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1 Mécanismes de contrôle de la signalisation du BCR dans les lymphomes B diffus à grandes cellules (LBDGC) - Déséquilibre d expression des isoformes du FcγRIIB E Bohers, P Ruminy, V Rainville, S Mareschal, P Etancelin, C Bastard, H Tilly, F Jardin. INSERM U918

2 Voie de signalisation du BCR et survie des lymphomes B BCR CD79A/B Survie des lymphomes B dépend du BCR et de l activation de sa voie de signalisation Centre Henri-Becquerel

3 Voie de signalisation du BCR et survie des LBDGC * Survie LBDGC de type ABC dépend de l activation de la voie de signalisation du BCR Mutations activatrices CARD11, CD79A/B * Activation constitutive de la voie du BCR

4 Les récepteurs FcγR Récepteurs fragment constant des IgG (complexes immuns) Inhibition voie du BCR FcγRIIB = seul inhibiteur expression surface cellules B BCR coligation FcγRIIB Surexpression liée à transfo LF, et associée à mauvais pronostic dans LBDGC et MCL Inhibition de la prolifération

5 Le récepteur FcγRIIB FCGR2B Isoforme B1 Isoforme B2 Epissage alternatif exon 6 Différence de 19 aa entre B1 et B2 (domaine intracytoplasmique) Lymphocytes B expriment majoritairement B1 Niveau fonctionnel : - Différence dans capacité de phagocytose (B2) - Différence de phosphorylation de partie effectrice intracellulaire (indispensable à fonction inhibitrice) FcγRIIB Inhibition de la prolifération

6 Les anomalies du locus FCGR Anomalies secondaires fréquentes LNHB = réarrangements 1q21-23 Cen 1q21-q23 96 LBDGC analysés par CGH : Gains de copie 1q21-23 = 24 patients (25%) Tel Récepteurs Fcγ et Fc-like Contribution expression anormale FcγR dans lymphomagénèse des LBDGC??

7 FISH 1q21-23 RP11-122G18 (rouge) 11 patients : duplications, jumping translocations RP11-80F2 (vert)

8 Expression des FcγR Pas de lien statut région 1q21-23 / anomalies expression FCGR UPN562 UPN891 UPN1342 UPN968 UPN934 UPN968(2) UPN259 Ladder UPN935 UPN891 UPN891(2) UPN987 UPN150 UPN1392 UPN Isoforme B1 Isoforme B2 FCGR2B B1 B2 FCGR2B Expression des isoformes FcγRIIB1 et B2 dans des proportions différentes Patients avec gain de copie 1q21-23 : 5/21 (24%) avec expression B2 majoritaire dont 2 avec expression B2 presque exclusive Patients sans gain de copie 1q21-23 : 28/58 (48%) avec expression B2 majoritaire dont 2 avec expression B2 presque exclusive 33/79 (41,7%) au total avec déséquilibre expression en faveur de B2

9 Expression des isoformes de FCGR2B Cause(s) du déséquilibre d expression B1/B2??? environnement de la tumeur? anomalies d expression? et/ou anomalies génétiques? Séquençage du gène FCGR2B (exons 5 à 8 région effectrice intracellulaire) FCGR2B Isoforme B1 Isoforme B2 4 patients (12%) avec une altération génétique pouvant expliquer expression majoritaire B2

10 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 1 (1) Gain de copie 1q21-23 en CGH Expression presque exclusive de B2 UPN430 UPN1374 UPN497 FCGR2B B1 B2 PCR sur ADNg exons 5 à 8 FCGR2B : sang biopsie Déletion d environ 1,7 Kb 3,7 kb 2 kb Pas dans le sang >> Somatique Séquence

11 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 1 (2) Séquence : Exon 5 Intron 5 Exon 6 Déletion de 1,67 Kb emportant l exon 6 Intron 6 Expression majoritaire de B

12 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 2 (1) Gain de copie 1q21-23 en CGH (confirmé en FISH) Expression presque exclusive de B2 UPN1216 UPN1457 UPN1068 FCGR2B B1 B2

13 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 2 (1) Mutation hétérozygote faux sens dans l exon 6 dans biopsie 2005 = c.770g>t, p.gly257val G>T Exon 6 Non retrouvée dans le sang (2005 et 2006) >> mutation somatique Exon 6

14 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 2 (2) Mutation exon 6 retrouvée dans biopsies 2003 et 2006 mais pas 2010 RT-PCR/seq: B.03 B.06 B.10 (Hodgkin) B1 B2 B.03 = B2 ++ S.06 = B1/B2 B.06 = B2 ++ B.10 = B1/B2 Mutation associée à expression majoritaire de B2 Mutation d épissage responsable de l expression de l isoforme B2 (?)

15 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 3 Pas d anomalie 1q21-23 en CGH Expression presque exclusive de B2 UPN562 UPN891 UPN1342 UPN968 UPN934 UPN968(2) UPN259 Ladder UPN935 UPN891 UPN891(2) UPN987 UPN150 UPN1392 UPN106 FCGR2B B1 B2 Mutation somatique hétérozygote dans l exon 6 c.783c>t, p.cys270cys (silencieuse) Biopsie Sang C>T Mutation d épissage responsable de l expression de l isoforme B2 (?)

16 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 4 Pas d anomalie 1q21-23 en CGH Expression presque exclusive de B2 FCGR2B B1 B2 UPN562 UPN891 UPN1342 UPN968 UPN934 UPN968(2) UPN259 Ladder UPN935 UPN891 UPN891(2) UPN987 UPN150 UPN1392 UPN106

17 Anomalies génétiques de FCGR2B : Patient 4 (2) 3 mutations somatiques hétérozygotes dans l intron 6 Biopsie +2T>A +61A>T +85A>G +2T>A affecte site canonique donneur d épissage Moelle Exon 6 Intron 6 Mutation(s) d épissage responsable(s) de l expression de l isoforme B2

18 Bilan / Perspectives Au total, parmi 96 patients LBDGC (passés en CGH) environ 40 % (33/79) présentent un déséquilibre expression des isoformes FcγRIIB1/B2 cause génétique pour 4 patients (12 %) (mutations acquises) Rôle de l isoforme B2 dans la lymphomagénèse (?) Conséquences fonctionnelles de ce déséquilibre??? Importance dans la lymphomagénèse??

19 Perspectives Internalisation du ritux dans les LLC Résistance au traitement?? Association expression majoritaire B2 à moins bonne survie?? Mais bonne efficacité mabs anti-cd20 dans LBDGC Etude dans une cohorte + homogène / traitement

20 Perspectives Etudes fonctionnelles Hypothèse : isoforme B2 moins inhibitrice que B1 (?) Différence 19 aa >> différence phosphorylation partie effectrice intracellulaire, nécessaire à fonction inhibitrice (recrutement phosphatases ) Transfection B1 / B2 dans lignée ST486 (FcgRIIB - ) Non transfectées Transfectées FcγRIIB1 CMF anti-fcγrii Activation voie BCR +/- FcγRIIB (anti-igm)

21 Perspectives Etudes fonctionnelles Etude conséquences sur la signalisation intracellulaire : fixation de kinase LYN / phosphatase SHIP phosphorylations / déphosphorylations protéines effectrices voies FcγRIIB et BCR (SHIP1, Syk, Akt, IkB ) par Western blot

22 Remerciements Laboratoire de Biologie Moléculaire / U918 : Fabrice Jardin, Pascaline Etancelin, Philippe Ruminy, Vinciane Rainville, Sylvain Mareschal, Nathalie Dumant, Sandrine Tison, Catherine Maingonnat, Françoise Parmentier, Philippe Bertrand, Hélène Lanic, Christian Bastard Laboratoire de Cytogénétique : Dominique Penther, Mélissa Ancelle, Mathieu Viennot, Annie Olivier, Claire Maisonneuve, Céline Burgot Département d Hématologie : Aspasia Stamatoullas, Pascal Lenain, Nathalie Contentin, Stéphane Lepretre, Hervé Tilly Centre Henri-Becquerel

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