Un gage de spécificité en immunohistochimie : la localisation cellulaire du signal
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- Danièle Lépine
- il y a 7 ans
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1 Un gage de spécificité en immunohistochimie : la localisation cellulaire du signal
2 Un gage de spécificité en immunohistochimie : la localisation cellulaire du signal Immunohistochimie : méthode immunologique approche morphologique des cellules positives et des cellules négatives répartition des cellules positives et des cellules négatives dans le tissu localisation du signal dans les différents compartiments cellulaires Caractéristiques propres à l immunohistochimie Analyse du signal indissociable de l analyse morphologique avantage des techniques sur tissu fixé et inclus en paraffine
3 Evaluation du signal en immunohistochimie Niveau d expression d une protéine dépend : Degré de différenciation de la cellule, concentration de la protéine, rapidité à l exportation Dérégulation génétique des cellules tumorales : Dérégulation des protéines synthétisées : perte d expression, expression aberrante, hyperexpression d un oncogène, Modifications de la membrane cellulaire : capacités d endocytose des molécules extracellulaires Localisation cellulaire de l antigène Structure de l antigène et possibilité de le détecter par un anticorps Préparation des tissus
4 Localisation cellulaire du signal souvent irrégulier, granulaire, localisé dans 1 ou 2 compartiments cellulaire rarement uniforme et diffus reflète la biologie de la protéine détectée Site où la protéine est présente : synthèse, concentration, stockage site fonctionnel : membrane cellulaire, noyau, cytoplasme [endocytose de la protéine par la cellule]
5 Membrane cellulaire
6 Localisation cellulaire du signal Synthèse des protéines Ribosomes : traduction des ARNm Réticulum endoplasmique granuleux + citerne périnucléaire (ségrégation des protéines synthétisées) Ex. : Immunoglobulines (Ig( Ig) ) dans les cellules lymphoïdes B à différenciation plasmocytaire exportation d Ig SIGNAL granulaire cytoplasmique liseré périnucléaire boule intranucléaire aire (VIN)
7 Ig dans les cellules lymphoïdes B SIGNAL granulaire cytoplasmique liseré périnucléaire Ex. hyperplasie immunoblastique Kappa Kappa Lambda Lambda
8 Ig dans les cellules lymphoïdes B LLC SIGNAL liseré périnucléaire boule intranucléaire aire (VIN) Ex. LLC, L. lymphoplasmocytique L. lymphoplasmocytique IgM IgM
9 Localisation cellulaire du signal Stockage des protéines Granules (vésicules) de sécrétion Concentration des protéines destinées à l exportation SIGNAL : granulaire cytoplasmique cellules glandulaires cellules neuro-endocrines : chromogranine lymphocytes cytotoxiques : TiA-1, granzyme perforine
10 Chromogranine A : Carcinome neuroendocrine TIA-1 : L. ALC
11 Localisation cellulaire du signal Concentration, conditionnement, modifications et orientation des protéines excrétion lysosomes membrane cellulaire Appareil de Golgi : Centre principal du trafic des protéines dans la cellule SIGNAL : tache réniforme juxtanucléaire Ex. : Ig, CD15, LMP-1 Kappa Un signal golgien suggère que la protéine est synthétisée par la cellule et transite par le Golgi : protéines glycosylées
12 Lymphome de Hodgkin CD15 LMP-1
13 Localisation cellulaire du signal Site d activitd activité de la protéine Localisation majeure des signaux dans la cellule Lié à la fonction de la protéine 1. membrane cellulaire : récepteurs, transport transmembranaire, enzymes 2. cytoplasme : cytosquelette, lysosomes 3. noyau : 3. noyau : enzymes, protéines de structure, de régulation de l expression transcriptionnelle
14 Site d activité de la protéine Ex. L. de Hodgkin nodulaire à prédominance lymphocytaire 1. membrane cellulaire : récepteurs, transport transmembranaire, enzymes, Ex. : antigènes leucocytaires EMA, CEA, molécules d adhérence protéines virales : LMP-1 1 d EBV EMA CD20
15 Site d activité de la protéine 2. cytoplasme : cytosquelette : ex. filaments intermédiaires kératines SIGNAL dense +/- fibrillaire boule paranucléaire lysosomes : ex. lysozyme, myélopéroxydase SIGNAL granulaire membranes des organites intracellulaires (BCL2), cytosol (hémoglobine)
16 2. cytoplasme : Carcinome cytosquelette : ex. filaments intermédiaires Kératines SIGNAL dense +/- fibrillaire boules paranucléaires aires KL1
17 Paragangliome Tumeur de Merkel cutanée KL1 KL1
18 2. cytoplasme : Sarcome myéloïde lysosomes : ex. lysozyme, myélopéroxydase SIGNAL granulaire MPO Lysozyme
19 2. cytoplasme : BOM : MPO lysosomes : ex. lysozyme, myélopéroxydase SIGNAL granulaire LA : Lysozyme
20 Site d activité de la protéine Lymphome de Burkitt 3. noyau : enzymes, protéines de structure, de régulation de l expression transcriptionnelle Ex. : Ki-67, p53, cycline D1, c-mycc récepteurs stéroïdiens protéines virales (EBNAs( EBNAs,, ) MIB-1
21 Carcinome mammaire Ganglion : centre gerrminatif RO RP BCL6
22 Localisation cellulaire du signal Endocytose de la protéine par la cellule histiocytes-macrophages cellules tumorales lymphocytes SIGNAL : grains intracytoplasmiques CD20 : histiocytes Endocytose CD20 : cellules lymphoïdes B
23 Localisation cellulaire du signal Association de plusieurs signaux dans la cellule Immunoglobulines : Leur localisation varie selon le stade de différenciation de la cellule B Ig de membrane : Ig intracytoplasmique : site fonctionnel tissu congelé différenciation plasmocytaire synthèse pour l exportation tissu fixé et inclus en paraffine CD15, CD30, LMP-1 1 membrane cellulaire granulaire intracytoplasmique zone du Golgi
24 Lymphome de Hodgkin Hyperplasie immunoblastique CD15 Kappa
25 Localisation cellulaire du signal membrane cellulaire site fonctionnel cytoplasme synthèse concentration et stockage site fonctionnel noyau site fonctionnel
26 Localisation cellulaire du signal Le signal immunohistochimique n est pas dû au hasard est le reflet d une réalité biologique La localisation morphologique du signal permet d affirmer la spécificité de la réaction et d interpréter les signaux faibles rend l interprétation reproductible entre pathologistes permet de ne pas tenir compte des artéfacts implique d avoir d des informations sur la biologie de l antigl antigène ne recherché
27 Lymphome de Hodgkin classique : CD15 + Signal d intensité vive Signal golgien d intensité faible
28 Lymphome de la zone marginale splénique Immunoglobulines Artéfacts? IgM IgM Kappa Lambda
29 Myélome : monotypie Kappa Myélome : bruit de fond Kappa? κ λ κ
30 Myélome : bruit de fond Kappa? NON monotypie IgG-K et Ig interstitielles κ λ IgG IgA
31 BOM : Myélome lambda et plasmocytes réactionnels kappa κ λ
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