Streptocoques GELOSE COLUMBIA AU SANG FRAIS + A.N.C. Milieu d isolement sélectif enrichi, adapté aux exigences des Streptocoques.

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1 GELOSE COLUMBIA AU SANG FRAIS + A.N.C Milieu d isolement sélectif enrichi, adapté aux exigences des Streptocoques. COMPOSITION : (pour 1L) Peptone Hydrolysat de protéines Amidon de maïs Chlorure de sodium Sang frais de mouton Acide nalidixique et colimycine (A.N.C) Agar LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Colonie entourée d un halo d éclaircissement total à bord net La bactérie à dégradée, entièrement, de l hémoglobine Hémolyse β Colonie entourée d un halo d éclaircissement partiel verdâtre à bord flou La bactérie à dégradée, partiellement, de l hémoglobine Hémolyse α Couleur rouge inchangé autour des colonies La bactérie n a pas dégradée de l hémoglobine Hémolyse γ INTERET : Le mélange A.N.C inhibe la plupart des bactéries Gram et certains Gram + (Bacillus).

2 GELOSE BILE ESCULINE AZIDE (BEA) Milieu d isolement sélectif des Streptococcus D et Entérococcus. COMPOSITION : (pour 1L) Peptone Extrait de levure Bile de bœuf Chlorure de sodium Citrate de sodium Esculine Citrate de fer Azide de sodium Agar LECTURE : Présence ou absence de culture (colonies) Présence : présomption des bactéries du genre Streptococcus appartenant au groupe D et les bactéries du genre Entérococcus (uniquement présomption car les milieux ne sont pas sélectifs à 100%). Absence : les bactéries étudiées ne sont pas des bactéries du genre Streptococcus appartenant au groupe D et les bactéries du genre Entérococcus. Couleur des colonies Observation Interprétation Conclusion Colonies entourées d un Hydrolyse de l esculine Esculinase + halo noir par les bactéries. Absence de halo noir Les bactéries ne sont pas capables d hydrolyser l esculine Esculinase -

3 TEST DE LYSE PAR LA BILE : IDENTIFICATION DES PNEUMOCOQUES Streptococcus pneumoniae (pneumocoque) est le seul Streptocoque à être lysé par la bile ou les sels biliaires (test de Neufeld). Réalisation du test En milieu solide : Déposer sur les colonies à tester, obtenues sur gélose au sang + sels biliaires à 10%. Placer la boîte à 37 C pendant 30min. S il s agit d un Pneumocoque, les colonies disparaissent. Seul le halo d hémolyse reste visible. En milieu liquide : Faire une suspension forte du germe à tester en bouillon Todd Hewitt. La partager dans 2 tubes à hémolyse. Dans un des tubes, ajouter 2 à 3 gouttes de sels biliaires. L autre tube sert de témoin. Mettre les tubes à 37 C pendant 30min. S il s agit du Pneumocoque, on note un éclaircissement de la suspension additionnée de sels biliaires, l autre tube reste trouble. Coques gram +, ovalaires, groupés par 2, catalase, α hémolytiques, sensibles à l optochine, lysés par la bile Forte suspicion de STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE

4 RECHERCHE DE LA SENSIBILITE A LA BACITRACINE ET A TECHNIQUE : L OPTOCHINE Etaler un inoculum abondant de la souche à étudier, en effectuant des stries serrées. Puis déposer sur les premières stries, un disque imprégné d antibiotique. Incuber à 37 C. Après 24h, observer la présence ou l absence de culture autour du disque. LECTURE ET INTERPRETATION : Culture Zone d inhibition Diamètre critique Disque imprégné d ATB Diamètre d inhibition 12mm La souche est sensible à l ATB testé Culture Zone d inhibition Diamètre critique Disque imprégné d ATB Diamètre d inhibition < 12mm La souche est résistance à l ATB testé CONCLUSION : Sensibilité à la Bacitracine : Si la souche étudiée est un coque gram +, catalase -, β-hémolytique, sensible à la Bacitracine, alors c est un Streptocoque du groupe A. On s oriente vers l espèce Streptococcus pyogenes. Sensibilité à l Optochine : Si la souche étudiée est un coque gram + capsulé, catalase -, α-hémolytique, sensible à l Optochine, alors on suspecte fortement l espèce Streptococcus pneumoniae.

5 GROUPAGE DES STREPTOCOQUES TECHNIQUE : Deux méthodes sont possibles Méthode chimique 2 gouttes nitrite de sodium 2 gouttes acide acétique Méthode enzymatique Culture pure sur gélose au sang du Streptocoque Suspension épaisse Suspension légère dans dans 1mL de bouillon 0,5mL de solution Todd Hewitt enzymatique (pronase) 1h à 20 C 15min à 37 C Le surnageant constitue l extrait antigénique REACTION ANTIGENIQUE : Bien agiter les suspensions de latex (Ac) Mettre 1 goutte de chaque suspension sur lame Déposer 1 goutte d extrait (Ag) sur chaque goutte de suspensions Agiter L agglutination doit apparaître en moins de 2min. REMARQUE : Le groupage est surtout intéressant pour les groupes A, B, C, F et G. Le groupe D ne donne pas toujours des résultats interprétables. Streptococcus pneumoniae n est pas concerné par ce groupage

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