Aspects cytologiques et immunologiques des LGL
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- Brigitte Durand
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1 Aspects cytologiques et immunologiques des LGL Journée Théma:que GFHC-AFC 03 Février 2016 M Roussel, Laboratoire Hématologie, Rennes
2 Aspects cytologiques et immunologiques des LGL MCL, CLL, HCL, SLVL, LAL Leucémie/Lymphome Aspects cytologiques et immunologiques des LGLL
3 Quelques clarifica:ons LGL : Large Granular Lymphocyte T-LGL/NK-LGL Cytologique Immunologique WHO 2008 Expansion LGL réac:onnelle Leucémie T-LGL SLPC à cellules NK Leucémie aggressive à cellules NK Phase leucémique -de lymphome extranodal NK/T nasal -de lymphome Tγδ hépato-splénique Nosologique
4 LGL : Large Granular Lymphocyte T-LGL/NK-LGL Expansion LGL réac:onnelle Leucémie T-LGL SLPC à cellules NK Leucémie aggressive à cellules NK Phase leucémique -de lymphome extranodal NK/T nasal -de lymphome γδ hépato-splénique
5 Les grands lymphocytes à grains : Morphologie Défini:on morphologique Nb: 0.25x10 9 /L, 10 à 15% des PBMC Taille : grands : υm Forme : arrondie ou ovalaire Noyau : excentré Chroma:ne : mature Cytoplasme : abondant, hyalin à basophile Grains : azurophiles -perforine -granzyme *sérine protéases, *ac:va:on de caspase et induc:on apoptose (bcl-2) Mécanisme d ac:on : -Ac:vité cytotoxique (granzyme) -Récepteurs de mort Fas et Trail
6 Les grands lymphocytes à grains : Morphologie
7 LGL : Large Granular Lymphocyte T-LGL/NK-LGL Expansion LGL réac:onnelle Leucémie T-LGL SLPC à cellules NK Leucémie aggressive à cellules NK Phase leucémique -de lymphome extranodal NK/T nasal -de lymphome γδ hépato-splénique
8 Les grands lymphocytes à grains: Phénotype immunité innée an:-tumorale et an:-infec:euse réponse rapide LGL-T cytotoxique 80% CD3 pos CD8 pos TCRαβ CD16/CD56 +/- LGL-T TCRγδ 5% CD3 pos CD8 pos TCRγδ CD16/CD56 +/- CD56 low CD16 pos Cytotoxique LGL-NK 15% scd3 neg CD2 pos CD7 pos CD56 bright CD16 neg/dim Producteur IFNg KIR : Killer cell Ig-like Receptor ITIM : interac:on avec HLA CD158a, CD158b ITAM : reconnaissent an:gènes de stress CD161, CD94 Ac:vateurs/Inhibiteurs -CD3 / CD5 / CD4 / CD8 TCRαβ/TCRγδ CD16/CD56 -Répertoire KIR
9 Les grands lymphocytes à grains: Phénotype CD3 / CD5 / CD4 / CD8 TCRαβ/TCRγδ CD56lowCD16pos Cytotoxique CD16/CD56 CD56brightCD16neg/dim Producteur IFNg
10 Les grands lymphocytes à grains: Phénotype Vbeta en CMF 24 an:corps, 70% des réarrangements 8FITC, 8PE, 8FITC-PE Avantages Sensible Analyse de sous-popula:ons Inconvénients Cout >120 /pa:ent interpréta:on clonalité vs malignité
11 LGL : Large Granular Lymphocyte T-LGL/NK-LGL Expansion LGL réac:onnelle Leucémie T-LGL SLPC à cellules NK Leucémie aggressive à cellules NK Phase leucémique -de lymphome extranodal NK/T nasal -de lymphome γδ hépato-splénique
12 Expansion LGL réac:onnelle Transitoire, modéré post viral (CMV, EBV) Cancer Maladie auto-immune
13 Expansion LGL réac:onnelle, si CMF réalisée Gain/perte de marqueurs Modula:on/Aberra:on Trou phénotypique Proposi:on de panel : CD3 / CD4 / CD8 +/- CD5 / CD2 Répar::on : T4/T8 T/NK Perte de CD5?
14 Expansion LGL réac:onnelle, si CMF réalisée Vbeta polyclonal
15 Expansion LGL réac:onnelle, si CMF réalisée Vbeta oligocloanel
16 LGL : Large Granular Lymphocyte T-LGL/NK-LGL Expansion LGL réac:onnelle Leucémie T-LGL SLPC à cellules NK Leucémie aggressive à cellules NK Phase leucémique -de lymphome extranodal NK/T nasal -de lymphome γδ hépato-splénique
17 Leucémie T-LGL -Persistance >6 mois -Présence de LGL >2x10 9 /L (WHO) >0.5 voire 0.4x10 9 /L, si syndrome clinique : auto-immune, splénomégalie, cytopénie pas de spécificité morphologique -Sans contexte clinique (viroses) -2-3% des hémopathies matures -Sex-Ra:o 1: ans -Phénotype : T effecteur terminal CD3/CD8/CD45RA/CD57/CD62L- -TCRγ réarrangé en biologie moléculaire -muta:on de STAT % -muta:on de STAT5 <5%
18 Leucémie T-LGL Bareau et al, Haematologica, 2010
19 Leucémie T-LGL LGL= 2.1x109/L
20 Leucémie T-LGL LGL= 2.1x109/L
21 Leucémie T-LGL CD3 LGL= 1x109/L
22 Leucémie T-LGL Vbeta défec:f LGL= 1x109/L =Biologie moléculaire
23 Leucémie T-LGL TCR gamma delta (10% des cas) LGL= 1.1x109/L =Biologie moléculaire TCRgamma +
24 LGL : Large Granular Lymphocyte T-LGL/NK-LGL Expansion LGL réac:onnelle Leucémie T-LGL SLPC à cellules NK Leucémie aggressive à cellules NK Phase leucémique -de lymphome extranodal NK/T nasal -de lymphome γδ hépato-splénique
25 SLPC à cellules NK (en:té provisoire) -Persistance >6 mois -LGL >2x109/L (WHO) >0.5 voir 0.4x109/L, si syndrome clinique : auto-immune, splénomegalie, cytopénie pas de spécificité morphologique -sans contexte clinique (viroses) -rare -Sex-Ra:o H/F : 60/40-60 ans -muta:on de STAT % des cas -muta:on de STAT5 <5%
26 SLPC à cellules NK (en:té provisoire) Poullot et al, Ann Oncol, 2014
27 SLPC à cellules NK (en:té provisoire) Poullot et al, Ann Oncol, 2014
28 SLPC à cellules NK (en:té provisoire) CD4 T-cells NK-cells 41% CD8 T-cells B-cells NK-cells CD3+ cells αβ TCR
29 SLPC à cellules NK (en:té provisoire) KIR repertoire
30 SLPC à cellules NK (en:té provisoire) G A A C C A T A C A C A A A G C A STAT3 wt STAT3 mut Y640T 2051 A>T
31 LGL : Large Granular Lymphocyte T-LGL/NK-LGL Expansion LGL réac:onnelle Leucémie T-LGL SLPC à cellules NK Leucémie aggressive à cellules NK Phase leucémique -de lymphome extranodal NK/T nasal -de lymphome T γδ hépato-splénique
32 Leucémie aggressive à cellules NK Homme de 68 ans, épanchement pleural, ascite. Cytopénie modérée, rare LGL circulants Liquide pleural, 93 el/mm 3
33 Leucémie aggressive à cellules NK Liquide pleural
34 Leucémie aggressive à cellules NK
35 Lymphome extra-nodal NK/T nasal Femme de 36 ans, Syndrome méningé. LCR
36 Lymphome extra-nodal NK/T nasal LCR Pas suffisamment de cellules pour répertoire KIR
37 Lymphome T hépatosplenique Femme de 34 ans. Pancytopénie profonde (Hb: 8.9 g/l, PNn: 0.5x109/L, Plaq: 0.5x109/L) MO
38 En pra:que Bibliographie: - Steinway & Leblanc & Loughran. Blood Rev Lamy T & Loughran TP. Blood Morphologie de LGL: -Renseignements cliniques++ contexte réac:onnel? Cytopénies? -Contrôle de la cytologie Si CMF: BM: -Niveau 1: CD3/CD4/CD8/CD5/CD2 -Niveau 2: CD16/CD56/CD57/TCRab/TCRgd -Niveau 3: panel Vbeta (!24 an:corps + ga:ng,!!!!rihn) -TCR alterna:ve ou complément de la CMF -Axen:on aux pe:ts clones -Stat3mut : protocole
39 En pra:que LGL >2x10 9 /L (WHO) >0.5 voire 0.4x10 9 /L, si clinique++ : auto-immune, splénomégalie, cytopénie CD16/CD56/(CD57) CMF CD3/CD4/CD8/CD5/CD2 NK KIR mutstat3 (Sanger ou NGS) T CD8 (CD16/CD56)/TCRαβ/TCRγδ +Ac de ga:ng γδ TCR en BM αβ Vbeta en CMF ou TCR en BM
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