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1 Vaccination par ADN et Thérapie génique. g Module Terre-Biologie. Licence Scientifique Générale. Université Paris Sud XI. Cornu Pauline Druais Delphine Dumont Stéphanie

2 Plan. Comment le génie génétique permet-il d envisager des solutions thérapeutiques dans le traitements de différentes maladies? Introduction. I.De l ADN aux protéines. 1.Passage de l ADN aux protéines sans modifications. 2.Passage de l ADN aux protéines avec mutations. II.La vaccination préventive ou thérapeutique. 1.Rappel système immunitaire. 2.Vaccin préventif. 3.Vaccination thérapeutique à partir d ADN. III.Thérapie génique. 1.La thérapie génique. 2.Exemple concret de la thérapie génique au service des maladies cérébrales. Conclusion.

3 1. Passage de l ADN l aux protéines sans modification. Ce passage se fait en deux grandes étapes: La transcription. De l ADN à un ARN messager. La traduction. De l ARN messager à une protéine.

4 Passage de l ADN l aux protéines sans modifications. ADN: acide désoxyribonucléique. C est une molécule en double hélice complémentaire constituée d une succession de nucléotides (T,A,C,G).C est le support de l'information génétique et ce support est universel.

5 Passage de l ADN l aux protéines sans modifications. ARN messager :acide ribonucléique messager. C est une molécule en simple brin constituée d une succession de nucléotides. (U,A,C,G). Comme l ADN, l ARN est une succession de nucléotides mais ils sont légèrement différents.

6 La Transcription de l ADN l à l ARN messager. La première étape est de reconnaître le début du gène à copier. Dérouler la double hélice ainsi que la fermer. On doit ensuite associer les nucléotides précurseurs complémentairement aux nucléotides du brin transcrit. Puis faire migrer l ARN messager formé vers le cytoplasme.

7 La transcription de l ADN l à l ARN messager.

8 La Transcription de l ADN l à l ARN messager. C est l ARN polymérase qui est une enzyme qui va ouvrir l ADN et permettre la synthèse de l ARN messager en associant de manière covalente une à une les bases azotés du brin transcrit avec l ARN messager du côté 3 vers 5 T=>A, A=>U, C=>G, G=>C.

9 La Transcription de l ADN l à l ARN messager. La transcription a ainsi permis la synthèse d une molécule simple brin complémentaire du brin transcrit de l ADN.Cette ARN porte l information génétique toujours sous la forme d une séquence nucléotidique et migre vers le cytoplasme.

10 La traduction de l ARN l m à la protéine. C est le processus qui va permettre de passer de l ARN messager à la protéine. Cette étape a lieu dans le cytoplasme et met en jeu des acteurs telle que le ribosome qui se compose d une petite sous partie et d une grande sous partie.

11 La traduction de l ARN l m à la protéine. Le brin d'arn messager est A U A G C G U U C A G A A C U G A U A C G U A A Les différents codons sont donc AUA - GCG - UUC - AGA - ACU - GAU - ACG - UAA Les ARN de transfert se fixent UAU CGC AAG UCU UGA CUA UGC AUU par complémentarité et apportent les acides aminés appropriés Île Ala Phe Arg Thr Asp Thr X Le brin d ARN m se fixe à un ribosome qui va assembler une séquence d acide aminé selon les codons du code génétique en commençant par le codon initiateur et finissant par le codon stop. Un codon est un groupe de 3 nucléotides et chacun correspond à un acide aminé.

12 La traduction de l ARN l m à la protéine. Le ribosome va parcourir le brin d'arn m codon par codon en commençant par le codon initiateur et va par l'intermédiaire d'un ARN de transfert ajouter un acide aminé à la protéine en cours de fabrication selon le codon lu. Une fois le codon-stop atteint, la protéine est complète: le ribosome se détache de la protéine et du brin d'arn m, et la protéine est libérée dans l'organisme.

13 2. Passage de l ADN l aux protéines avec mutations. Mutation: une modification de l information génétique. C est un événement qui est considéré comme rare, aléatoire et héréditaire et qui ne conduit pas forcément à une variation phénotypique. Ils en existent de différentes formes et qui entrainent des modifications différentes. λ ADN =>ARN messager => Protéine λ ADN altéré => ARN messager le plus souvent altéré => Protéine modifiée Due à: Les ondes électromagnétiques Des substances chimiques interagissant avec l ADN (ou éventuellement avec l'arn) Une modification du système de réparation de l'adn, qui cesse alors de corriger les erreurs de réplications.

14 Transmission des mutations. Si sur les cellules germinales: =>donner un avantange sélectif =>transmise aux descendants de l'individu mutant et peut être létale. => selon le principe de l'evolution. Les mutations accidentelles (provoquées par irradiation ou substances chimiques), si elle n'affecte que des cellules somatiques affecte juste le sujet atteint directement. Si les cellules se divisent activement, il y a possibilité de création d'une tumeur pouvant évoluer vers un cancer. À l'opposé, s'il n'y a pas de division l'effet est négligeable.

15 Conséquences des mutations. la plupart des mutations ont de plus ou moins importantes conséquences phénotypiques : cancers ou maladies génétiques. les mutations neutres ne modifient pas le fonctionnement de la protéine et n'ont pas de conséquence phénotypique macroscopique. les mutations silencieuses ou muettes n'entraînent aucun changement dans la séquence d'acides aminés, ce qui est dû aux nombreuses redondances dans le code génétique.

16 Vaccination préventive et vaccination thérapeutique à partir d ADNd 1. Rappel : Système immunitaire 2. Vaccination préventive 3. Vaccination thérapeutique à partir d ADN

17 1. Rappel : Système immunitaire Deux types de mécanisme de défense immunitaire: 1. Les mécanismes de défense non spécifiques : la peau, les muqueuses 2. Les mécanismes de défense spécifiques : les lymphocytes, les anticorps

18 Quelques définitionsd Les lymphocytes sont des globules blancs du sang et du tissu lymphoïde responsable de l immunité spécifique. Les anticorps sont des protéines sécrétées par les cellules du système immunitaire et sont capables de se fixer spécifiquement sur un antigène. Les antigènes sont des substances chimiques qui, introduient dans l organisme sont susceptibles de provoquer une réponse immunitaire.

19 Rappel : Système immunitaire Le système immunitaire doit être capable d identifier les différents agents pathogènes afin de déclencher une réaction capable de les éliminer. Notre système immunitaire garde une mémoire de l agent infectieux. (cellules mémoires : lymphocytes T et lymphocytes B)

20 Le fonctionnement du système immunitaire

21 Rappel : Système immunitaire Le système immunitaire a donc 4 propriétés: 1. Reconnaître le soi du non soi 2. La spécificité : à un antigène correspond un anticorps. 3. La capacité à répondre à des pathogènes très divers. 4. La mémoire immunitaire.

22 2. Vaccination préventive Un vaccin c est une préparation contenant un agent pathogène rendu inoffensif et qui est capable de déclencher une réaction immunitaire. La vaccination préventive vise à stimuler les défenses naturelles de façon à prévenir l apparition d une maladie, elle permettra donc de détruire rapidement l agent infectieux.

23 Des outils pour la vaccination préventive ou thérapeutique Les toxines inactivées: Des chercheurs ont trouvés une protéine, une toxine qu ils ont modifié pour la rendre non toxique afin de fabriquer un vaccin. Une protéine couplée à un polysaccharide: Une enveloppe de polysaccharides (sucres) entoure de nombreuses bactéries infectieuses. La vaccination par des polysaccharides purifiés ne déclenche qu une immunité partielle. Par conséquent, les chercheurs ont couplé un polysaccharide à une protéine de l agent infectieux afin de fabriquer des vaccins.

24 Des outils pour la vaccination préventive ou thérapeutique L immunisation par l ADN: L ADN des plasmides pénètre dans les cellules des malades. Le gène codant l antigène est transcrit en ARN messager et ensuite traduit en protéine ce qui active le système immunitaire contre l antigène, et produit ainsi une immunisation contre le virus.

25 3. Vaccination thérapeutique Cette technique consiste à stimuler le système immunitaire de l organisme pour favoriser la production d anticorps. Il ne s agit donc plus de prévenir l apparition d une maladie mais d aider l organisme d une personne déjà infectée à lutter contre la maladie en renforçant ses défenses immunitaires.

26 Vaccination thérapeutique Des vaccins thérapeutiques sont en cours de mise au point afin de lutter contre diverses maladies telles que : Hépatite C, papillomavirus

27 Conclusion La vaccination n est plus seulement préventive mais thérapeutique. Elle va chercher à prévenir une infection ou à modifier une maladie déjà établie. La vaccination permet de protéger l organisme contre des agents infectieux. Le développement et la fabrication des vaccins classiques et thérapeutiques bénéficient de la thérapie génétique.

28 La thérapie géniqueg 1. La thérapie génique (définition/méthodes/vecteurs) 2. Exemple concret: la thérapie génique au service des maladies cérébrales (Principe/stratégie/exemples)

29 1. Définition de la thérapie génique Correction d un défaut génétique par le remplacement ou l ajout de cellules génétiquement corrigées, c est-à-dire porteuse d un allèle fonctionnel. Il existe deux thérapies géniques: - germinale (dans les cellules-œufs) (non réalisée) - somatique (dans les cellules somatiques)

30 Les méthodesm Ajouter un gène dans une cellule ou une nouvelle propriété Empêcher la synthèse ou l action de protéine nuisibles produites par un gène défectueux : 1 ère méthode ADN «antisens»: - à l aide de courtes séquences d ADN synthétique ou des ribozymes (ARN) on empêche les segments d ARN messager de gènes mutants (ou non) de synthétiser des protéines 2 ème méthode: - Insérer le gène d une protéine nommée anticorps intracellulaire - bloque l activité de la protéine mutante

31 2 méthodes m d introduction d de gènesg

32 Les différents types de vecteurs pour transporter et distribuer les gènes Les virus: - les rétrovirus: insèrent une copie de leurs gènes dans les chromosomes des cellules qu ils envahissent - les adénovirus humain: sont inoffensifs/n entraînent que des rhumes/n insèrent pas leur gènes dans des chromosomes - les virus associés aux adénovirus: sont inoffensifs et intègrent leurs gènes dans des chromosomes - les herpèsvirus: n intègrent pas leurs gènes dans des chromosomes/sont attirés par les neurones

33 Les agents synthétiques: - combinaison d ADN et de molécules - transport de l ADN dans les cellules - protège des dégradations Les peptides: L ADN est transporté Les liposomes: - étudiés comme des rétrovirus - on sait y loger un plasmide (ADN) dont les gènes modifiés ont un effet thérapeutique L ADN nu: Immunisation contre les maladies infectieuses, voire certaines formes de cancers

34 Les limites La quantité de protéine nécessaire est difficile à réguler On a pas encore de vecteurs capables de s orienter eux-même vers les cellules cibles Les virus: - Les rétrovirus: peu sélectifs/ne propagent leurs gènes que lors des divisions cellulaires (pas neurones)/vih utilisé comme rétrovirus mais pas encore certain qu il ne reviendra pas pathogène - Les adénovirus: les gènes transporteur de l ADN finissent par disparaître: renouvellement mensuel ou annuel/peu sélectifs/provoque une réaction immunitaire énergétique - les virus associés aux adénovirus, les herpèsvirus, les alphavirus et les proxivirus: aucun n est idéal mais chacun à des applications spécifiques

35 Les agents synthétiques: Les gènes s intègrent bien dans les chromosomes en laboratoire mais mal dans l organisme Les liposomes: Moins efficace que les virus mais les essais sont en cours

36 2. Exemple concret: la thérapie génique au service des maladies cérébrales Maladies neurologiques = évolutives Cellules touchées: cellules nerveuses ou les neurones - le problème: les neurones touchées sont perdus, ne se divisent plus. - Solution: ralentir la dégénérescence cérébrale ou compenser un déficit lié à la neurodégénerescence.

37 La maladie de Parkinson Le problème: - dégénérescence progressive de la substance noire (motricité, tremblements ) - mort des ces neurones: plus de neuromédiateur : la dopamine Les solutions: - Stimuler la production de la dopamine en augmentant la production d une enzyme - Greffer des cellules génétiquement modifiées Tests sur des rats: - utilisation de vecteurs génétiques: virus de l herpès et des adénovirus - transplantation de neurones - mais s autodétruisent - il faut une survie des greffons à long terme - Stratégie: bloquer le suicide cellulaire Résultat: L état général des rats est mieux

38 La crise d éd épilepsie Le problème: Les cellules touchées sont les neurones qui produisaient comme neuromédiateur le glutamate. Le calcium n est donc plus réabsorbé. Solution: Essayer d évacuer le calcium en excès Tests sur des rats: Utilisation d un vecteur: le virus de l herpès modifié pour évacuer le calcium en excès Résultats: - préservation du métabolisme des neurones lors d une crise d épilepsie - réductions des lésions

39 Stratégie «anti-suicide» Désactivation des mécanismes m d apoptosed (suicide cellulaire) Gène inhibiteur de l apoptose (bcl-2) dans le virus de l herpès Protège contre les dégâts d une crise neurologique

40 Conclusions D autres formes de vecteurs sont à l étude comme des chromosomes miniatures Quand les vecteurs seront au point, ils seront utilisés pour des traitements différents : pour une activité à court terme par exemple on privilégiera soit un adénovirus, un liposome ou un ADN nu Une fois au point, les biologistes devront éviter l inactivation des gènes étrangers et limiter les réactions immunitaires : - utiliser des substances antirejet - commencer très tôt la thérapie génique dans la vie du malade avant que son système immunitaire ne soit devenu opérationnel Difficulté du cerveau: il est enfermé dans une boîte crânienne: les vecteurs viraux arriveront-ils à arriver jusqu au cerveau? seront-ils alors assez actifs? agiront-ils suffisamment longtemps? Les progrès dans quelques années dans ce domaine neurologique permettra d aider et de soigner les maladies des personnes âgées

41 Bibliographie Dictionnaire des Sciences de la Vie et de la Vie et de la Terre de Michel Breuil (Nathan) Livre de terminal S: Sciences de la Vie et de la Terre (Hâtier) Biologie et physiologie humaine (Vuibert) Le monde du vivant (Flammarion) Encyclopédie Universalis Dictionnaire de biologie (De Boeck) Internet pour les images

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