CELLINE. Bioréacteur à usage unique pour une expression efficace des protéines

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1 CELLINE Bioréacteur à usage unique pour une expression efficace des protéines

2 Une technologie à double compartiment Nutriments Déchets Glucose Glutamine Lactate Ammonium Compartiment du milieu de culture Membrane semiperméable 10 kda 2 mm Compartiment des cellules cellules protéines Membrane en silicone O2 CO2 Le succès de la culture cellulaire repose sur un approvisionnement optimal en oxygène et nutriments, et une élimination efficace des déchets métaboliques. Ces facteurs limitent la densité cellulaire maximale obtenue avec les techniques de culture conventionnelles, qui atteignent difficilement des niveaux élevés d'expression de protéines. Le bioréacteur à double compartiment CELLine est conçu pour pallier ces difficultés. Sa technologie innovante sépare le réacteur en deux compartiments, l un cellulaire, l autre pour le milieu, via une membrane semi-perméable de 10kDa, qui permet une diffusion continue des nutriments dans le compartiment cellulaire et l évacuation simultanée des déchets inhibiteurs. L accès individualisé à chaque compartiment donne la possibilité d alimenter les cellules en milieu frais sans interférer mécaniquement avec la culture. Une membrane en silicone, constituant le fond du compartiment cellulaire, garantit un échange gazeux efficace, assurant une alimentation en oxygène et un contrôle du niveau de dioxyde de carbone optimaux grâce à des voies de diffusion courtes vers les cellules. Tous ces éléments permettent à CELLine de simuler des conditions de culture quasi in vivo et d atteindre de fortes densités cellulaires.

3 Application Une expression efficace des protéines Avec CELLine, la croissance cellulaire atteint des densités de 10 7 à 10 8 cellules par ml, soit environ deux fois plus que celles obtenues avec les techniques conventionnelles. La concentration en protéine exprimée est donc généralement de 50 à 100 fois supérieure à celle obtenue avec les consommables de culture classiques. CELLine est, de plus, conçu pour maintenir plusieurs mois les cellules en culture et récolter périodiquement les protéines exprimées. En combinant ces fortes concentrations et collectes récurrentes, de grandes quantités de protéines hautement concentrées peuvent être régulièrement obtenues. Avec les techniques de culture classiques, les protéines contaminantes issues du sérum ou des cellules constituent une part importante de la fraction protéique totale. Avec CELLine et sa forte productivité, la concentration relative en contaminants par rapport à la protéine exprimée est bien plus faible. Ainsi la qualité des anticorps monoclonaux obtenus est souvent bien suffisante pour effectuer des tests standards tels que le Western Blot sans autre étape de purification cellules/ml j. Récolte Repiquage 5-7 j. Changement de milieu Récolte Repiquage Changement de milieu Protéines mg/ml : 4 1 : 4 1 : temps (jours) Une culture de type in vivo CELLine classic et CELLine adhere offrent la possibilité de cultiver des cellules aussi bien en suspension qu adhérentes, et de produire ainsi diverses biomolécules issues de différents systèmes d'expression : anticorps monoclonaux dans des hybridomes, protéines recombinantes dans des lignées cellulaires transfectées, particules virales dans des cellules d'encapsidation. Réussir la culture de différents types cellulaires exige certes du savoir-faire mais dépend surtout du système de culture choisi. La technologie CELLine mime les conditions physiologiques pour produire des densités cellulaires considérablement élevées et des morphologies de cellules plus organotypiques, allant même jusqu à permettre une croissance tridimensionnelle Pour en savoir plus : Efficient laboratory-scale production of monoclonal antibodies using membrane-based high-density cell culture technology. Trebak et al. (1999) J. Immunol. Methods, 230: Long-Term High Level Protein Expression in Adherent, Proteinfree Growing BHK Cells Using INTEGRA CELLine adhere 1000 Bioreactor Flasks. J. Mittermaier and M. O. Zang-Gandor (2004) Genetic Engineering News, 24(12): 42 Pour plus de références, visitez ou contactez-nous : 10 µm 10 µm Micrographies représentatives EM : morphologie plate de cellules HEp-2 croissant en monocouche dans un flacon en T standard (à gauche) ; forme arrondie de ces mêmes cellules étant cultivées dans CELLine adhere (à droite). (Avec l'aimable autorisation de W. Pfaller, Institut de Physiologie, Université d'innsbruck)

4 Bioréacteurs CELLine classic CELLine adhere Spécifications techniques CELLine classic (CL) est idéal pour les applications de laboratoire utilisant des cellules en suspension ou des cellules adhérentes combinées à des micro-supports. Il est optimisé pour la culture d'hybridomes et de nombreux autres types de cellules (ex. cellules CHO, NSO, SF). CELLine adhere (AD) est spécifiquement adapté pour permettre la croissance de cellules dépendantes d un support (ex, cellules HEK, BHK, CHO). Il contient une matrice tissée en polyéthylène téréphtalate (PET) dans le compartiment cellulaire, constituant une surface idéale pour la fixation des cellules. Insert matricielle PET du CELLine adhere Bioréacteurs à usage unique et double compartiment CELLine en polystyrène vierge optiquement clair, avec fond à échange gazeux (membrane en silicone moulée, barrière d aération 0,2 µm) ; Séparation des compartiments via une membrane semi-perméable (acétate de cellulose, 10 kda, individuellement testée sous pression). CELLine est facilement empilable (verrouillages de stabilisation), conditionné individuellement (blister facile à ouvrir, qualité médicale), stérile (irradiation rayons gamma) et apyrogène. CELLine CL 350 CELLine CL 1000 CELLine AD 1000 Dimensions : L x P x H (mm) 190 x 95 x x 120 x x 120 x 80 Poids (g) Bouchon du compartiment 28 mm ventilé (0,2 µm), 38 mm ventilé (0.2 µm), 38 mm ventilé (0.2 µm), du milieu bouchon vert avec membrane bouchon vert avec membrane ouchon vert avec membr. en polypropylène (PP) en polypropylène (PP) en polypropylène (PP) Bouchon du compartiment 24 mm, bouchon en PP, 28 mm, bouchon en PP, 28 mm, bouchon en PP, cellulaire membrane en polyéthylène membrane en polyéthylène membrane en polyéthylène Insert compartiment cellules aucun aucun insert matriciel en PET Observation au microscope fenêtre centrale, fenêtre centrale, visibilité limitée due (microscope inversé) distance de travail avec distance de travail avec à l insert matriciel l objectif : 2,5 mm l objectif : 2,5 mm Marquage du volume ml ml ml vertical et horizontal Information de commande Nom du produit Description Quantité / Boîte Réf. CELLine CL 350 Bioréacteur à usage unique et double compartiment, pour les cellules en suspension volume de milieu : 350 ml, volume de culture : 5 ml CELLine CL 1000 Bioréacteur à usage unique et double compartiment, pour les cellules en suspension volume de milieu : 1000 ml, volume de culture : 15 ml CELLine AD 1000 Bioréacteur à usage unique et double compartiment, avec insert matriciel pour les cellules dépendantes d un support volume de milieu : 1000 ml, volume de culture : 15 ml

5 Une expression de protéine facile et économique Simplicité d utilisation Simple de conception, le bioréacteur CELLine est aussi facile à utiliser qu un flacon de culture tissulaire. Pour contrôler la croissance des cellules, l observation directe au microscope est possible grâce à la transparence du bioréacteur. Le système fonctionne indépendamment de toute autre technique de contrôle cellulaire, systèmes de pompe ou dispositifs d agitation. Facilement empilables, stables, les flacons CELLine occupent un minimum d espace dans l incubateur à CO 2. Pour commencer à travailler avec CELLine, il n est généralement pas nécessaire d adapter spécifiquement les techniques de culture ou la composition des milieux, tous les milieux, avec ou sans sérum, sont appropriés. Rentabilité Utiliser CELLine permet de faire des économies substantielles en culture cellulaire. Les coûts de main-d œuvre sont considérablement réduits, car, par rapport aux autres techniques de culture, moins de flacons doivent être traités pour obtenir plusieurs milligrammes de protéines. De même, les dépenses en suppléments de culture sont diminuées de façon significative, l ajout de sérum ou autres additifs synthétiques pouvant se limiter au compartiment cellulaire. Enfin, la haute productivité et qualité du produit obtenu dans un faible volume de liquide contribuent à réduire les coûts et temps de travail liés aux étapes de traitement en aval. Analyse économique de la production de mab Productivité Unités CELLine 1000 Flacon T 225cm 2 Productivité de l hybridome pg/h x cellules 0,3 0,3 (données de la littérature) Densité cellulaire cellules / ml 3x10 7 1x10 6 Volume de culture ml Rendement par récolte (7 jours) mg 30,24 2,52 concentration en mab mg/ml 1,51 0,05 Coûts de production (250 mg mab) Quantité Coût (en $) Quantité Coût (en $) Récolte par contenant à usage unique 8 1 Nombre de contenants à usage unique Milieu (20 $ par litre) litres Consommation en sérum* (300 $ par litre) ml 16 4, Travail** (25 $ par heure) min Coût total 364,8 758 Costs per mg mab 1,46 3,03 * Le milieu est complété avec 10 % de sérum. Dans le cas de CELLine, seul le milieu du compartiment cellulaire est complété. ** Le calcul du temps de travail est basé sur le temps nécessaire à l inoculation et la récolte d un flacon CELLine (15 min) ou flacon en T (5 min), multiplié respectivement par le nombre de récoltes ou flacons. Pour le bien des animaux CELLine est un bioréacteur à usage unique concurrentiel, en termes de coûts et de performances, à la production d'anticorps monoclonaux à partir d ascites de souris. En outre, utiliser CELLine pour exprimer des anticorps monoclonaux d hybridomes permet d obtenir une préparation d anticorps exempte de toute contamination par des immunoglobulines de souris. Ces dernières années, la technologie CELLine été adoptée avec succès dans le monde entier pour la production d'anticorps monoclonaux et a ainsi contribué à diminuer l'utilisation de souris de laboratoire.

6 Des problèmes pour exprimer suffisamment de protéines recombinantes? Augmentez votre production d'anticorps monoclonaux ou de protéines recombinantes en cultivant les cellules à des densités plus élevées avec CELLine, le bioréacteur à usage unique basé sur une technologie à double compartiment. Expression efficace des protéines Des concentrations de produit 50 à 100 fois supérieures à celles des consommables de culture cellulaire classiques Simplicité d utilisation Aussi simple d emploi qu un flacon de culture tissulaire Rentabilité 90% de suppléments en moins et un temps de manipulation réduit Applications Production d'anticorps monoclonaux dans des hybridomes Expression de protéines recombinantes dans des cellules transfectées Production de virus Préservation permanente des cultures pour des études à long terme Culture cellulaire à haute densité INTEGRA Biosciences AG CH-7205 Zizers, Switzerland T F _V03_Flyer_CELLine_FR INTEGRA Biosciences SAS Cergy-Pontoise Cedex, France T +33 (0) F +33 (0)

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