Coprologie Vétérinaire. Aperçu général. Objectifs PCL DMI GMV2. PCL coprologie: Sensibiliser à coprologie

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1 Coprologie Vétérinaire PCL DMI GMV2 Yannick Caron 1 PCL coprologie: Aperçu général un exposé théorique techniques d analyses coprologiques (séminaire et vidéo) les différents œufs d endoparasites identifiables dans les matières fécales un poly un tp Mac Master / Enrichissement Lames d enrichissement 2 Objectifs Sensibiliser à coprologie Intérêt: Décision traitement vs protocoles vermifugation Mise en évidence résistance vs succès thérapeutique Pas cher Faisable au cabinet (centrifugeuse, microscope) Sensibilité (faux négatifs) Familiariser avec techniques (routine: MM/E, ) Identification des (endo)parasites (œufs, larves) 3 1

2 Préliminaires Agents de zoonose (Giardia sp., Toxoplasma sp., ) Porter des gants et un tablier Plans de travail propres et ordonnés Solutions corrosives (NaCl, ZnCl2) 4 Les règles de base -1 Travailler dans les mêmes conditions (comparaison) Un échantillon = individuel ou 5 à 10% des individus d un même lot Quantité suffisante (2x4g à 20 gr) Etre systématique Examen macroscopique toujours Un examen négatif n a pas valeur d exclusion: Sensibilité (Fasciola sp.) Répéter prélèvementsss 5 Les règles de base -2 Conservations échantillons MF: récipient hermétique (déshydratation) A + 4 C Si examen quantitatif : jusqu à deux semaines Si examen qualitatif: un mois voir plus (exceptions ) Si pas de frigo : dans du formol à 4% (quantitatif impossible) PAS de congélation! 6 2

3 Microscope Diaphragme fermé (augmente contraste) Grossissement X100 (objectif 10x) sauf pour Giardia sp. et Cryptosporidium sp. qui se fait au grossissement X400 (objectif 40x) Description œuf: Taille Couleur Forme Contenant: Épaisseur paroi, ornementation, bouchon polaire, Contenu (selon fraîcheur ) : Blastomères, morula, embryon, larve, vide 7 Œuf standard Trichostrongle (TST) (Ruminant) ou Strongle (ST) (Non ruminant) Taille : standard (70-90 µm) (=TS) Forme: ellipsoïde Couleur : translucide, incolore Sans ornementation Contenu: blastomère/morula/larve Contenant: paroi simple et lisse 8 9 3

4 Les techniques Examen macroscopique Après élimination du liquide (diarrhée) A l œil Nématode (adulte, larve) Cestode (segment) + microscope (Taenia sp. =/= Dipylidium sp.) Examen microscopique Qualitatif Quantitatif (OPG) 10 Les techniques Examen microscopique: Qualitatif: Examen direct (protozoaire) Méthode d enrichissement par flottaison Méthode d enrichissement par sédimentation Méthode d enrichissement par sédimentation/flottaison (=E) Méthode de Baermann Coproculture Coloration de Ziehl-Neelsen modifié Coloration au lugol Méthode de Telemann et Rivas Quantitatif: Mac Master (=MM) 11 Les techniques Examen microscopique: Qualitatif: Examen direct (protozoaire) Frottis pointe aiguille MF ds une goutte eau microscope X 400 kystes et trophozoïtes Giardia sp. Méthode d enrichissement par flottaison Utilisation d une solution dense (ZnCl2, NaCl, ) Les oeufs (légers) flottent (d oeufs<sol ) Par épuisement Méthode d enrichissement par sédimentation Dissolution MF ds liquide Repos ou centrifugation (sédimentation) N fois (lavage) Méthode d enrichissement par sédimentation/flottaison (=E) 12 = Enrichissement cf poly et vidéo (d ZnCl2-NaCl = 1,5) 4

5 Les techniques Examen microscopique: Qualitatif: Méthode de Baermann Cf poly Mise en évidence L1 de Dictyocaulus viviparus, Coproculture Cf poly Permet différencier TST, ST Coloration de Ziehl-Neelsen modifiée Cf poly Mise en évidence ookyste Cryptosporidium parvum Coloration au lugol Giardia sp. Méthode de Telemann et Rivas (graisse) 13 Les techniques Examen microscopique: Quantitatif: Mac Master (=MM) Cf Poly NaCl d=1.2 Surtout pour les oeufs légers (= coccidies, TST, Trichuris sp., Capillaria sp., ) Pas pour les oeufs lourds (= Fasciola sp., Nematodirus sp., Triodontophorus sp., ) Inutile chez les carnivores (examen direct) 14 Avantages Inconvénients Examen direct Flottaison Sédimentation Baermann Telemann-Rivas - Rapide - Très peu coûteux - Pas de déformation des éléments parasitaires - Très bonne sensibilité (++++) - Facile - Rapide - Faible coût - Facile - Faible coût - Recherche des oeufs lourds possible - Adaptée à la recherche des larves - bonne sensibilité (+++) - Adaptée à des prélèvements gras - Bon préalable à la coloration de Ziehl- Neelsen - mauvaise sensibilité (+/-) - Déformation des éléments parasitaires - Pas de mise en évidence des oeufs lourds pour des solutions de densité < 1,3 - Peu adaptée à la recherche de larves - Longue - Sensibilité moyenne (++) - Ne s'applique qu'à la recherche des larves - Longue - Travailler obligatoirement avec un prélèvement frais - Longue - Fastidieuse - Nécessite une centrifugeuse Colorations Coproculture - Adaptées à la mise en évidence de Giardia sp.(bonne sensibilité) et de Cryptosporidium sp.(sensibilité faible) - Diagnose des strongles digestifs par espèce - Nécessite des réactifs spéciaux - Longue - Diagnose délicate - Travailler obligatoirement à partir d'un prélèvement sans agent de conservation (sauf réfrigération) 15 5

6 Les résultats L examen macroscopique permet d observer : Des segments ovigères de cestodes : (Echinococcus multilocularis ) (Echinococcus granulosus) Dipylidium caninum Taenia sp. Mesocestoides Des adultes Toxocara sp. Toxascaris leonina Ancylostoma sp. Trichuris sp. Trichonema sp. 16 Les résultats L examen microscopique permet d observer: Les trophozoïtes, kystes et ookystes de protozoaires Les œufs et larves d helminthes 17 L interprétation Les faux positifs: Pseudoparasitisme: éléments présents dans les matières fécales suite à ingestion passive: les œufs d acariens Faux-parasitisme par prédation: formes parasitaires dues à ingestion d'une proie ou d'un cadavre Capillaria sp. chez le sanglier Faux-parasitisme par coprophagie: ingestion de MF d animaux de la même sp ou non 18 6

7 L interprétation Les faux négatifs: Plus fréquents Interprétation plus difficile: Destruction par la dessication Elimination irrégulière de la forme de dissémination Ds la période prépatente Stérilisation passagère par traitement (benzimidazole) 19 L interprétation Doit tenir compte de l sp et de l OPG: Pour ST, TST, coccidies La coprologie a du sens si on tient compte de l OPG (car très fréquent) et de la clinique 250/300 ST OPG pour CV 500/1000 TST pour BV, Pour les autres helminthes et protozoaires Présence suffisante Giardia sp., Fasciola sp.,

8 Les protozoaires: Les flagellés Giardia duodenalis Mise en évidence par examen direct (+ lugol), Telemann (prélèvement gras) Zoonose On recherche deux formes - Kyste - Trophozoïte 22 Les protozoaires: Les flagellés Giardia duodenalis On recherche deux formes - Kyste - MF non fraîche - 12 µm - ovale, x2 paroi, 4 noyaux, structure spiralée

9 25 Les protozoaires: Les flagellés Giardia duodenalis On recherche deux formes par examen direct - Trophozoïte - MF fraîche et diarrhéique - 15 µm - mobile, piriforme, axostyle, 2 noyaux, 4 flagelles, 2 corps médians réfringents, et une ventouse ventrale

10 Les protozoaires: Les flagellés Giardia duodenalis On recherche deux formes par examen direct Emission irrégulière: - Faire trois examens à 48 h d intervalle Les protozoaires: Les Emeriidés Eimeria sp. et Isospora sp. Mise en évidence par MM/E Ookystes Sphériques à ellipsoïdaux µm (- de la ½ de la TS) Un bouchon polaire chez certaines sp 30 10

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12 34 35 Les protozoaires: Les Emeriidés Eimeria sp. et Isospora sp. Présence d ookyste MF Coccidiose Symptômes svt ds période prépatente (sans ookystes) Sp non pathogène OPG très grd = pas forcément malade Copro positive svt qd animal en phase de guérison 36 12

13 37 Les protozoaires: Les Emeriidés Cryptosporidium parvum Mise en évidence par coloration de Zielh Neelsen Zoonose Frottis MF Prélever Ax sains et diarrhéiques car seul présence kyste pas significative Coloration met en évidence acido-résistance de la paroi du kyste (rouge sur fond vert) Double paroi 7 µm

14 40 41 Les protozoaires: Les Sarcocystidés Sarcocystis sp.; Neospora caninum; Toxoplasma gondii Mise en évidence par MM Zoonose (Sarcocystis sp., Toxoplasma gondii ) Mise en évidence difficile µm 42 14

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16 46 47 Les nématodes: Les Némathelminthes Ruminant Non ruminant Nématode avec bourse caudale: { { Famille des Trichostrongylidés (TST) TD (Cooperia sp., Haemonchus sp., Ostertagia sp., Nematodirus sp., Trichostongylus sp., Hyostrongylus sp.) Respi (Dictyocaulus sp., Angiostrongylus sp.) Famille des Strongylidés (ST du TD) Ankylostome (Ancylostoma sp., Uncinaria sp., Bunostomum sp.) Strongle (Trichonema sp., Strongylus sp., Triodontophorus sp., Chabertia sp, Oesophagostomum sp.) Famille des Métastrongylidés (Metastrongylus sp., Muellerius sp.) 48 16

17 Les nématodes: Les Némathelminthes TST/ST digestif Mise en évidence par MM et/ou E Adulte macroscopiquement? Diagnostic jusque genre impossible à partir des oeufs Intérêt coproculture! Hypobiose! (= faux négatif) 49 Œuf standard TST (Ruminant) ou ST (Non Ruminant) Taille : standard (70-90 µm) (=TS) Forme: ellipsoïde Couleur : translucide, incolore Sans ornementation Contenu: blastomère/morula/larve Contant: paroi simple et lisse 50 Chez un cheval? ST! Chez un bovin? TST! 51 17

18 52 Trois exceptions: Grand (2x TS) TST = Nematodirus sp. ( µm), ellipsoïde, bombé, paroi x2 Grand (2x TS) ST = Triodontophorus sp. ( µm), ellipsoïde, paroi fine Paroi «poussièreuse» Metastrongylus sp. (PC) 53 Interprétation quantitative de l OPG par rapport danger infestation: Cas des Bovins (143) Niveaux des coproscopies quantitatives (oeufs par gramme) Faible Moyen Elevé Très élevé Nematodirus Plus de 200 Ostertagia Plus de 500 Autres trichostrongles digestifs Plus de

19 55 Les nématodes: Les Némathelminthes TST/MétaST/ STrespi Mise en évidence L1 par la méthode de Baermann Dictyocaulus sp. (TST) PAS d œuf ds MF! Larve durant E Dictyocaulus sp µm Tête arrondie, pas de bouton céphalique Œsophage simple non rhabditiforme Cellules intestinales avec granulation Extr caudale = pointe mousse Muellerius sp. (MétaST)

20 58 Les nématodes: Les Némathelminthes TST/MétaST/ STrespi Syngamus sp. Trachée oiseaux

21 61 Les nématodes: Les Némathelminthes Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par MM et E Famille des Trichuridés (TST) Trichuris sp. Citron Capillaria sp. Rectangle µm µm 2 bouchons polaires saillants 2 bouchons polaires aplatis Côtés bombés Rouge brique Jamais chez OX ni CV Côtés aplatis Bleu-gris Tous les mammif (surtt OV), très fréquent OX

22 64 65 Les nématodes: Les Némathelminthes Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par flottaison Famille des Trichuridés (TST) Trichinella sp. PAS d œuf, larvipare µm long (6 µm diamètre) 66 22

23 67 Les nématodes: Les Némathelminthes Toxocara canis (CN) cati (CT) Toxocara vitulorum (Veau) Toxascaris leonina (Félin) Parascaris equorum (CV) Ascaris suum (PC) Heterakis sp. (OX) Ascaridia sp. (OX) Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par MM et E Famille des Ascaridés Plus ou moins ronds µm (=TS) Paroi épaisse, irrégulière, alvéolée Contenu coloré (sombre), une cellule 68 Les nématodes: Les Némathelminthes Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par MM et E Famille des Ascaridés Toxocara canis et T. mystax (=T. cati) Œuf brun foncé Paroi finement alvéolée Toxascaris leonina (svt avec T. mystax) Idem mais plus clair et translucide Coque fine et lisse Toxocara vitulorum Animaux au pis 69 23

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26 Les nématodes: Les Némathelminthes Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par MM et E Famille des Ascaridés Parascaris equorum Brun foncé, rond Coque épaisse, alvéolée Ascaris suum Très irrégulier Paroi très alvéolée

27 79 Les nématodes: Les Némathelminthes Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par MM et E Famille des Ascaridés Heterakis sp. (volaille PAS pigeon) Rectangulaire Coque épaisse Contenu foncé Ascaridia sp. (volaille et pigeon) Ellipsoïdal Coque fine Plus clair aux pôles

28 82 Les nématodes: Les Némathelminthes Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par MM et E Famille des Rhabditidés Strongyloides sp. Petit strongle : µm Coque mince

29 85 Les nématodes: Les Némathelminthes Nématode sans bourse caudale: Mise en évidence par MM, E, macroscopiquement (crachat = scotch test plus sensible que copro) Famille des Oxyuridés Oxyuris equi µm (=TS) Ovale, paroi épaisse et lisse 1 bouchon polaire Légèrement asymétrique

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31 91 Les Plathelminthes Trématodes Mise en évidence à l E Fasciola hepatica Ponte irrégulière Grande taille 2xTS Jaune paille Ballon de rugby dégonflé (biconcave) (Operculé) Paramphistomum daubneyi (=Calicophoron daubneyi) Prolifique Idem Fasciola sp. mais translucide (verdâtre)

32 94 Les Plathelminthes Cestodes Mise en évidence par E et macroscopiquement mais attention TRES PEU SPECIFIQUE Taenia sp. Rond µm Coque lisse et épaisse Contient embryon hexacanthe

33 97 Les Plathelminthes Cestodes Mise en évidence par MM, E et macroscopiquement Dipylidium caninum Segment ovigère de 3-4 mm Capsule ovigère de 200 µm Contenant 10 à 20 oeufs

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35 Les Plathelminthes Cestodes Mise en évidence par MM, E Anoplocephala perfoliata (CV) µm Fer à cheval Coque mince lisse, plusieurs couches Contient embryon hexacanthe + pyriform appartus (PI) Moniezia sp. (BV) µm Quadrangulaire Coque épaisse, lisse Contient embryon hexacanthe + PI

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37 Tableau récapitulatif des œufs d endoparasites les plus fréquemment rencontrés Protozoaires Trématodes Cestodes Nématodes Chien et chat Ruminants Isospora sp. Giardia sp. Eimeria sp. Cryptosporium parvum Fasciola hepatica Paramphistomum daubneyi Taenia sp. Dipylidium caninum Moniezia sp. Taenia sp. Toxocara sp.,toxascaris sp. Trichuris sp. Ankylostoma sp.(rég. Chaudes) Uncinaria sp. ( rég. Temp.) Trichostrongylidés Trichuris sp. Capillaria sp. Strongyloïdes sp. Dictyocaulus sp. Equidés Eimeria leuckarti Fasciola hepatica Anoplocephala perfoliata Porc Isospora suis (Fasciola hepatica) Oiseaux Eimeria sp. Giardia sp. Taenia sp. Grands et petits strongles Parascaris equorum Oxyuris equi (Capillaria sp.) (Strongyloïdes westeri) Ascaris suum Strongyloïdes mansomi Trichuris suis, Metastrongylus sp. Oesophagostum sp. ( Raillietina) Heterakis sp./ Ascaridia sp. Clinique de parasitologie ( 2ème Davainea) doctorat Syngamus sp. 109 Capillaria sp. 37