pratique quotidienne Evaluation of the Unicel TM DXC 600 (Beckman Coulter) and comparison with Integra 800 (Roche Diagnostics )

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1 mesure des paramètres de biochimie, pharmacologie et toxicologie clinique, ainsi que le dosage spécifique des protéines par immunoturbidimétrie. L objectif de ce travail a été d évaluer les performances analytiques du sysabc Ann Biol Clin 2007 ; 65 (5) : Évaluation des performances analytiques du système Unicel TM DXC 600 (Beckman Coulter) et étude de la transférabilité des résultats avec l Integra 800 (Roche diagnostics ) Evaluation of the Unicel TM DXC 600 (Beckman Coulter) and comparison with Integra 800 (Roche Diagnostics ) A. Servonnet 1 H. Théfenne 2 A. Boukhira 1 P. Vest 1 C. Renard 1 1 Hôpital d Instruction des armées Percy, Clamart <a_servonnet@yahoo.fr> 2 Hôpital d Instruction des Armées du Val de Grâce, Paris Article reçu le 10 avril 2007, accepté le 5 juin 2007 Résumé. Le système Unicel TM DXC 600 est un analyseur multiparamétrique, commercialisé par la société Beckman Coulter, permettant la mesure des paramètres de biochimie usuels (électrolytes, substrats et enzymes), de pharmacologie et toxicologie cliniques ainsi que le dosage spécifique de protéines. Ainsi, nous avons évalué, selon les recommandations du protocole de validation de techniques de la Société française de biologie clinique, les paramètres suivants : électrolytes (sodium, potassium, chlorures, CO 2 total), substrats (acide urique, calcium, phosphates, glucose, créatinine, urée, cholestérol total, cholestérol HDL, bilirubine, fer, triglycérides), enzymes (ALAT, ASAT, amylase, CK, GGT, LDH, lipase, PAL), protéines totales et spécifiques (albumine, CRP, haptoglobine). L imprécision observée pour la majorité des analytes testés est excellente, par contre la transférabilité des résultats avec ceux obtenus sur l Intégra 800 (Roche Diagnostics ) nécessite pour certains paramètres l emploi de facteurs de corrélation. Mots clés : analyseur, évaluation, biochimie clinique Abstract. The Unicel TM DXC 600 is an automated analytical system from Beckman Coulter for measuring usual biochemistry parameters (electrolytes, substrates and enzymatic activities), therapeutic drugs, drugs of abuse and specific proteins. According to the Société française de biologie clinique (SFBC) validation protocol, we tested the following parameters: electrolytes (sodium, potassium, chloride, total CO 2 ), substrates (uric acid, calcium, phosphate, glucose, creatinine, urea, cholesterol, HDL cholesterol, bilirubin, iron, triglycerides), enzymes (ALAT, ASAT, amylase, CK, GGT, LDH, lipase, ALP), total proteins and specific proteins (albumin, CRP, haptoglobin). The results confirm the excellent analytical performances regarding imprecision. The comparison study shows differences between values obtained with Unicel TM DXC 600 and Integra 800 (Roche diagnostics ), leading to the use of correcting factors for some parameters. Key words: clinical chemistry, analyser, evaluation doi: /abc Le système Unicel TM DXC 600 est un analyseur multiparamétrique ouvert de biochimie commercialisé par la société Beckman Coulter. Il représente une évolution dans la gamme des analyseurs de cette société et permet la Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre

2 tème Unicel TM DXC 600 pour les paramètres les plus fréquemment dosés dans notre pratique quotidienne : électrolytes (sodium, potassium, chlorures, CO 2 total), substrats (acide urique, calcium, phosphates, glucose, créatinine, urée, cholestérol total, cholestérol HDL, bilirubine, fer, triglycérides), enzymes (ALAT, ASAT, amylase, CK, GGT, LDH, lipase, PAL), protéines totales et spécifiques (albumine, CRP, haptoglobine). Les résultats obtenus ont été comparés à ceux de l Intégra 800 (Roche Diagnostics ) actuellement utilisé dans notre laboratoire afin d étudier la transférabilité des résultats entre les deux automates. En effet, malgré la standardisation des techniques et la publication de recommandations internationales (recommandations IFCC pour le dosage des enzymes) ou l existence de matériaux de référence (CRM 470 pour les protéines spécifiques), des différences significatives sont observées entre les différentes techniques de dosage disponibles sur le marché pour de nombreux paramètres biologiques. L évaluation a respecté les recommandations de la commission de validation de technique de la Société française de biologie clinique (SFBC) regroupées dans le protocole Valtec [1]. Matériel et méthodes Descriptif de l analyseur Unicel TM DXC 600 Caractéristiques générales Le système Unicel TM DXC 600 est un analyseur ouvert possédant 65 paramètres en ligne. Il est composé de deux parties distinctes : un système de chimie modulaire comprenant un module à électrodes sélectives pour les dosages de sodium, potassium, chlorures, CO 2 total, calcium et glucose ; un module «chimie cartouche» pour le dosage des autres paramètres. Trois modes de mesure des analytes sont mis en œuvre : la potentiométrie, la spectrophotométrie cinétique et en point final et la turbidimétrie. Sa cadence analytique est estimée à 950 tests par heure. Système de traitement et d identification des spécimens L analyseur accepte différents types de spécimens : plasma, sérum, urines, LCR et liquides de ponction divers. Les échantillons sont chargés sur des portoirs à quatre positions, le prélèvement se faisant sur tubes primaires ou sur godets par deux sondes différentes pour les modules chimie modulaire et chimie cartouche (prise d essai variablede3à40ll selon les paramètres). Le système présente l avantage de pouvoir travailler sur tubes primaires bouchés. La détection du niveau de l échantillon est réalisée par radiofréquence et un système barométrique assure la détection de caillots de fibrine ou de microparticules dans le prélèvement. Il est possible à tout moment de charger un portoir avec un tube urgent. Système de traitement du milieu réactionnel Les analytes mesurés par le système chimie modulaire le sont par potentiométrie indirecte, sauf pour le glucose qui utilise une électrode sélective à membrane enzymatique avec mesure polarographique. Les réactions du système chimie cartouche se font dans des cuves en pyrex de trajet optique de 0,5 centimètre. Les réactifs liquides sont contenus dans des cartouches à trois compartiments et stockés dans un compartiment réfrigéré à+4 C. Système de traitement des mesures Le système Unicel TM DXC 600 comprend une lampe au xénon. Les mesures photométriques sont réalisées grâce à un système de détection par barrettes de diodes comprenant 10 longueurs d onde. Système de traitement et d exploitation des informations Le calibrage est de type linéaire ou non. Une calibration par lot et/ou par cartouche est réalisée selon les paramètres et il est possible de calibrer par avance un autre lot que celui en cours d utilisation. L analyseur est équipé d un système de détection des interférences visibles (ictère, hémolyse et turbidité). Pour certains paramètres il réalise un redosage automatique avec une prise d essai inférieure pour les concentrations supérieures au domaine de mesure (fonction «Ordac»). Méthode L objectif principal de ce travail était d étudier la transférabilité des résultats entre le système Unicel TM DXC 600 et l Integra 800. Les principales caractéristiques des techniques testées et de comparaison figurent dans le tableau 1. Ont été réalisées : une appréciation de l imprécision avec une étude de la répétabilité et de la reproductibilité. La répétabilité a été réalisée à un seul niveau de concentration sur des plasmas de patients en effectuant 20 mesures de chacun des paramètres en une seule série. La reproductibilité a été étudiée à partir des résultats obtenus sur les spécimens de contrôles à trois niveaux de concentration dosés quotidiennement pendant 3 semaines ; une étude de l inexactitude sur une cinquantaine de spécimens de patients, en comparant les résultats obtenus avec ceux de l Intégra 800. L exploitation statistique des résultats a été effectuée à l aide du logiciel PC Valtec 97 version Matériels biologiques Les spécimens de contrôle de qualité sont ceux commercialisés par la société Beckman Coulter pour les paramètres sanguins et par ProBioQual pour les paramètres urinaires : 556 Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre 2007

3 Système Unicel Tableau 1. Principales caractéristiques des techniques testées sur le système Unicel TM DXC 600 et des techniques de comparaison sur Intégra 800. Système Unicel TM DXC 600 Integra 800 Principe analytique Mesure λ (nm) Principe analytique Mesure λ (nm) Na + /K + /Cl - Potentiométrie indirecte Potentiométrie indirecte Acide urique Enzymatique Point final 520 Enzymatique Point final 520 Albumine Pourpre de bromocrésol Point final 600 Vert de bromocrésol Point final 583 Bilirubine totale Diazoréaction (caféine, benzoate) Point final 520 Diazoréaction (diphényldiazonium) Point final 552 Calcium Potentiométrie indirecte α-crésol-phtaléine complexon Point final 552 Cholestérol Enzymatique Point final 520 Enzymatique Point final 520 Cholestérol HDL Colorimétrie enzymatique (phase homogène) Point final 560 Colorimétrie enzymatique (phase homogène) Point final 583 CO 2 total Vitesse de changement de ph différentielle Cinétique Enzymatique Point final 378 Créatinine Cinétique Jaffé Cinétique 520 Cinétique Jaffé compensée (pour plasma) Cinétique 512 CRP Immunoturbidimétrie Cinétique 600 Immunoturbidimétrie Cinétique 552 Fer Ferrozine Point final 560 Ferrozine Point final 552 Glucose Glucose oxydase (consommation d O 2 ) Cinétique Hexokinase Point final 340 Haptoglobine Immunoturbidimétrie Point final 340 Immunoturbidimétrie Point final 340 Phosphates Phosphomolybdate Cinétique 365 Phosphomolybdate Point final 340 Protéines totales Biuret Point final 545 Biuret Point final 552 Urée Enzymatique Cinétique 340 Enzymatique Cinétique 340 Triglycérides Enzymatique Point final 520 Enzymatique Point final 512 Enzymes ALAT IFCC avec phosphate de pyridoxal Cinétique 340 Non IFCC (sans phosphate de pyridoxal) Cinétique 340 ASAT IFCC avec phosphate de pyridoxal Cinétique 340 Non IFCC (sans phosphate de pyridoxal) Cinétique 340 ASAT sans PP* Non IFCC sans PP* Cinétique 340 Non IFCC sans PP* Cinétique 340 Amylase Substrat maltotétraose Cinétique 340 Substrat nitrophényl polyoside Cinétique 409 CK IFCC Cinétique 340 IFCC Cinétique 340 GGT IFCC (substrat non carboxylé) Cinétique 410 Szasz (substrat carboxylé) Cinétique 409 LDH Sens pyruvate vers lactate Cinétique 340 DGKC (pyruvate vers lactate) Cinétique 340 Lipase Colorimétrie Cinétique 560 Colorimétrie Cinétique 583 PAL Non IFCC/SFBC (tampon AMP) Cinétique 410 IFCC/SFBC (tampon AMP) Cinétique 409 * : phosphate de pyridoxal. Control Vigil Sérologie niveaux 1, 2 et 3, lots M504291, M et M pour la CRP ; Control Vigil Protein niveaux 1, 2 et 3, lots M503311, M et M pour l haptoglobine ; Control Synchron niveaux 1, 2 et 3, lots M505251, M et M pour tous les autres paramètres sanguins ; Contrôle ProBioQual lot L10, pour les analytes urinaires. Les spécimens de patients sont des plasmas prélevés sur héparinate de lithium (tubes Vacutainer ) ou des prélèvements urinaires recueillis sur Urin-Monovette sans conservateur. Ils ont été sélectionnés afin de couvrir l ensemble du domaine de mesure de chaque paramètre selon les recommandations du protocole Valtec [1]. Les échantillons ont été centrifugés durant 15 minutes à tours/min. Les analytes ont été dosés dans un délai de 2 heures avec la technique à évaluer et celle de comparaison. Résultats Les résultats de l étude de répétabilité, reproductibilité et de la comparaison de techniques figurent dans les tableaux 2 à 4. Imprécision L ensemble des résultats de l étude de répétabilité répond aux normes du protocole Valtec (tableau 2). Pour la reproductibilité, l ensemble des coefficients de variation est conforme aux normes du protocole Valtec excepté pour les niveaux bas d ALAT, d ASAT (avec phosphate de pyridoxal) et de bilirubine totale (tableaux 2 et 3). Pour ces paramètres, les coefficients de variation observés et les limites acceptables sont respectivement 11,9 % et 6,0 % pour l ALAT, 9,0 % et 6,0 % pour l ASAT, 11,4 % et 6,8 % pour la bilirubine. Le mode de calcul de cette inexactitude consiste en une comparaison de Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre

4 Tableau 2. Résultats de l étude de répétabilité (réalisée sur plasma de patient) et reproductibilité (réalisée sur sérum contrôle) pour les paramètres sanguins. Répétabilité (n = 20) Reproductibilité (n = 20) m CV(%) m CV(%) m CV(%) m CV(%) Albumine (g/l) 37,0 0,6 23,1 2,4 37,0 1,6 50,9 1,4 Acide urique (µmol/l) 308,3 0, , , ,1 Bilirubine totale (µmol/l) 20,1 4,5 14,5 11,4 66,6 2,4 118,8 2,0 Calcium (mmol/l) 2,31 0,4 1,87 1,8 2,61 1,5 3,32 1,8 Chlorures (mmol/l) 102 0,5 81 1, , ,2 Cholestérol (mmol/l) 5,13 1,2 2,7 2,2 4,3 1,9 5,8 1,6 Cholestérol HDL (mmol/l) 1,89 1,1 0,9 2,2 1,5 3,3 2,0 3,0 CO 2 total (mmol/l) 19,5 1,2 11,1 6,0 21,5 4,2 31,0 3,7 Créatinine (µmol/l) 110,1 1,5 47 4, , ,4 CRP (mgl/l) 11,4 2,3 16,1 1,4 52,9 3,1 84,7 4,6 Fer (mmol/l) 14,8 0,6 8,9 2,6 29,3 1,5 48,3 1,4 Glucose (mmol/l) 5,90 0,6 2,41 2,8 12,23 1,9 21,53 1,3 Haptoglobine (g/l) 0,10 2,0 0,82 2,0 1,36 1,4 1,85 1,6 Phosphore (mmol/l) 1,01 1,1 0,62 2,9 1,44 1,9 2,25 1,3 Potassium (mmol/l) 3,1 0,0 2,5 2,0 5,0 0,8 7,6 1,1 Protéines (g/l) 66,8 0,9 38 1,8 60 2,0 80 1,8 Sodium (mmol/l) 138,9 0, , , ,9 Urée (mmol/l) 4,4 2,3 3,0 3,0 13,0 2,2 23,1 2,9 Triglycérides (mmol/l) 0,87 1,2 0,78 2,1 1,23 2,4 1,67 1,8 Enzymes ALAT (U/L) 97,2 1, , , ,2 ASAT (U/L) 52,2 2,7 21 9, , ,4 ASAT sans PP (U/L) 51 1,2 21 5, , ,2 Amylase (U/L) 93,9 1,2 40 2, , ,1 CK (U/L) 149,0 0,7 59 4, , ,5 GGT (U/L) 61,6 3,8 NR* NR* 238 2, ,0 LDH (U/L) 386,0 1, , , ,7 Lipase (U/L) 30,6 2, ,7 66 3,8 26 5,3 PAL (U/L) 78,6 2,5 44 5, , ,4 n CV supérieur aux limites du protocole Valtec - * : Non Réalisé - : phosphate de pyridoxal. Tableau 3. Résultats de l étude reproductibilité pour les paramètres urinaires (spécimens de contrôle-qualité). Reproductibilité (n = 20) Moyenne CV (%) Acide urique (mmol/l) 1,04 1,0 Calcium (mmol/l) 2,04 2,6 Chlorures (mmol/l) 73 3,2 Créatinine (mmol/l) 8,6 5,0 Phosphore (mmol/l) 4,09 1,3 Potassium (mmol/l) 39 1,0 Protéines (g/l) 0,38 1,6 Sodium (mmol/l) 72 3,5 Urée (mmol/l) 224,8 2,0 Comparaison de techniques L ensemble des coefficients de corrélation sont compris entre 0,97 et 1,00 excepté pour le CO 2 total (r = 0,94). Les pentes des équations des droites de Passing Bablok varient quant à elles de 0,58 à 1,30. L inexactitude observée est refusée à au moins un des niveaux de concentration pour les paramètres suivants : calcium sanguin et urinaire, créatinine, potassium, albumine, CRP, bilirubine, cholestérol HDL et les enzymes (amylase, ALAT, ASAT avec phosphate de pyridoxal, CK, GGT, LDH, lipase et PAL). Discussion l inexactitude calculée grâce à l équation pour différents niveaux de concentrations, par rapport aux limites d acceptabilité proposées par le protocole Valtec. Imprécision Les coefficients de variation (CV) obtenus pour l étude de répétabilité sont excellents. Les CV de reproductibilité 558 Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre 2007

5 Système Unicel Tableau 4. Récapitulatif des résultats de la comparaison des techniques. Analyte N Passing Bablok (DXC 600 en Y) r Conclusions Valtec au niveau* Bas Moyen Élevé Domaine testé Acide urique (µmol/l) 62 Y = 0,92 X + 16,15 1,00 A A A Acide urique urinaire (mmol/l) 49 Y = 0,91 X + 0,11 1,00 A A A 0,3-7,2 Albumine (g/l) 54 Y = 1,15 X 7,61 0,99 R A A Bicarbonates (mmol/l) 52 Y = 1,00 X 0,20 0,94 A A A Bilirubine (µmol/l) 65 Y = 0,85 X + 3,12 0,99 A A R Calcium total (mmol/l) 49 Y = 0,94 X + 0,05 0,98 A A R 1,7-3,9 Calcium urinaire (mmol/l) 52 Y = 0,78 X + 0,20 0,99 A R R 1-12 Chlorures (mmol/l) 55 Y = 1,00 X + 3,00 0,97 A A A Cholestérol (mmol/l) 51 Y = 1,02 X + 0,04 1,00 A A A 2-8 Cholestérol HDL (mmol/l) 52 Y = 0,89 X 0,09 0,98 R R A 0,1-2,4 Créatinine (µmol/l) 59 Y = 0,94 X + 19,65 1,00 R A A Créatinine urinaire (mmol/l) 58 Y = 1,09 X + 0,11 1,00 A A A 0,5-16 CRP (mg/l) 51 Y = 1,30 X 2,77 1,00 A R R 2,9-500 Fer (µmol/l) 52 Y = 0,99 X 0,48 1,00 A A A 1-48 Glucose (mmol/l) 52 Y = 0,96 X + 0,29 1,00 A A A 1-25 Glucose urinaire (mmol/l) 73 Y = 0,97 X + 0,23 1,00 A A A 0,1-82 Haptoglobine (g/l) 50 Y = 0,97 X + 0,03 0,98 A A A 0,1-5,34 Magnésium (mmol/l) 54 Y = 1,02 X 0,02 0,99 A A A 0,3-1,55 Phosphates (mmol/l) 52 Y = 1,00 X + 0,02 0,99 A A A 0,2-3,0 Phosphates urinaires (mmo/l) 52 Y = 1,00 X + 0,02 1,00 A A A 2-60 Potassium (mmol/l) 51 Y = 1,00 X 0,20 0,99 R A A 2,5-9 Potassium urinaire (mmol/l) 51 Y = 0,97 X 0,54 0,99 A A A Protéines totales (g/l) 54 Y = 0,98 X 0,48 0,98 A A A Sodium (mmol/l) 59 Y = 0,92 X + 11,42 0,97 A A A Sodium urinaire (mmol/l) 51 Y = 0,99 X 0,74 0,99 A A A Urée (mmol/l) 62 Y = 1,03 X + 0,13 1,00 A A A 1-44 Urée urinaire (mmol/l) 52 Y = 0,92 X + 9,66 1,00 A A A Triglycérides (mmol/l) 50 Y = 0,98 X 0,05 1,00 A A A 0,3-3,5 Amylase (U/L) 56 Y = 1,17 X 4,35 1,00 A A R ALAT (U/L) 64 Y = 1,26 X + 0,58 0,99 R R R ASAT (U/L) 56 Y = 1,28 X 4,94 1,00 A R R ASAT sans PP (U/L) 56 Y = 1,00 X 2,00 1,00 A A A CK (U/L) 55 Y = 1,08 X + 10,42 1,00 R R A GGT (U/L) 52 Y = 1,15 X 1,15 1,00 A A R LDH (U/L) 58 Y = 1,22 X + 14,62 0,98 R R R Lipase (U/L) 67 Y = 0,58 X + 6,96 1,00 R R R PAL (UI/L) 54 Y = 0,84 X + 5,79 1,00 A A R * : A pour accepté ; R pour refusé ; : phosphate de pyridoxal. obtenus pour les niveaux bas de bilirubine, d ASAT (avec phosphate de pyridoxal) et d ALAT sont supérieurs aux limites du protocole Valtec, mais l imprécision observée est sans conséquence clinique. Lasnier et al. [2] ont également retrouvé des CV élevés pour ces paramètres à des concentrations similaires (respectivement 10,2 %, 12,5 % et 17,7 %). Comparaison de techniques Tous les coefficients de corrélation observés sont supérieurs à 0,94 ; cependant, des différences significatives ont été observées pour 43 % des paramètres testés. En effet, les différences de méthodologies mises en œuvre nécessitent pour certains tests l introduction de facteurs de corrélation dans l un des analyseurs afin d assurer une meilleure transférabilité des résultats, c est-à-dire moins de 10 % de résultats déviants sur le diagramme des différences. Nous axerons donc notre discussion sur ces analytes. L albumine est dosée par des techniques colorimétriques, au pourpre de bromocrésol sur le système Unicel TM DXC 600 et au vert de bromocrésol sur l Intégra 800 Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre

6 (tableau 1). Nos résultats sont conformes à ceux observés par Coudène et al. [3] avec ces deux méthodologies, c està-dire des résultats significativement différents pour des concentrations inférieures à 30 g/l. En effet, l erreur constante estimée à - 7,61 g/l par l équation de la droite de Passing Bablok entraîne le rejet des valeurs basses (20 g/l). Le calcium est mesuré par potentiométrie indirecte sur le système Unicel TM DXC 600 et par colorimétrie sur l Integra 800. L inexactitude observée est refusée à partir de 3,4 mmol/l pour le calcium sanguin et à partir de 2,5 mmol/l pour le calcium urinaire. Le dosage du calcium par une technique répondant aux critères de qualité définis par la SFBC reste difficile, comme le montre d ailleurs l analyse des résultats d évaluations externes de la qualité. Concernant la créatinine, seules les valeurs basses ont été refusées (inexactitude observée égale à 17 lmol/l pour une inexactitude tolérable égale à 8 lmol/l). Bien que les deux analyseurs utilisent la technique de Jaffé, la réaction mise en œuvre sur l Intégra 800 est «compensée» contrairement à celle du système Unicel TM DXC 600. Pour tenir compte de l interférence liée aux protéines, 18 lmol/l sont soustraites lors du dosage avec la technique Roche Intégra, ce qui peut expliquer l erreur constante observée (+ 19,7 lmol/l) et donc les différences pour les faibles concentrations (50 lmol/l). Par ailleurs, la SFBC souligne que trois groupes de méthodes peuvent être identifiés pour le dosage de la créatinine : les Jaffé classiques, les Jaffé «compensés» et les méthodes enzymatiques avec une forte dispersion inter-techniques des résultats [4]. Une standardisation des méthodes, dont celle mise en œuvre sur Unicel TM DXC 600, par rapport à la spectrométrie de masse est en cours. Nous pouvons donc espérer dans l avenir une meilleure transférabilité des résultats plasmatiques à l instar de celle observée pour les urines. Pour le potassium, bien que la pente de la droite de corrélation soit égale à 1,00, l ordonnée à l origine de la droite de Passing Bablok (- 0,2) conduit au rejet des valeurs basses (2 mmol/l). L inexactitude observée est de 0,2 mmol/l pour une inexactitude tolérable de 0,1 mmol/l. Cependant, nous n avons pas étudié de concentrations inférieures à 2,8 mmol/l ; l équation de la droite de régression serait peut-être modifiée en explorant cette zone de concentration. Notons que Lasnier et al. [2] ont également rapporté une inexactitude observée refusée pour ce niveau de concentration (comparaison à l Olympus AU 640). D autre part, il faut préciser qu il n y a aucun rejet pour la comparaison des résultats urinaires mais les concentrations testées sont plus élevées. Pour la bilirubine, l erreur proportionnelle observée est de - 15 %, et seul le niveau élevé (150 lmol/l) est rejeté avec une inexactitude observée de 22,4 lmol/l pour une inexactitude tolérable de 20,4 lmol/l. Là aussi, cette différence est probablement liée à la différence de méthodologie avec en particulier le type d accélérateur choisi pour la réaction de diazocopulation (tableau 1). Pour le cholestérol HDL, les niveaux bas (0,8 mmol/l) et moyen (1,4 mmol/l) sont refusés mais les différences entre inexactitudes calculées et tolérables sont faibles : respectivement 0,18 pour 0,13 et 0,24 pour 0,22. Cependant, ces concentrations sont proches de la valeur seuil de 1,0 mmol/l, en deçà de laquelle un facteur de risque cardiovasculaire supplémentaire est pris en compte pour le patient. L étude des résultats des évaluations externes de la qualité (contrôle hebdomadaire ProBioQual) montre que le CV toutes techniques est le plus souvent supérieur à 10 % pour les faibles concentrations de cholestérol HDL. Pour la CRP, l erreur proportionnelle est de + 30 % pour la comparaison avec l Intégra 800, alors que les deux méthodes sont standardisées par rapport au CRM 470 (figure 1). En corrigeant les données du système Unicel TM DXC 600 grâce à l équation de la droite de Passing Bablok obtenue et en limitant aux valeurs de CRP supérieures à 7,5 mg/l (limite supérieure de l intervalle de référence), le nombre de résultats hors limites devient inférieur à 10 % sur le diagramme des différences. Ainsi, pour doser la CRP à des concentrations très faibles, il est préférable d utiliser le réactif CRP haute sensibilité dont la limite de détection fonctionnelle est estimée à 0,18 mg/l [5]. Soulignons qu une erreur proportionnelle CRP Domaine testé : 0 à 500 mg/l Couples : 51 Y 500 INTEGRA (X) Moyenne : 112, Écart-type 95, Période de validation : Passing-Bablok DXC600 (Y) Moyenne : 145,90 Écart-type 125,902 Passing-Bablok Niveau X Y calculé Inexactitude Inexactitude Conclusions tolérable observée Bas 15,0 16,8 2,7 1,8 Accepté Moyen 50,0 62,4 8,0 12,4 Refusé Élevé 100,0 127,5 15,0 27,5 Refusé Figure 1. Droite de corrélation pour la CRP. X 560 Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre 2007

7 Système Unicel de + 33 % a aussi été retrouvée lors de la comparaison du système Unicel TM DXC 600 avec la technique immunoturbidimétrique mise en œuvre sur Dimension RxL (Dade Behring) également standardisée par rapport au CRM 470. Pour cette comparaison (réalisée sur une série de prélèvements différente de celle utilisée pour établir la corrélation entre le DXC 600 et l Integra 800 ), la droite de régression obtenue est Y = 1,33X - 2,53 (avec Y = DXC 600 et X = RxL). Pour vérifier qu il ne s agissait pas d un problème de calibrage, nous avons dosé le CRM 470 (titré à 39,2 mg/l) sur les trois analyseurs. Les résultats sont les suivants : 38,8 mg/l pour le système Unicel TM DXC 600 (inexactitude = 1,02 %), 38,3 mg/l pour l Integra 800 (inexactitude = - 2,21 %) et 39,9 mg/l pour le RxL (inexactitude = + 0,7 %). Le comportement des trois techniques vis-à-vis du CRM 470 est donc homogène et ne permet pas de reproduire ce que nous avons observé sur les spécimens de patients. Pour l haptoglobine, l inexactitude observée n est pas refusée mais le nombre de spécimens hors limites sur le diagramme des différences est élevé. Cependant, il passe de 32 % à 9 % lorsque le domaine des concentrations testé ne dépasse pas 3,0 g/l, cette concentration étant la limite supérieure du domaine de mesure sans la fonction «Ordac» pour le système Unicel TM DXC 600 (figure 2). Ce problème, déjà identifié par Beckman Coulter, devrait être pris en compte dans les évolutions futures du réactif et serait lié d après Lasnier et al. [2] à un facteur de dilution du spécimen trop important (1/100 e contre 1/20 e ). Malgré la publication de recommandations internationales (LDH, CK, ALAT, ASAT et GGT) des progrès notables sont encore attendus dans la standardisation en enzymologie clinique [6]. Ce phénomène est bien illustré par les résultats obtenus lors des campagnes d évaluation externe de la qualité ou lors de comparaisons de techniques au cours d une évaluation comme celle que nous avons menée. Pour les LDH nous avions choisi la méthode référencée LD-P pour le système Unicel TM DXC 600 afin que le principe réactionnel soit identique à celui mis en œuvre sur l Integra 800 (sens pyruvate vers lactate). Malgré cela, nous notons une erreur proportionnelle de + 22 % et une erreur systématique de 14,6 U/L. La mesure de l activité des ASAT et des ALAT est réalisée par des techniques avec ou sans réactivation des enzymes par le phosphate de pyridoxal (tableau 1). Quand les enzymes sont réactivées par le phosphate de pyridoxal sur le système Unicel TM DXC 600, ceci conduit logiquement à des activités enzymatiques plus fortes par rapport à l Integra 800 (erreurs proportionnelles respectivement de + 28 et + 26 % pour l ASAT et l ALAT). Par contre, en utilisant le réactif Beckman sans phosphate de pyridoxal pour l ASAT, la transférabilité des résultats entre les deux systèmes est bonne. Pour les CK, l erreur systématique de + 10,4 U/L, combinée à une erreur proportionnelle de +4%, a un poids important sur le calcul de l inexactitude observée aux valeurs basses (50 U/L) et moyennes (100 U/L). Mais les écarts observés n auront qu une incidence limitée d un point de vue clinique (inexactitude observée respectivement de 13 et 17 U/L pour une inexactitude tolérable de 8 et 13 U/L). Concernant l amylase, les GGT et les PAL, seule l inexactitude observée sur le niveau élevé est rejetée. Pour la lipase, l erreur proportionnelle observée (- 42 %) souligne l absence de standardisation entre les techniques ; cependant, la corrélation est parfaite (r = 1). Pour la mesure des activités enzymatiques, les coefficients de corrélation étant tous supérieurs à 0,98, la correction des résultats de l Unicel TM DXC 600 par les équations des droites de corrélation avec l Intégra 800 permet de limiter à moins de 10 % le nombre de spécimens déviants sur le diagramme des différences. Même si l utilisation de facteurs de correction n est pas recommandée lorsque les écarts sont trop importants et qu il est dans ce cas préférable d établir de nouvelles valeurs pour la méthode de dosage mise en place, nous avons appliqué un facteur de correction pour la mesure de ces activités afin d utiliser le système Unicel TM DXC 600 en «back-up» de l Integra 800. Haptoglobine Y 5,50 4,40 3,30 2,20 1,10 Domaine testé : 0 à 5,50 g/l Couples : 50 0,00 0,00 1,10 2,20 3,30 4,40 5,50 Niveau Bas Moyen Élevé X 0,50 1,50 3,00 Y calculé 0,52 1,49 2,94 Inexactitude tolérable 0,10 0,26 0,41 Inexactitude observée 0,02 0,01 0,06 Période de validation : Passing-Bablok Figure 2. Droite de corrélation pour l haptoglobine. INTEGRA (X) Moyenne : 2,156 Écart-type : 1,451 DXC600 (Y) Moyenne : 1,990 Écart-type : 1,271 Passing-Bablok Y = 0,97 X + 0,03 Corrélation : 0,98 X Conclusions Accepté Accepté Accepté Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre

8 Conclusion L objectif principal de cette étude a été d évaluer les performances analytiques des réactifs utilisés sur le système Unicel TM DXC 600 et d étudier la transférabilité des résultats avec ceux obtenus sur l Integra 800. La répétabilité et la reproductibilité des analytes évalués sont jugées très satisfaisantes. Les comparaisons de techniques avec l Integra 800 sur des spécimens de patients, montrent dans l ensemble une bonne corrélation. Pour améliorer la transférabilité des résultats il est cependant nécessaire de corriger les valeurs rendues par le système Unicel TM DXC 600 pour les analytes suivants : albumine, calcium urinaire, créatinine, CRP, cholestérol HDL, et les enzymes (ALAT, ASAT, CK, GGT, LDH, lipase et PAL). Remerciements. Nous remercions la société Beckman Coulter pour nous avoir fourni les réactifs nécessaires à cette évaluation. Nous remercions Mademoiselle Guillope qui a permis la réalisation technique de ce travail. Références 1. Vassault A, Grafmeyer D, de Graeve J, Cohen R, Beaudonnet A, Bienvenu J. Analyses de biologie médicale : spécifications et normes d acceptabilité à l usage de la validation de techniques. Ann Biol Clin (Paris) 1999 ; 57 : Lasnier E, Mario N, Lefort A, Vaubourdolle M. Evaluation of the Beckman Coulter UniCel DxC 800 PRO Synchron clinical chemistry analyzer. Clin Chem 2006 (Suppl.) : A6-A7. 3. Coudène P, Marson B, Badiou S, et al. Evaluation of the ABX Pentra 400 : a newly available clinical chemistry analyser. Clin Chem Lab Med 2005 ; 43 : Cristol JP. L insuffisance rénale chronique : une nécessaire collaboration clinico-biologique. Ann Biol Clin (Paris) 2006 ; 64 : Théfenne H, Boukhira A, Bigaillon C, et al. Evaluation des réactifs de dosage de la CRP et de l haptoglobine sur le système Unicel TM DXC e colloque Corata. Bruges, Férard G, Lessinger J-M, Schiele F, Vialle A. Les nouvelles recommandations internationales pour la détermination d activités enzymatiques à 37 C. Ann Biol Clin (Paris) 2003 ; 61 : Ann Biol Clin, vol. 65, n 5, septembre-octobre 2007