Allergologie moléculaire: ISAC

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1 Séminaire de formation continue Service d immunologie et allergie Allergologie moléculaire: ISAC jeudi

2 Il était une fois

3 Les allergènes utilisés pour le diagnostic et l immunothérapie représentent des mélanges mal définis de composés allergiques et non allergiques Test cutané faussement positif avec un extrait commercialisé de poils de chien contaminé par l acarien des maisons (D. pter.) Van der Veen MJ et al. JACI 98, , 1996

4 Définitions Allergène natif : provient de la source d allergènes qui a été purifiée et dans laquelle les différentes protéines ont été séparées Allergène recombinant : séquence d acides aminés clonés sur des bactéries (Escherichia Coli) ou des levures (Pichia Pastoris) Chapman MD et al. J Allergy Clin Immunol 2000;106: Nowak-Wegrzyn A. Immunol Allergy Clin North Am 2007;27: Pokoj S et al. Protein Expr Purif 2009

5 spécifique à réactivités croisées de stabilités différentes en quantités différentes Les composants moléculaires sont des protéines

6 Composants spécifiques - Indiques une vraie sensibilisation Arachide Ara h 2 Abeille Api m 1 Oeuf Gal d 1 Fléole Phl p 1 Bouleau Bet v 1 Gal d 1 = Gallus domesticus, allergène # 1

7 Familles de Composants PR-10 Protéine Bet v 1 (Bouleau) Pru p 1 (Pêche) Ara h 8 (Arachide) Gly m 4 (Soja) Api g 1.01 (Céleri) Cor a 1 (Noisette) LTPs Pru p 3 (Pêche) Par j 2 (Pariétaire) Cor a 8 (Noisette) Ara h 9 (Arachide) Profilines Bet v 2 (Bouleau) Pru p 4 (Pêche) Phl p 12 (Phléole) Hev b 8 (Latex) Protéines de stockage Ara h 1 (Arachide) Gly m 6(Soja) Tropomyosine Pen a 1 (Crevette) Der p 10 (Acariens)

8 L allergie moléculaire aide à Etablir un profil de sensibilisation Évaluer le risque clinique de réaction Expliquer les symptômes dus aux réactions croisées Identifier correctement les patients candidats à une immunothérapie spécifique

9 Profil de sensibilisation Ara h1: 7S albumine, viciline Ara h2: 2S albumine, conglutine Ara h3: 11S globuline, glycinine Représentés dans bcp de graines et noix peu de réactions croisées Ara h5: profiline Ara h6: homologue à Ara h2, réaction croisée Ara h8: Bet v1 homologue Ara h9: LTP croise avec LTP de pêche Asarnoj, A. et al. Allergy 2010: 65; 1189

10 Réactions croisées Une similarité de structure entre les allergènes d inhalation et les allergènes alimentaires provoque la formation d anticorps à réactions croisées Allergie alimentaire associée au pollen de bouleau (SAO) La protéine PR10 du bouleau à été identifiée comme allergène majeur et présente une similarité de structure avec les PR-10 de nombreux aliments d origine végétale. ( Bet v 1 homologue) Allergène majeur mal d 1 (Pomme) Allergène majeur Bet v 1 (Bouleau) Source: Kopp J, Schwede T (2004). The SWISS-MODEL Repository of annotated three-dimensional protein structure homology models. Nucleic Acids Research 32, D230-D234.

11 Symptômes printaniers (Mars/Avril) Symptômes pré-été (Mai/Juin) Allergène majeur: Bet v1 (t215) Allergènes mineurs: Bet v2, Bet v4 (t221) Allergènes majeurs: Phl p1, Phl p5 (g213) Allergènes mineurs: Phl p7, Phl p12 (g214) Indication à une SIT? Indication à une SIT? Bet v1 : Bet v2, 4: positif négatif Bonne Phl p1, 5b : positif Phl p7, 12: négatif Bonne Bet v1 : Bet v2, 4: positif positif Moyenne Phl p1, 5b : positif Phl p7, 12: positif Moyenne Bet v1 : Bet v2, 4: négatif pos / nég Faible Phl p1, 5b : négatif Phl p7, 12: pos / nég Faible Pas de SIT Tester d autres pollens d arbre p.expl. le frêne nole e1 (t224) Pas de SIT Rechercher d autres sources de sensibilisation Adapté selon P. Schmid-Grendelmeier

12

13 Réalisation de l ISAC

14 Rapport Méthode semi-quantitative Résultats en unités arbitraires ISU Résultats présentés en 4 classes: 0 (non-détectable/très faible) < (faible) < 1 2 (moyen à élevé) 1 - < 15 3 (très élevé) 15

15 Caractéristiques techniques Inter-essais (n=18) Plant Food Moyenne Ecart-Type CV (%) Tree pollen Moyenne Ecart-Type CV (%) nact d rbet v rber e raln g ncor a rcor a nses i nole e nara h npla a nara h ncry j nara h ncup a ngly m ntri a PR-10 protein Moyenne Ecart-Type CV (%) CCD Moyenne Ecart-Type CV (%) rmal d nana c rpru p Tropomyosin rgly m rpen a rara h npen i rapi g npen m LTP rdep p npru p nbla g nart v rani s Profilin Serum albumin rbet v nbos d nole e nfel d rhev b ncan f rmer a rphl p

16 Caractérisitiques techniques ImmunoCAP Echelle macroscopique (μg allergène/cap) CV < 15% Résultat fourni par méthode quantitative Méthode automatisée 40 μl de sérum / test + 150μL volume mort! Haute capacité totale de fixation Peu de fixation non-spécifique Haute sensibilité => de très faibles quantités d IgE peuvent être identifiées. 1 test, 1 résultat pour 1 composé ISAC Echelle microscopique (100 picog. allergène/spot et >100 allergène/cm2) CV < 25% au-delà de 1 ISU Résultat semi-quantitatif Méthode manuelle 30μL de sérum = >112 résultats Haute capacité totale de fixation Peu de fixation non-spécifique Bonne sensibilité Haute spécificité Fournit le profil de sensibilisation du patient

17 Comparaison Cap vs ISAC Méthode : Comparaison de résultats d IgEs pour composants allergéniques (ImmunoCAP versus ISAC). Sélection de 86 séra de patients (26M/60F) 555 déterminations d IgE sp dosés par UniCAP (recombinant) avec ISAC. Résultats: 302/384 résultats positifs (>0,10kUA/L) en UniCAP étaient également positifs en ISAC (concordance 78,7%),» Si cut-off de 0,35 kua/l, concordance 92,2%. 160/171 negative results were also found negative with ISAC (concordance 93,6%), 11 discrepant results : mean 1,57 ISU. Manque de sensibilité en ISAC pour certains allergènes en particulier (rasp f 1, rpru p 3, nana c 2, rapi g 1 ) Gadisseur R. et al Clin. Chem. Lab. Med. 2011,49(2)

18

19 Allergie au lait Groupe 1 (n= 17) CMPA+ Groupe 2 (n=20) Tolerant, OTC Groupe ctrl (n=4) Atopique CPMA- Sensibilité ISAC 100% / CAP 100% Spécificité ISAC 90.2% / CAP 37.5% Sokolova, A. et al. (2009) Rev Port Imunoalergologia 17(4):325-42

20 ISAC pour quel patient? Patient «problématique» Patient polysensibilisé Anamnèse et symptômes pas clairs Anaphylaxie idiopathique Pas de réponse au traitement SPT difficile Nombreux résultats ImmunoCAP Recherche de sensibilisations principales versus de réactions croisées Evaluation du risque

21 Take home message Les extraits allergéniques disponibles pour le diagnostic in-vitro des allergies sont préparés à partir de matériel biologique Ils contiennent des protéines allergéniques et non-allergéniques Leur contenu en allergène majeur/mineur n est pas toujours bien standardisé... >130 allergènes naturels purifiés ou recombinants sont disponibles pour le diagnostic des allergies. Dosages unitaires traditionnels Multiplex Les composants allergéniques, nombreuses utilités ITS, décrire les réactions croisées, prédire la sévérité des allergies... Le test ISAC est moins sensible que le test UniCAP ISAC : Utile en pédiatrie

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