Validation de méthodes en microbiologie
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- Léonie Nadine Boutin
- il y a 7 ans
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1 Validation de méthodes en microbiologie
2 Définition Validation requise pour méthodes en usage Validation requise pour nouvelles méthodes Contrôle et Assurance qualité Incertitude de mesure Évaluation du nouveau personnel technique
3 Définitions
4 LIMITE DE DÉTECTION D UNE MÉTHODE (LDM) Concentration minimale décelée, à l aide d une méthode d analyse, avec une fiabilité définie. Théoriquement : un organisme cible dans le volume d échantillon analysé.
5 DÉTERMINATION DE LA LDM Concentration indiquée dans la littérature; Évaluation par le laboratoire du plus petit nombre d organismes qui peuvent être récupérés dans un volume d échantillon donné.
6 LIMITES DE QUANTIFICATION D UNE MÉTHODE (LQM) Concentration la plus basse et la plus élevée avec un dénombrement fiable de colonies isolées. Pour un volume donné d échantillon et sur une seule membrane ou gélose. La zone quantifiable d une méthode avec une fiabilité définie.
7 La limite supérieure de quantification est la valeur au-delà de laquelle la fiabilité d un dénombrement est affectée par des facteurs incontrôlables La limite inférieure de quantification est la valeur en deçà de laquelle l erreur anticipée devient trop grande par rapport au nombre de colonies dénombrées. Les limites de quantification sont généralement définies dans les méthodes de référence.
8 FIDÉLITÉ L étroitesse de l accord entre les résultats obtenus en appliquant le procédé expérimental à plusieurs reprises (n = 10 replica) dans des conditions déterminées. Selon les conditions d exécution de l essai, cette caractéristique s exprime sous forme de : réplicabilité répétabilité reproductibilité
9 Réplicabilité : Étroitesse de l accord entre les résultats individuels successifs obtenus sur le même échantillon soumis à l essai dans le même laboratoire et dans les mêmes conditions : Même analyste, mêmes entonnoirs (filtration), même lot de milieu de culture et membrane filtrante, même incubateur, même temps d analyse.
10 Répétabilité : Étroitesse de l accord entre les résultats individuels successifs obtenus sur le même échantillon soumis à l essai dans le même laboratoire et dont au moins l un des éléments suivants est différent : L analyste, le lot de milieu de culture, incubateur, etc. Habituellement, l élément différent est l analyste.
11 Reproductibilité : Étroitesse de l accord entre les résultats individuels successifs obtenus sur le même échantillon soumis à l essai dans des laboratoires différents et dans les conditions suivantes : Analyste différent, appareil différent, même jour. Cette donnée n est disponible que si le laboratoire participe à un essai inter laboratoire pour une méthode identique et un même échantillon
12 En pratique, la réplicabilité, la répétabilité et la reproductibilité sont déterminées dans la zone quantifiable de la méthode.
13 POURCENTAGE DE RÉCUPÉRATION Le pourcentage de récupération permet d identifier, pour un échantillon donné ou un type de matrice donné et à un niveau de concentration donné, la présence d interférence potentielle lors du processus d analyse. La différence (en pourcentage) entre la concentration mesurée d un échantillon fortifié et la concentration mesurée du même échantillon non fortifié, divisée par la concentration de la substance ajoutée
14 SPÉCIFITÉ La capacité d une méthode à récupérer l organisme désiré à l aide de caractéristiques différentielles ou sélectives et vérifiée par des tests additionnels. L index de spécificité est défini à l aide de deux facteurs : l erreur due aux colonies de faux positifs l erreur due aux organismes recherchés, atypiques et non décelés La spécificité est meilleure lorsque ces deux termes se rapprochent de zéro.
15 SÉLECTIVITÉ La caractéristique qui favorise la croissance de l organisme désiré tout en retardant la croissance d autres organismes n offrant pas d intérêt. L index est calculé à l aide du rapport du nombre de colonies typiques, sur le nombre total de colonies bien isolées sur les milieux de culture pendant l analyse. La sélectivité est meilleure lorsque l index se rapproche de l unité.
16 Validation requise pour méthodes en usage
17 Documenter et comparer les éléments suivants aux données publiées dans la littérature (CEAEQ, EPA, etc.) : la répétabilité; la réplicabilité de chaque analyste la spécificité et la sélectivité : confirmations biochimiques. (exigences du point 4.3 du SCA-02) Vérification annuelle des données de validation. Actualisation des données si des changements importants au niveau des équipements ou analystes.
18 Validation requise pour nouvelles méthodes Nouvelle demande ou élargissement
19 Évaluation de la nouvelle méthode : Minimum de 20 échantillons positifs différents ou plus, selon les matrices qui seront analysées; la répétabilité; la réplicabilité; la spécificité et la sélectivité; le pourcentage de récupération à partir d échantillons naturels qui pourront être ensemencés avec l organisme cible; la performance de la méthode à l aide d échantillons d essai d aptitude similaires.
20 Validation requise pour changement de méthodes Paramètre accrédités
21 Comparaison de la performance de la nouvelle méthode : Minimum de 20 échantillons positifs différents ou plus, selon les matrices qui seront analysées (analyses statistiques F-test et t-test); la répétabilité; la réplicabilité; la spécificité et la sélectivité; le pourcentage de récupération à partir d échantillons naturels qui pourront être ensemencés avec l organisme cible; la performance de la méthode à l aide d échantillons d essai d aptitude similaires.
22 Assurance et contrôle de la qualité Incertitude
23 Mensuellement (ou moins selon la fréquence d analyse d une méthode): L analyse de duplicata, qui pourront être des échantillons naturels ensemencés avec l organisme cible; Chaque technicienne pour chacune des méthodes; Inclure la réalisation de dilutions; Des critères d acceptabilité devront être établis.
24 Trimestriellement (ou moins selon la fréquence d analyse d une méthode): Duplicata analysés par des techniciennes différentes, et ce, pour des matrices naturellement contaminées pour chacune des méthodes; Des critères d acceptabilité devront être établis. Ces données serviront à établir l incertitude de mesure de la méthode.
25 Évaluation de la compétence des analystes
26 La compétence de l analyste devra être vérifiée avant de l autoriser à réaliser une méthode donnée : Évaluation est faite à l aide d essai de réplicabilité effectué sur des échantillons synthétiques ou naturels contaminés. Des critères d acceptabilité devront être établis pour chacune des méthodes. Annuellement, suivi de la compétence à l aide des résultats obtenus lors des analyses de duplicata en cours d année.
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