Pr Cédric Le Caignec Service de Génétique Médicale Coordonnateur du centre de DPI de Nantes CHU Nantes CPDPN, 17 janvier 2014
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- Maximilien Dumouchel
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1 Après une IMG pour anomalie génétique parentale caractérisée : place du Diagnostic Pré-Implantatoire (DPI) Pr Cédric Le Caignec Service de Génétique Médicale Coordonnateur du centre de DPI de Nantes CHU Nantes CPDPN, 7 janvier 204
2 Après une IMG pour anomalie génétique parentale caractérisée : place du Diagnostic Pré-Implantatoire (DPI) Le DPI est une méthode diagnostique qui permet de sélectionner un embryon exempt d une maladie génétique, d une anomalie chromosomique ou d une maladie liée au sexe chez un couple à risque après une fécondation in vitro DPI: alternative au diagnostic prénatal en France, seulement l anomalie génétique familiale En Grande-Bretagne depuis 990 En France loi du 29 juillet 994 (en pratique, depuis 2000)
3 Groupes d indications du DPI - Identification d une mutation dans une maladie monogénique 2 - Identification d une anomalie chromosomique 3 - Détermination du sexe de l embryon dans les maladies liées au chromosome X 4 - Bébé HLA compatible
4 - Maladies monogéniques Transmission autosomique dominante 50% embryons sains
5 Demandes examinées 20% Strasbourg Paris Montpellier 9.5% 9.5% 4.9%
6 - Maladies monogéniques Transmission autosomique récessive 75% embryons sains
7 Demandes examinées 20% Strasbourg Paris Montpellier 2.9% 5.6% 37.5%
8 - Maladies monogéniques Transmission liée à l X
9 Demandes examinées 20% Strasbourg Paris Montpellier 20% 26.7%
10 2 - Identification d un déséquilibre chromosomique DPI «chromosomique» En France - Translocation Robertsonienne parentale équilibrée
11 Translocation Robertsonienne parentale équilibrée t(4;2) Mais la plus fréquente: t(3;4)
12 2 - Identification d un déséquilibre chromosomique DPI «chromosomique» En France - Translocation Robertsonienne parentale équilibrée -Translocation réciproque parentale équilibrée
13 Translocation Réciproque parentale équilibrée t(6;0)(p25;q26) Der(6) t(6;0)(p25;q26) t(6;0)(p25;q26) Der(6) Der(0) t(6;0)(p25;q26) Der(0)
14 2 - Identification d un déséquilibre chromosomique En France DPI «chromosomique» Demandes examinées 40% 3% 6% Strasbourg Paris Montpellier
15 3 - Détermination du sexe de l embryon Par FISH (préférable) ou par PCR 4 - Bébé HLA compatible Loi du 6 août 2004 Identifier les embryons HLA compatible avec un frère/sœur atteint + indemne d une pathologie récessive Probabilité 3/6 soit 8% (compatible (/4) et sains (3/4)) Mais en fait: 4% Exemple: thalassémie, anémie de Fanconi...
16 Principe de la technique Biopsie embryonnaire: ou 2 blastomères d un embryon au stade 6-0 cellules (J3) pour un transfert à J4-J5
17
18 DPI pour maladies monogéniques en pratique
19 Principe de la technique - Analyse directe par PCR mini-séquençage => quand mutation familiale identifiée A C A G C T A T T T G C C G A C A A Hétérozygote G->A (C234Y) Mini séquençage (Snap Shot)
20 Principe de la technique Maladies monogéniques 2 - Analyse indirecte
21 MUCO D7S480 TA7 p.phe508del p.phe508 Normal D7S486 AC8 ICA AC7
22 STEINERT 5 CTG / 3 CTG D9S2 D9S29 D9S207 D9S562 D9S27 D9S27
23 Difficultés du DPI - Diagnostic à partir d une cellule: une seule chance 2- Éviter les contaminations 3- Diagnostic mis au point pour chaque famille - Importance de l informativité - Mutation identifiée ou non 4- Risque d «allele drop out» (ADO)
24 4- Risque d «allele drop out» (ADO)
25 Famille Mucoviscidose D7S486 (0.2cM) ICA AC8 p.508 AC7 TA7 D7S480 (2cM) CFTR p.phe508del NORMAL p.phe508del NORMAL p.phe508del p.phe508del cen tel
26 Famille Mucoviscidose D7S486 (0.2cM) ICA AC8 p.508 AC7 TA7 D7S480 (2cM) CFTR p.phe508del NORMAL p.phe508del NORMAL sain sain sain atteint NORMAL NORMAL p.phe508del p.phe508del NORMAL NORMAL p.phe508del p.phe508del cen tel
27 DPI chromosomique en pratique
28 DPI chromosomique Principe de la technique => technique d hybridation in situ en fluorescence (FISH)
29 Validation des sondes sur les lymphocytes du couple
30 DPI chromosomique => technique d hybridation in situ en fluorescence (FISH) Cellule trisomique 2
31 Actuellement, 4 centres de DPI en France -Paris -Strasbourg -Montpellier -Nantes Activité 250 cycles par an par centre - cycles de stimulation 5-20% - après ponction 20-25% - après transfert 25-30%
32 Le DPI en pratique à Nantes Constitution du dossier demande de DPI coordonnées du couple courrier médicaux, arbre généalogique résultats des analyses génétiques caryotype parentaux si possible bilan AMP (AMH, CFA) Staff DPI, Staff CPDPN Mise au point technique Consultation pluridisciplinaire Programmation de la tentative Sécretariat DPI: Tél.:
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