Laboratoire Expert BVD - DS2 - Travaux en cours et Perspectives

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Corentin Goudreau
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1 Laboratoire Expert BVD - DS2 - Travaux en cours et Perspectives Journée technique sur la référence professionnelle (Dangers sanitaires de catégorie 2 et 3) Aurore TEILLET 1

2 Sommaire I. Faits marquants de l année 2015 II. III. Echantillothèque : typage des IPI Etude comparative des kits ELISA Anticorps BVD Résultats obtenus avec 4 élevages Protocoles court et long : impact sur le statut de l animal IV. Matrice Lait : détectabilité des IPI V. Matrice sang total : étude de conservation VI. Perspectives 2

3 Faits marquants de l année 2015 Depuis le début de l année 2015 : Complétion +++ de l échantillothèque : mobilisation des GDS / logistique matériel de prélèvements par LE-BVD Caractérisation avec tous les outils disponibles (en cours) Octobre 2015 : Organisation d un essai interlaboratoire d aptitude en ELISA Ac sur les matrices Sérum (74 participants) et Lait (20 participants) (en cours) Validation de 2 nouveaux outils PCR sur Biopsie auriculaire (méthodes autorisées consultables sur Comités de pilotage GDS France : Définition et suivi du programme de travail Formalisation d une collaboration avec l ISAE 35 Exemples : Test de méthode d extraction automatique / contrôle de réactifs Mise au point d un test de typage 3

4 Echantillothèque : typage des IPI IPI < 6 mois IPI > 6 mois Sous Type 1b 1d 1e Non typé Total IPI < 6mois IPI > 6mois

5 Etude comparative des kits ELISA Anticorps BVD (1/4) Résultats ELISA Ac pour 4 élevages (exprimés en % de positifs) Kit A B C D E F G A03 (n=26) A04 (n=30) A07 (n=23) A05 (n=25) Kit Ac P80 Kit Ac totaux Séroconversion totale Cheptels ayant connu ou étant en séroconversion Absence de séroconversion Profil sérologique différent (A07) entre un kit Ac totaux (G) et kits Ac P80 (détection plus précoce de certains anticorps p80?) Variation du pourcentage de séropositifs détectés selon le kit utilisé Différence de sensibilité analytique (détectabilité)? 5

6 Etude comparative des kits ELISA Anticorps BVD (2/4) Etude sur la sensibilité analytique (détectabilité) des kits 1/1024 1/512 Variation importante de la sensibilité analytique entre les kits (1/32 au 1/1024) 1/256 1/128 1/64 1/32 1/16 1/8 1/4 1/2 Détection d un nombre plus important de séropositifs = Différence d évaluation de la séroprévalence Quel Impact sur la spécificité? Quel impact sur les mélanges? pur A B C D E F G 6

7 Etude comparative des kits ELISA Anticorps BVD (3/4) Kit B (compétitif) A 04 A 07 POS Seuil du kit Kit D (indirect) POS Protocole : Court Long Quel impact sur le statut de l animal? Nécessité de disposer d un plus grand nombre d échantillons pour conclure sur l intérêt d un choix entre protocole court ou protocole long 7

8 Etude comparative des kits ELISA Anticorps BVD (4/4) Etude sur la sensibilité analytique (détectabilité) des kits 1/1024 1/512 1/256 1/128 1/64 1/32 1/16 1/8 1/4 1/2 pur A court A long B court B long C court D court D long E court E long F long G court G long 8

9 Evaluation Matrice de la lait répétabilité : détectabilité sur des Lait IPI en PCR Objectif : Détection la plus efficace possible des IPI dans le lait de tank Etude de la détection par dilution d IPI dans du lait de tank et évaluation de la taille du mélange. Chronologie de l étude en cours : 1- Caractérisation des échantillons de laits avec l ensemble des kits disponibles en ELISA et en PCR 2- Evaluation de l homogénéité/répétabilité des résultats Nécessité de traitement préalable du lait : exemple : étape de lavage des leucocytes en PCR Tests sur différents protocoles d extraction en PCR avec différents volumes de prise d essai 3- Etude de détectabilité/loi dose effet à partir d IPI. Détermination du NED 9

10 ST 3: Matrice Etude de sang la total conservation : étude de conservation du sang total Problématique : Pouvoir disposer d un traceur sang total à destination des laboratoires d analyses Pouvoir disposer d échantillons caractérisés de sang total pour les EILA Etude préliminaire sur un IPI : Sang total + 4 C - 20 C - 80 C Après 18 mois de conservation: résultats identiques en PCR et en ELISA Antigène Etude complémentaire : sélection d IPI en conditions de prélèvement terrain, de différents niveaux de positivité et d échantillons négatifs Mode opératoire identique 10

11 Perspectives Compléter l échantillothèque : sollicitation des GDS et des Laboratoires Identification d une circulation virale Cheptel laitier : correspondance sérologie Lait de tank / prévalence des séropositifs Cheptel allaitant : sérologie sur animaux sentinelles - Etude de faisabilité des mélanges de sérums en ELISA Ac - Préparation d un sérum anticorps au NED pour l ELISA sur sérum individuel Identification des IPI Poursuite des travaux sur la détectabilité d un IPI dans un lait de tank Détection d un IPI dans un mélange de sérum ou de sang total (taille du mélange) Préparation d un ARN dosé nécessaire à la mise au point des réactifs (dossier de validation producteurs de réactifs) 11

12 Merci de votre attention 12

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