Rôle du facteur de transcription ChREBP* dans le développement de la stéatose alcoolique

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1 AFEF 28/9/211 Rôle du facteur de transcription ChREBP* dans le développement de la stéatose alcoolique Solenne MARMIER Institut Cochin Département Endocrinologie, Métabolisme et Cancer Equipe Signalisation de l insuline, du glucose et Glucocotoxicité *Carbohydrate Responsive Element Binding Protein Pas de conflit d intérêt à déclarer

2 Déclaration de conflits d intérêts Aucun conflits d intérêts

3 La maladie alcoolique du foie Cause de mortalité importante dans le monde entier (+ de 1 morts/an en France) Foie sain 9-1% Stéatose hépatique 1-35% 8-2% Hépatite Alcoolique? (4%) Cirrhose Foie sain Cirrhose

4 Importance de ChREBP dans la synthèse d acides gras insuline glucose Inhibition de ChREBP CTRL ARNi ChREBP + SREBP1c glucose + + Ac ChREBP + ACC-FAS-SCD1 L-PK (Glycolyse) Glucose (25 mm) Surexpression de ChREBP Synthèse des acides gras et des triglycérides (Lipogenèse) CTRL ChREBP stéatose ACC:Acetyl CoA Carboxylase FAS: Fatty acid synthase SCD1: Steroyl CoA desaturase Dentin et al., 24;26 Bricambert et al., 21 Benhamed-Rayah et al., en révision

5 Rôle de ChREBP dans le développement de la stéatose alcoolique 1/ In vivo, par un modèle d intoxication alcoolique aiguë à des souris C57Bl/6J âgées de 15 semaines : modèle de «Binge drinking» 2/ In vitro, cultures primaires d hépatocytes de souris incubées en présence d éthanol (5 mm). Spécificité de ChREBP testée par l utilisation d un adénovirus ARN interférant shchrebp

6 Modèle d intoxication alcoolique aiguë chez la souris in vivo (Ding et al. Gastroenterology, 21 ) Jeûne de 4h 1 gavage toutes les 2 minutes pendant 8 minutes (4,5g/kg) Prélèvements des foies 6h Analyses biologiques, biochimiques et histologiques Groupe CTRL (Dextrine Maltose) Groupe EtOH 33 Calories identiques

7 UA UA Modèle d intoxication alcoolique aiguë chez la souris in vivo ARNm 2 1,5 Glycolyse CTRL (DM) EtOH 33 1,5 Western blot ChREBP LPK CTRL DM EtOH 33 ChREBP 6 Lipogenèse ChREBP AC 5 FAS SCD1 HSP 9 1 SREBP1c FAS SCD1 p,5 p,1 p,5

8 Modèle d intoxication alcoolique aiguë chez la souris in vivo TRIGLYCERIDES OIL RED O (noyaux/lipides) 7 mg/g de foie 6 CTRL DM EtOH CTRL DM EtOH 33 L alcoolisation aiguë induit le développement d une stéatose hépatique via l induction des gènes clefs de la lipogenèse

9 Rôle de ChREBP dans le développement de la stéatose alcoolique 1/ In vivo, par un modèle d intoxication alcoolique aiguë à des souris C57Bl/6J âgées de 15 semaines 2/ In vitro, cultures primaires d hépatocytes de souris incubées en présence d éthanol (5 mm). Spécificité de ChREBP testée par l utilisation d un adénovirus ARN interférant shchrebp

10 Protocole expérimental in vitro (J) (J1) (J2) (J3) Cultures primaires d hépatocytes Infections adénovirales shctrl et shchrebp Stimulation à l insuline Analyses biologiques, biochimiques shctrl shchrebp Glucose 5mM ± EtOH à 5mM (G5) (G5EtOH) Glucose 25mM (G25)

11 UA UA Spécificité de ChREBP en présence d alcool, in vitro ARNm 5 Glycolyse G5 shctrl G25 shctrl 5 4 ChREBP Lipogenèse L-PK SREBP 1c FAS SCD1 p,5 p,1 p,5

12 UA UA Spécificité de ChREBP en présence d alcool, in vitro ARNm 5 4 Glycolyse G5 shctrl G25 shctrl G5 EtOH shctrl 5 4 ChREBP Lipogenèse L-PK SREBP 1c FAS SCD1 p,5 p,1 p,5

13 UA UA Spécificité de ChREBP en présence d alcool, in vitro ARNm 5 Glycolyse G5 shctrl G25 shctrl G25 shchrebp G5 EtOH shctrl 5 4 ChREBP Lipogenèse L-PK SREBP 1c FAS SCD1 p,5 p,1 p,5

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15 Spécificité de ChREBP en présence d alcool, in vitro

16 TRIGLYCERIDES µg de TG/1^6 hépatocytes Oil Red O (noyaux/lipides) shctrl G5 G25 sh CTRL sh ChREBP G G25 p,5 p,1 p,5

17 TRIGLYCERIDES µg de TG/1^6 hépatocytes OIL RED O (noyaux/lipides) shctrl G5 G25 sh CTRL sh ChREBP G G25 G5EtOH + - G5EtOH p,5 p,1 p,5

18 TRIGLYCERIDES OIL RED O (noyaux/lipides) µg de TG/1^6 hépatocytes shctrl shchrebp G5 G25 sh CTRL sh ChREBP G G G5EtOH + - G5EtOH p,5 p,1 p,5

19 TRIGLYCERIDES 1 µg de TG/1^6 hépatocytes Oil Red O (noyaux/lipides) shctrl shchrebp 8 G G25 sh CTRL sh ChREBP G5 G25 G5EtOH G5EtOH Augmentation des gouttelettes lipidiques et des TG en présence de 5mM EtOH Diminution des gouttelettes lipidiques et des TG en présence de shchrebp et EtOH p,5 p,1 p,5

20 Conclusions et Perspectives In Vivo en réponse à une alcoolisation aiguë Conclusions Augmentation de l acétylation de ChREBP» De l expression de ses gènes cibles (FAS, SCD1)» Accumulation des gouttelettes lipidiques et des TG hépatiques Perspectives In vivo, injection d un dominant négatif de ChREBP sous forme d adénovirus Immuno-marquages du gène cible de ChREBP sur des foies de patients atteints de ALD In Vitro Conclusions Inhibition de ChREBP par ARNi prévient les effets stimulateurs de l alcool (EtOH 5 mm) sur l accumulation de triglycérides via la voie de la lipogenèse Perspectives Modèle de lignées humaines stables (cytochrome P45) Importance de ChREBP dans la stéatose alcoolique

21 Remerciements U116- Signalisation de l insuline, du glucose et glucotoxicité» Anne-Françoise Burnol Michèle Caüzac Popineau Lucie Bernard Desbuquois Marthe Moldes Céline Dubuquoy Regine Cabrae Sandra Guilmeau Schumacher Yoann Jean Girard Catherine Postic Rayah Fadila Gaëlle Filhoulaud Audrey Poupeau Sandra Hernandez Bénédicte Noblet Renaud Dentin Julien Bricambert Caroline Bonner-Carbonnaux Tarik Issad Yann Fardini Anais Gondoin Camille Cosson Patrick Pagesy Mei-shiue Kuo Shahzina Kanwal Cécile Pierre-eugene Sophie Loterstazjn U955-Physiopathologie hépatique Hôpital Henri Mondor Créteil Hépacol Fabienne Foufelle U671-Régulation du métabolisme glucido-lipidique par les hormones et les nutriments Centre de Recherches Biomédicales des Cordeliers, Paris