszewski, W.L. Slime production by Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis strains isolated from patients with diabetic foot ulcers. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.) 58, (2010). Arciola, C.R., Baldassarri, L. & Montanaro, L. Presence of icaa and icad genes and slime production in a collection of staphylococcal strains from catheter-associated infections. J. Clin. Microbiol 39, (2001).

11 Capacité d adhérence à une surface Test au crystal violet La positivité est définie par une densité optique à 570 nm >0,2 76,6% Los, R. et al. A comparative analysis of phenotypic and genotypic methods for the determination of the biofilm-forming abilities of Staphylococcus epidermidis. FEMS Microbiol. Lett 310, (2010). Stepanović, S. et al. Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci. APMIS 115, (2007).

12 MEB

13 Perspectives Poursuite de la collection bactérienne Evaluation moléculaire Collaboration avec l équipe du Dr. Brad Spellberg of UCLA Evaluation en microscopie électronique des biofilms formés sur disques de biocéramique.