objectifs Interprétation des résultats d analyses biologiques 1. les facteurs de la variabilité analytique interprétation des résultats d analyse

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1 objectifs 1 1/ connaître les facteurs susceptibles la qualité d un prélèvement biologique, en comprendre et savoir sélectionner les conditions pré-analytiques convenables pour les examens biologiques de routine / connaître les définitions de spécificité analytique, (im)précision et (in)exactitude et savoir les limites qu elles apportent à l interprétation d un résultat d analyse Interprétation des résultats d analyses biologiques 1. les facteurs de la variabilité analytique prérequis interprétation des résultats d analyse 3 4 1/ distribution gaussienne, moyenne, écart-type, médiane, pourcentages de valeurs dans les intervalle moyenne ± 1, ou 3 écarts-types Résultats Interprétation médicale 1

2 interprétation des résultats d analyse étapes de la phase analytique 5 6 Interprétation Résultats Facteurs de variation liés à l analyse Résultats Facteurs de variation liés à l animal Post Interprétation médicale étapes de la phase analytique étapes de la phase analytique 7 8 Collecte & traitement des spécimens (échantillons biologiques) Interprétation Résultats Collecte & traitement des spécimens (échantillons biologiques) Interprétation Résultats Instrumentale Post Pré Instrumentale Post

3 importance de la phase pré-/pré-analytique facteurs de la variabilité pré-analytique 9 1 Collecte & traitement des spécimens (échantillons biologiques) Collecte & traitement des spécimens (échantillons biologiques) animal Approximativement 8% des erreurs analytiques en biologie médicale humaine?? En biologie médicale vétérinaire spécimen Pré Pré avant de prélever : réfléchir au choix des matériels avant de prélever : réfléchir au choix des matériels 11 1 Chat Clinique Chat Clinique choix des analytes petits tubes choix des analytes Protéines totales ALAT NF Temps de coagulation Protéines totales ALAT NF Temps de coagulation 3

4 avant de prélever : réfléchir au choix des matériels anticoagulants Chat Clinique rouge sec (en gnl siliconé) petits tubes choix des analytes jaune sec + gel (accélérateur/sep.) vert héparinate Li ou Na bleu clair citrate Li-héparine or tube sec Li-héparine or tube sec EDTA Citrate Protéines totales ALAT NF Temps de coagulation violet gris citron EDTA fluorure ACD (acide citrique, glucose) différences entre sérum & plasma remplissage correct des tubes 15 Biochimie de routine : peu ou pas de différence entre sérum & plasma héparine Quelques analyses ne peuvent pas être faites dans - Sérum : stabilité analytes (quelques protéines et peptides) - Plasma : interférence de l héparine (acides biliaires) coagulation «fuite» de constituants cellulaires vers le plasma ex. enzymes (LDH, MDH, CK) K + chez homme/cheval/porc pas chez chien/chat 16 rapport anticoagulant/sang coagulation - chien adéquat citrate 3,8 % temps (s) PT APTT *,5+4,5 citrate + sang (ml) 4

5 remplissage correct des tubes traitement du spécimen 17 rapport anticoagulant/sang coagulation - chien inadéquat vs adéquat citrate 3,8 % temps (s) ,5 * + 3,5 *,5+4,5 + 5,5 citrate + sang (ml) 18 immédiat vs. retardé centrifugé vs. non centrifugé température ambiante vs. réfrigération vs. congelé/décongelé question = stabilité des analytes traitement du spécimen délai avant analyse : glucose sang total 19 immédiat vs. retardé centrifugé vs. non centrifugé température ambiante vs. réfrigération vs. congelé/décongelé question = stabilité des analytes Instables : cellules (sang & urine), cylindres, cristaux de qqes heures à jours à température ambiante ± détruits ou altérés par réfrigération ou congélation Stables : la plupart des analytes chimiques dans plasma/sérum ~ qqs heures à température ambiante ~ qqs jours à +4 C & ~ qqs mois à - C Sg-glucose (g/l) 1,1 1,,9,8,7,6,5 Plasma diminution : approx 7 % /h, temps (h) 5

6 délai avant analyse : glucose sang total délai avant analyse protéines & peptides 1 1,1 1, Plasma! Éviter la protéolyse in vitro Sg-glucose (g/l),9,8,7,6,5 diminution : approx 7 % /h, temps (h) Glycolyse dans les cellules sanguines Analyse immédiate Fluorure/iodioacétamide Centrifuger/Séparer Parfois inutile pour les protéines Ex. trypsinogène (TLI) Parfois indispensable (petites protéines & peptides) : Inhibiteurs de protéases (svt aprotinine) + anticoagulant, svt EDTA + congélation, parfois -8 C + transport dans la glace carbonique facteurs de la variabilité pré-analytique effets des repas 3 4 Collecte & traitement des spécimens (échantillons biologiques) Pré animal spécimen Surtout chez les carnivores : modifications post-prandiales - Absorption des produits de la digestion P-Glucose P-Triglycérides - Effets des sécrétions digestives P-TLI (Trypsinogène) S-Acides biliaires P-Bicarbonates - Catabolisme P-Ammonium P-Urée 6

7 effets d un repas chez le chien effets des médicaments 5 6 Variations (%) P-Urée P-Créatinine P-Protéines Perxachs, très étudiés en biologie médicale humaine (cf. D Young) moins étudiés chez les animaux Temps (heures après repas) Deux types différents : - Interférence avec l analyse - Interférence avec la biologie du sujet effets des médicaments stress 7 très étudiés en biologie médicale humaine (cf. D Young) Labrador 8 ans, traitée par Br - pour épilepsie Ionogramme par potentiométrie Vébiotel, 6 8 chats adultes en bonne santé Rand moins étudiés chez les animaux Deux types différents : - Interférence avec l analyse - Interférence avec la biologie du sujet Na K HCO 3 Cl mmol/l Br - = 16 mg/l =.3 mmol/l P-Glucose (g/l) 1,5 1,5 avant après P-Lactates (mg/l) avant après 7

8 stress stress 9 3 chats adultes en bonne santé Rand chats adultes en bonne santé Rand P-Glucose (g/l) 1,5 1,5 P-Lactates (mg/l) P-Glucose (g/l) 1,5 1,5 Pfs jusqu à 5 g/l P-Lactates (mg/l) avant après avant après avant après avant après Identification du spécimen facteurs de la variabilité 31 3 Étape essentielle : éviter confusion possible Idéal : Étiquette(s) identique(s) sur tube(s) et feuille de demande Laboratoires généraux Grosses plateformes d analyses multiples automatisées Cliniques vétérinaires Systèmes manuels ou automatisés ponctuels Petits matériels (autocontrôle diabétiques) 8

9 caractéristiques des techniques d analyse spécificité analytique sont essentielles à documenter Spécificité analytique Précision Exactitude Analyse qui mesure un analyte et un seul dans un milieu complexe Sg-Plaquettes : PLT seulement sans interférence de petits GR P-Créatinine : Créatinine seulement sans effet de glucose, hémoglobine, etc. possible par technique enzymatique P-Insuline : Insuline seule parmi toutes les protéines et peptides principales causes d interférences analytiques imprécision Médicaments : cf. supra Couleurs des plasmas un plasma de chien (supposé stable) même analyse de P-Créatinine n fois de suite ou n jours de suite - Lipémie - Ictère série de valeurs ± différentes dispersion des valeurs = imprécision - Hémolyse 9

10 imprécision : quantification imprécision : utilisation pratique 37 un plasma de chien (supposé stable) même analyse de P-Créatinine n fois de suite ou n jours de suite série de valeurs ± différentes SD moyenne 38 CV donnés par fabricants Analyses de biologie de routine : ou laboratoires mesure unique CV = 4%? P-Créatinine = 1 µmol/l dispersion des valeurs = imprécision distribution gaussienne, largeur caractérisée par écart-type = SD coefficient de variation CV = SD/moyenne imprécision : utilisation pratique imprécision : utilisation pratique 39 CV donnés par fabricants Analyses de biologie de routine : ou laboratoires mesure unique 4 CV donnés par fabricants Analyses de biologie de routine : ou laboratoires mesure unique CV = 4%? P-Créatinine = 1 µmol/l CV = 4%? P-Créatinine = 1 µmol/l dans une distribution gausssienne 95% des valeurs dans [m - SD;m + SD] estimation de la moyenne sur un seul point m distribution gausssienne 95% des valeurs dans [m - SD;m + SD] CV = SD/m.4 = SD/1 SD = 4 µmol/l estimation de la moyenne sur un seul point m 1

11 imprécision : utilisation pratique imprécision : utilisation pratique 41 CV donnés par fabricants Analyses de biologie de routine : ou laboratoires mesure unique CV = 4%? P-Créatinine = 1 µmol/l distribution gausssienne 95% des valeurs dans [m - SD;m + SD] CV = SD/m.4 = SD/1 SD = 4 µmol/l estimation de la moyenne sur un seul point m résultat P-Créatinine = 1 µmol/l a 95% de chances d être dans intervalle [9;18] µmol/l 4 Dans la routine 1/ retenir que tout résultat situé dans un nuage d incertitude d autant plus large que imprécision est grande / pour simplifier estimer grossièrement CV minéraux et substrats ~ 5 % enzymes et hormones ~ 1 % donc incertitude minéraux et substrats ~ valeur mesurée ± 1 % enzymes et hormones ~ valeur mesurée ± % 3/ interprétation médicale de différences dans ces zones aléatoire inexactitude ou biais inexactitude ou biais : évaluation 43 une solution de contrôle de Créatinine de concentration = 1 µmol/l (11,3 mg/l) - analyse dans ma clinique ou laboratoire référent donne-t-elle 1? - sinon, - quel est l écart? - quelles sont les conséquences possibles d un écart? 44 une solution de contrôle de Créatinine de concentration = 1 µmol/l (11,3 mg/l) - analyse dans ma clinique ou laboratoire référent donne-t-elle 1? - sinon, - quel est l écart? - quelles sont les conséquences possibles d un écart? plusieurs mesures dans ma clinique ou avec mon laboratoire plusieurs mesures pour atténuer l imprécision valeurs mesurées Cible 1 µmol/l 11

12 inexactitude ou biais : évaluation inexactitude : importance pratique 45 une solution de contrôle de Créatinine de concentration = 1 µmol/l (11,3 mg/l) - analyse dans ma clinique ou laboratoire référent donne-t-elle 1? - sinon, - quel est l écart? - quelles sont les conséquences possibles d un écart? plusieurs mesures dans ma clinique ou avec mon laboratoire plusieurs mesures pour atténuer l imprécision 46 Même analyse par Possibilité de laboratoires différents résultats et techniques différentes différents? inexactitude valeurs mesurées Cible 1 µmol/l inexactitude : importance pratique nécessité d un contrôle de qualité Même analyse par Possibilité de laboratoires différents résultats et techniques différentes différents? Comparaisons aléatoires avec autres laboratoires ou cliniques vétérinaires littérature (par exemple seuils de décision) Moyen de s assurer a posteriori de la qualité des analyses effectuées Vise la précision par la répétition des mesures l exactitude par l utilisation de solutions de concentration connue + 3SD + SD + 1SD m - 1SD - SD - 3SD diagramme de Levey-Jennings pour chaque analyte jours 1

13 précision vs. exactitude facteurs de la variabilité post Précis Exact optimum Précis Inexact erreurs de transcription de résultats erreurs d archivage absence de traçabilité des anomalies de prélèvements/mesures. Imprécis Exact Imprécis Inexact ingérable variabilité analytique : conclusion 51 Limiter/connaître la variabilité analytique Apprécier le degré de confiance dans le résultat Pouvoir faire une interprétation médicale raisonnée 13

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