Cibles, critères d évaluation et optimisation du trichrome. Miriam Blumenkrantz et Dorothy Chicoine 1 er et 12 juin 2012
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- Alain Briand
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1 Cibles, critères d évaluation et optimisation du trichrome Miriam Blumenkrantz et Dorothy Chicoine 1 er et 12 juin 2012
2 Plan de présentation But de la coloration Principe de la coloration Choisir les tissus appropriés pour le témoin Critères d évaluation de la qualité Résolution de problèmes Quiz
3 Trichrome: But de la coloration Mise en évidence des fibres de collagène Identifier une augmentation des fibres de collagène ou différencier le collagène des fibres musculaires lisses
4 Trichrome: Principe de la coloration Différence de perméabilité des différents constituants acidophiles du tissu Biebrich scarlet: molécule de petite taille, pénètre bien le cytoplasme très dense Fushine acide: plus grosse molécule, colore les muscles lisses moins denses Ces deux colorants infiltrent aussi le collagène, le constituant le plus perméable, mais sont délogés de celui-ci lors de la différenciation pour laisser toute la place à un troisième colorant, le bleu d aniline ou le vert lumière.
5 Trichrome: Principe de la coloration Facteurs affectant l affinité de la coloration: Fixation: la post-fixation au Bouin améliore grandement la coloration parce que le formol masque les groupements acides ph : toutes les techniques de trichrome exigent un ph acide pour exposer les groupements cationiques Durée de l'exposition aux solutions colorantes Types de colorants utilisés
6 Trichrome: Principe de la coloration Peu importe la technique utilisée, le principe est généralement le même Source:
7 Trichrome: Principe de la coloration Le tissu est d abord postfixé dans la solution de Bouin Source:
8 Trichrome: Evaluation de la qualité L utilisation d un pré-traitement (postfixation) Source: QMPLS Rapport Sommaire PATH 1101 SS QC, p 55
9 Trichrome: Principe de la coloration L hématoxyline de Weigert est ensuite utilisée pour les noyaux Le chlorure ferrique qu elle contient lie fermement l hematoxyline à l acide nucléique Source:
10 Trichrome: Principe de la coloration Les cytoplasmes et les muscles lisses sont colorés par une solution de Biebrich Scarlet - fushine acide. Source:
11 Trichrome: Principe de la coloration Différenciation dans une solution d acide phosphotungstique-phosphomolybdique APT accentue la coloration cytoplasmique APM se lie au collagène pour faciliter la prochaine étape Source:
12 Trichrome: Comparaison des réactifs Source: QMPLS Rapport Sommaire PATH 1101 SS QC, p 56
13 Trichrome: Principe de la coloration Bleu d aniline: colore le collagène en se liant à l APM Si le vert lumière est utilisé, il expulsera l APM pour prendre sa place
14 Quelle est l'étape la plus importante pour effectuer un bon trichrome? L étape de contrôle de la qualité, bien sûr!
15 Trichrome: Choisir un tissu témoin approprié Quel sont les meilleurs tissus à utiliser pour évaluer la qualité du trichrome de Masson? Le foie seul n'est pas idéal car il ne démontre pas les différences d'intensité des colorants Un contrôle multi-tissus, incluant l'intestin et du placenta, est préférable
16 Trichrome: Choisir un tissu témoin approprié Foie Intestin
17 Trichrome: Choisir un tissu témoin approprié Foie Rein
18 Trichrome: Choisir un tissu témoin approprié Placenta Foie 18
19 Trichrome: Choisir un tissu témoin approprié Poumon Intestin 19
20 Trichrome: Choisir un tissu témoin approprié
21 Critères d évaluation de QMP-LS Cible clairement démontrée Degré d intensité Visualisation de la cible Distribution attendue Sélectivité du contre-colorant 21
22 Critère d évaluation Cible clairement démontrée Muscle et collagène clairement visibles Fort contraste avec morphologie sousjacente 22
23 Critère d évaluation Degré d intensité Collagène: varie selon épaisseur et densité des fibres, Muscle: différentes bandes musculaires = différents degrés d intensité 23
24 Critère d évaluation Visualisation de la cible Noyaux: bleu noir bien différenciés chromatine clairement visible pas d interférence avec cytoplasme 24
25 Critère d évaluation Distribution attendue Aucun précipité, dépôt de colorant ou réaction croisée Élimination totale du Bouin 25
26 Critère d évaluation Sélectivité des contre-colorants Identifier les composantes tissulaires sans masquer noyaux Ne doivent pas interférer entre eux Démontrer gamme complète d intensité 26
27 Trichrome: Evaluation de la qualité Le collagène et le muscle lisse sont-ils de la bonne couleur? Les couleurs sontelles d égales intensités? Le cytoplasme est-il de la bonne couleur, de la bonne intensité? Y a-t-il un bon contraste entre les différentes couleurs? Les noyaux sont-ils bleu-noir? Voit-on bien la chromatine? Y a t-il des précipités ou des dépôts de colorant? Le Bouin a t-il été bien enlevé? La spécificité: Les structures visées sont-elles les bonnes? La sensibilité: Les structures visées sont-elles suffisement visibles?
28 Résolution de problèmes Collagène violet ou non coloré Différenciation insuffisante ph des solutions acides > 2,5 Dernier passage dans acide acétique trop long Absence de postfixation 28
29 Résolution de problèmes Muscle gris ou non coloré Trop longtemps dans Hx ou rinçage inadéquat Colorants expirés Absence de postfixation 29
30 Résolution de problèmes Noyaux trop foncés Trop longtemps dans l hématoxyline Rinçage inadéquat 30
31 Résolution de problèmes Noyaux pâles ou rouges Hx non ferrique utilisée Hx sur-oxydée Temps de coloration Hx insuffisant 31
32 Quiz: cible bien démontrée? excellent acceptable inacceptable 32
33 Quiz: couleurs bien séparées? excellent acceptable inacceptable 33
34 Quiz: Que pensez-vous de l intensité des couleurs? excellent acceptable inacceptable 34
35 Quiz: La coloration des noyaux est-elle adéquate? excellent acceptable inacceptable 35
36 Quiz: Ces trichromes sont-ils acceptables? excellent acceptable inacceptable 36
37 Quality Management Program Laboratory Services (QMP-LS) Les critères de qualité pour l évaluation technique des colorations histologiques ont été développés par le Quality Management Program-Laboratory Services (QMP-LS) qui seul en détient la propriété intellectuelle et les droits d auteur. Leur logo et le matériel protégé ne peuvent être reproduits sans la permission écrite du QMP-LS. Marque déposée 2011 Quality Management Program- Laboratory Services, un département de l Ontario Medical Association. Tous droits réservés. 37
38 Merci
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