ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d Cartes Cartes

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1 ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d Cartes Cartes GEL FORMULE AVEC UNE ANTIGLOBULINE POLYSPECIFIQUE (FRACTIONS POLYCLONALE ET MONOCLONALE MURINE) Recherche d anticorps irréguliers, compatibilité, test direct à l antiglobuline, phénotypage érythrocytaire IVD Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d assurance qualité de la réception des matières premières jusqu à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l objet d un contrôle de qualité et n est commercialisé que s il est conforme aux critères d acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant. 11

2 I - UTILISATION ET PRINCIPE DU TEST Cette carte est strictement réservée à des usages professionnels et diagnostiques in vitro. Destiné à la recherche (dépistage et identification) des anticorps irréguliers anti-érythrocytaires, à l épreuve de compatibilité, au test direct à l antiglobuline (Coombs direct) et au phénotypage érythrocytaire, le test associe les principes d agglutination et de filtration sur gel. La réaction est obtenue et lue après centrifugation de microtubes spécialement conçus, remplis de gel imprégné du réactif antiglobuline. La suspension de globules rouges et, si nécessaire, le sérum ou le plasma sont déposés dans la cupule des microtubes et centrifugés après ou non (suivant le test) une période d incubation. Les globules rouges non agglutinés sont collectés au fond du microtube, tandis que les agglutinats sont retenus dans la hauteur de gel en fonction de leur taille. Leur position dans le gel détermine l intensité de la réaction La capacité du gel à séparer les globules rouges du sérum ou du plasma supprime la phase de lavage obligatoire des techniques conventionnelles. II - CARACTÉRISTIQUES DES RÉACTIFS Les microtubes de la carte ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d contiennent un gel imprégné du réactif antiglobuline polyspécifique (AHG). La fraction anti-igg est préparée à partir de sérums de chèvres hyperimmunisées. La fraction anti-complément est préparée à partir d un mélange de sérums de chèvres hyperimmunisées et d un anticorps monoclonal murin de spécificité anti-c3d produit à partir du clone 053A714. Ce réactif contient de l'azide de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. Le code produit et le nombre de cartes par boite sont mentionnés sur l'étiquette de la boîte. III - CONSERVATION - VALIDITÉ La date limite d utilisation et les conditions de stockage sont indiquées sur la boîte. Les cartes doivent être conservées à température ambiante de +15 C à +25 C. Les cartes doivent être stockées verticalement à l abri de toute source de chaleur dans un local où température et hygrométrie sont peu variables. 12

3 IV - AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS La fiabilité des résultats dépend de la bonne exécution des Bonnes Pratiques de Laboratoire suivantes : Ne pas utiliser de réactifs au-delà de la date de péremption indiquée sur l étiquette. Ne pas utiliser de cartes montrant des signes de dessèchement, des bulles, une languette de scellage endommagée ou partiellement enlevée. Il est indispensable de prendre les précautions nécessaires pour ne pas provoquer de contaminations inter-microtubes et ce, particulièrement lors des étapes de distribution. Utiliser un embout de pipette différent pour chaque échantillon et pour chaque réactif ou globule rouge test. Vérifier la précision et le bon fonctionnement des pipettes et autres équipements. Porter des gants et des lunettes de sécurité lors de la manipulation de réactifs et d échantillons. Ne jamais pipeter directement à la bouche. Eviter les éclaboussures. En cas d éclaboussures, nettoyer avec de l eau de javel à 12 Cl diluée au 1/10, et essuyer avec un papier absorbant. Le matériel utilisé pour nettoyer devra être jeté dans un container pour résidus contaminés. Les consommables et produits ayant été en contact avec les échantillons de patients ou des réactifs d origine humaine ne doivent être éliminés qu après décontamination. Les fiches de sécurité sont disponibles sur demande. V - RECUEIL ET TRAITEMENT DES ÉCHANTILLONS Le sang doit être prélevé aseptiquement dans un tube sans ou avec anticoagulant (EDTA, CPD). Pour le test direct à l antiglobuline (Coombs direct), l utilisation d un prélèvement sur anticoagulant est recommandé (EDTA). Le test doit être pratiqué le plus tôt possible après le recueil. Les échantillons qui ne peuvent être analysés rapidement devront être conservés entre +2 C et +8 C et testés dans les 48 heures. Pour le test direct à l antiglobuline (Coombs direct), les échantillons prélevés sur tube sec ne doivent pas être testés après réfrigération. En aucun cas une hémolyse ne doit être visible. Ne pas chauffer les échantillons. 13

4 VI - TECHNIQUES Matériel fourni Cartes ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d. Autre matériel nécessaire non fourni ScanLiss : milieu de suspension des globules rouges ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie IH QC 4 x 6 ml Centrifugeuse : ScanGel Centrifuge Incubateur : ScanGel incubator Pipettes automatiques ou semi-automatiques Embouts de pipette Tubes à usage unique Récipient pour déchets à risques biologiques Eau de Javel Gants latex Lunettes de sécurité Papier absorbant 1. Dépistage et identification des anticorps irréguliers anti-érythrocytaires Contrôles Il est recommandé d'effectuer en parallèle à chaque test un auto-contrôle (sérum ou plasma et globules rouges du patient). Témoins positif (sérum connu, contenant au moins un anticorps détectable en technique indirecte à l antiglobuline) et négatif (sérum connu, ne contenant aucun anticorps), IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie. Réactifs nécessaires non fournis EryScan, ScanCell, ScanPanel : globules rouges test prêts à l'emploi pour le dépistage et l'identification des anticorps irréguliers antiérythrocytaires (test indirect à l antiglobuline) EryScan 2 x 10 ml ScanCell 3 x 10 ml ScanPanel 10 x 3 ml Mode opératoire Le mode opératoire doit être strictement suivi. Tous les réactifs doivent être remis à température ambiante avant utilisation. Par centrifugation séparer le sérum ou le plasma et les globules rouges de l'échantillon à tester. 14

5 Lorsque le sang est prélevé sur tube sec, le sérum doit être recentrifugé à 1500 g pendant 10 minutes. a) Préparation de la suspension de globules rouges lorsque ceux-ci ne sont pas prêts à l emploi Auto-contrôle : Distribuer 1 ml de ScanLiss dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl des globules rouges de l échantillon (auto-contrôle). Mélanger. b) Technique 1. Identifier chaque carte ou partie de carte (suivant le nombre de globules rouges test utilisés pour l échantillon) par le nom ou le numéro d'échantillon correspondant; identifier pour chaque microtube le globule rouge test à distribuer. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges avant utilisation. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges tests prêts à l'emploi ScanCell ou ScanPanel ou de la suspension de globules rouges préparée en 1- a) dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Ajouter immédiatement 25 µl de sérum ou de plasma dans la cupule des microtubes correspondant à l échantillon testé. En aucun cas le délai entre la distribution des globules rouges et celle du plasma ou du sérum ne doit dépasser 10 minutes. 4. Incuber 15 minutes à +37 C dans ScanGel Incubator. 5. Centrifuger 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. 6. Lire les réactions. 2. Epreuve de compatibilité Contrôles Témoins positif (sérum connu, contenant au moins un anticorps détectable en test indirect à l antiglobuline) et négatif (sérum connu, ne contenant aucun anticorps), IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie. Mode opératoire Le mode opératoire doit être strictement suivi. Tous les réactifs doivent être remis à température ambiante avant utilisation. Par centrifugation séparer le sérum ou le plasma et les globules rouges de l'échantillon à tester. Lorsque le sang est prélevé sur tube sec, le sérum doit être recentrifugé à 1500 g pendant 10 minutes. 15

6 a) Préparation de la (des) suspension(s) de globules rouges (donneur(s)) Pour chaque donneur : Distribuer 1 ml de ScanLiss dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl de culot globulaire (globules rouges du donneur). Mélanger. La suspension de globules rouges est prête à être utilisée. b) Technique 1. Identifier chaque carte ou partie de carte par le nom ou le numéro du receveur et le numéro du ou des donneurs correspondants. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Ajouter immédiatement 25 µl de sérum ou de plasma du receveur dans la cupule des microtubes appropriés. En aucun cas le délai entre la distribution de la suspension de globules rouges et celle du sérum ou du plasma ne doit dépasser 10 minutes. 4. Incuber 15 minutes à +37 C dans ScanGel Incubator. 5. Centrifuger 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. 6. Lire les réactions. 3. Test direct à l antiglobuline (Coombs direct) Contrôles Témoins positif (globules rouges sensibilisés par un anticorps de nature IgG connu et/ou par la fraction C3d du complément) et négatif (globules rouges non sensibilisés). Mode opératoire Le mode opératoire doit être strictement suivi. Tous les réactifs doivent être remis à température ambiante avant utilisation. Par centrifugation séparer le sérum ou le plasma et les globules rouges de l'échantillon. a) Préparation de la suspension des globules rouges Pour chaque échantillon : Distribuer 1 ml de ScanLiss dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl du culot globulaire de l échantillon. Mélanger. La suspension de globules rouges est prête à être utilisée. 16

7 b) Technique 1. Identifier chaque microtube par le nom ou le numéro d échantillon correspondant. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges à tester dans la cupule des microtubes appropriés. 3. Centrifuger immédiatement 10 minutes dans la ScanGel Centrifuge. En aucun cas le délai entre le dépôt de la suspension de globules rouges et le début de la centrifugation ne doit dépasser 10 minutes. 4. Lire les réactions. 4. Phénotypage érythrocytaire Contrôles Témoins positif et négatif : globules rouges connus positifs et négatifs pour l antigène, testés simultanément avec les globules rouges de l échantillon, IH QC : Contrôle de qualité en immunohématologie. Contrôle échantillon (globules rouges de l échantillon uniquement). Réactif nécessaire non fourni Réactifs Bio-Rad correspondant à l antigène étudié. Mode opératoire Le mode opératoire doit être strictement suivi. Tous les réactifs doivent être remis à température ambiante avant utilisation. Par centrifugation séparer le plasma et les globules rouges de l'échantillon à tester. a) Préparation de la suspension des globules rouges Pour chaque échantillon : Distribuer 1 ml de ScanLiss dans un tube à usage unique, identifié. Ajouter 10 µl du culot globulaire de l échantillon. Mélanger. La suspension de globules rouges est prête à être utilisée. b) Technique 1. Pour chaque échantillon, identifier un microtube par le nom ou le numéro d échantillon correspondant et l identifiant du sérum-test utilisé et un microtube par le nom ou le numéro d échantillon (contrôle échantillon). Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. Remettre en suspension les globules rouges. 2. Déposer 50 µl de chaque suspension de globules rouges dans la cupule des microtubes appropriés. 17

8 3. Ajouter immédiatement 25 µl de sérum test dans la cupule des microtubes appropriés (excepté dans les microtubes servant de contrôle échantillon). En aucun cas le délai entre la distribution des globules rouges et celle du sérum test ne doit dépasser 10 minutes. 4. Incuber 15 minutes à +37 C dans ScanGel Incubator. 5. Centrifuger 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. 6. Lire les réactions. VII - RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION La présence d agglutinats (en surface ou dispersés dans le gel) ou d une hémolyse dans un microtube correspond à un résultat positif. Un culot de globules rouges collectés au fond du microtube et l absence d hémolyse correspond à un résultat négatif. Les résultats sont valides uniquement si les contrôles positif et négatif donnent les résultats attendus. 1. Dépistage et identification d'anticorps irréguliers Un résultat négatif (absence d'agglutination et d'hémolyse) dans chacun des microtubes utilisés signifie que le sérum ou le plasma testé ne contient pas d anticorps, correspondant aux antigènes présents sur les globules rouges test, détectable dans la technique utilisée. Un résultat positif (agglutination et/ou hémolyse) dans un des microtubes utilisés prouve au contraire la présence d un ou plusieurs anticorps dans le sérum ou le plasma. Une identification de cet (ces) anticorps doit être alors réalisée. Un résultat positif dans le microtube auto-contrôle peut indiquer la présence d un auto-anticorps. Si en plus de l auto-contrôle, au moins un des globules rouges test est agglutiné, un mélange auto-anticorps/allo-anticorps doit être envisagé. Seuls les anticorps correspondant aux antigènes présents sur les globules rouges test peuvent être détectés. Dans le cadre d une identification, l analyse comparée entre les réactions positives et les réactions négatives observées avec chacun des globules rouges test du panel utilisé, permet de caractériser, à l aide de la fiche d analyse jointe au panel, la ou les spécificité(s) des anticorps présents dans le sérum (ou plasma) testé. 2. Epreuve de compatibilité Un résultat positif (agglutination et/ou hémolyse) démontre l'existence d'une incompatibilité entre le sérum ou le plasma du receveur et les globules rouges du donneur. 18

9 3. Test direct à l antiglobuline (Coombs direct) Un résultat négatif indique l absence d IgG et de complément sur les globules rouges testés. Un résultat positif indique la présence d IgG, de complément ou des deux sur les globules rouges testés. 4. Phénotypage érythrocytaire Se référer à la notice du sérum-test utilisé. Les résultats sont valides uniquement si le contrôle échantillon est négatif. VIII - PERFORMANCES 1. Dépistage et identification d'anticorps irréguliers L évaluation des performances réalisée sur 2516 échantillons (1782 patients et 734 donneurs) a mis en évidence une réaction équilibrée entre sensibilité et spécificité. Chaque résultat a été comparé avec celui obtenu en technique immunoadhérence ou gel filtration. L application permet de détecter un anti-rh1(d) humain de concentration égale à 20 ng/ml. La spécificité sur un échantillonnage de patients tout-venant est de 99.8%. La reproductibilité de l application a été testée et a montré de bonnes performances aussi bien en intra qu en inter-essais. 2. Epreuve de compatibilité L évaluation des performances a donné des résultats concordants avec le réactif utilisé comme référentiel. Chaque résultat a été comparé avec celui obtenu en technique gel filtration. La reproductibilité de l application a été testée et a montré de bonnes performances aussi bien en intra qu en inter-essais. 3. Test direct à l antiglobuline (Coombs direct) L évaluation des performances a été réalisée sur 147 échantillons (nouveaux nés et échantillons provenant de malades hospitalisés avec suspicion d anémie hémolytique auto-immune). Chaque résultat a été comparé avec celui obtenu en technique tube ou gel filtration. Les résultats obtenus n ont montré aucune discordance avec la technique gel utilisée en parallèle. La reproductibilité de l application a été testée et a montré de bonnes performances aussi bien en intra qu en inter-essais. 19

10 4. Phénotypage érythrocytaire Se référer à la notice du sérum test utilisé. LIMITES Des résultats anormaux peuvent être provoqués par : une contamination bactérienne ou chimique du sérum, du plasma, des globules rouges ou du matériel. une médication ou un état pathologique du patient donnant une réaction croisée. l'utilisation d un milieu de suspension des globules rouges autre que celui préconisé. une preparation des globules rouges différente de celle préconisée. une remise en suspension incomplète des globules rouges. une hémolyse des échantillons ou des globules rouges test. la présence de fibrine (image d'un culot cellulaire compact au fond d'un microtube accompagné d'une fine bande rosée en haut du gel correspondant aux globules rouges retenus par les résidus de fibrine). une contamination inter-microtubes. tout autre usage que celui décrit dans cette notice.- Sous licence de DiaMed SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Suisse 20

11 10 IX - LITERATURE 1. Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974; 26: Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83: Rouger Ph, Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987; 53: Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol2: Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988;XXXI, Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf. Immunohematol. 1988;XXXI, Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Proceedings of the second international workshop and symposium on monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens. IgG/Complement. Lund. 1990; Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50: Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992;35: Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69: Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.

12 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2009 Fax.: Code:

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