Evaluation de l activité anti-tyrosinase du produit Dermostane
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- Lucille Pelletier
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1 Centre de Recherches Biologiques et d'expérimentations Cutanées Etude 13E2641 Evaluation de l activité anti-tyrosinase du produit Dermostane Produit testé DERMOSTANE Promoteur de l étude Réalisation de l étude par ETHNODYNE 151 Boulevard Haussmann Paris Laboratoire BIO-EC 1, Chemin de Saulxier Longjumeau FRANCE Tél. +(33) Fax +(33) Contact info@bio-ec.fr Contact Date de début d expérimentation 11 Janvier 2013 Date de fin d expérimentation 15 Janvier 2013 Directeur d étude : Elian Lati
2 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 2 sur 10 BUT DE L ETUDE Cette étude a pour but d évaluer l activité dépigmentante du produit DERMOSTANE par la réaction à la DOPA-oxydase, réalisée sur épiderme séparé, comparativement à un témoin DOPA et à de l acide kojique à 0.06 %. MATERIELS ET METHODES 1. Produits testés Le commanditaire a fourni 1 produit identifié comme suit: Produit Référence lot Aspect Quantité P1 DERMOSTANE Crème 30ml - Acide Kojique Sigma ref : K3125 lot 036K2502, à 0.06% - Solution de L-DOPA à 2mg/ml, Sigma ref : D9628 lot 117H Réaction à la L-DOPA Les épidermes provenant d une plastie abdominale congelée (P737 MB33) sont séparés par incubation dans du NaBr 2N pendant 5h00 à 37 c. Ils ont, ensuite été fixés dans un fixateur formolé tamponné, rincés et mis en contact avec le mélange volume / volume, 500µl /500µl : solution de L- DOPA / solution à tester à la concentration indiquée dans le tableau. Après incubation, ils ont été rincés et montés entre lame et lamelle avec du liquide de montage Aquatex. L observation a été réalisée en microscopie optique à l objectif x 10 Les prises de vue ont été réalisées avec une caméra Olympus DP72 390P et stockées à l aide du logiciel d archivage de données Cell^D. Pour chaque lot plusieurs champs microscopiques ont été analysés à l aide du logiciel d analyse d images LEICA QWin. Pour chaque champs, les mélanocytes DOPA positifs ont été dénombrés et la surface de la zone a été mesurée pour déterminer le nombre de mélanocyte par mm².
3 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 3 sur 10 RESULTATS 1. DOPA-Oxydase Témoin DOPA Les mélanocytes visibles sont très nombreux et nettement pigmentés. Acide kojique 0.06% (AK) Les mélanocytes sont presque totalement dépigmentés. L activité dépigmentante est très importante. DERMOSTANE Les mélanocytes sont presque totalement dépigmentés. Le produit 1 colore légèrement l épiderme, mais montre une forte activité anti-tyrosinase. Dénombrement des mélanocytes DOPA positifs/mm² d épiderme 1. DOPA oxydase Lot Moyenne Ecart-type Variation/T (%) S*/T T 329,3 44,9 AK 7,3 4,7-98 ** DERMOSTANE 8,0 4,4-98 ** # : significativité pour p<0.1 * : significativité pour p<0.05 ** : significativité pour p<0.01
4 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 4 sur 10 CONCLUSION Dans les conditions opératoires décrites ci-dessus : Le produit acide kojique induit une très forte activité dépigmentante (-98%**) par rapport au Témoin DOPA. Le produit DERMOSTANE présente une forte activité antityrosinase (-98%**) similaire à celle de l acide kojique à 0.06%. - # : significativité pour p<0.1 - * : significativité pour p< ** : significativité pour p<0.01
5 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 5 sur 10 ANNEXES DOPA oxydase Témoin DOPA oxydase T_4-4 T_6-6
6 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 6 sur 10 DOPA oxydase Acide kojique R_1-7 R_5-11
7 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 7 sur 10 DOPA oxydase Produit 1: Ethnodyne DERMOSTANE P1_1-13 P1_4-16
8 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 8 sur 10 Données brutes des dénombrements de mélanocytes DOPA positifs/mm² d épiderme. T R P1 296,0 4,0 8,0 336,0 4,0 4,0 388,0 4,0 16,0 364,0 8,0 4,0 328,0 8,0 8,0 264,0 16,0 8,0 Moyenne 329,3 7,3 8,0 Ecart Type 44,9 4,7 4,4 Analyse statistique Le Student t-test donne la probabilité pour deux lots d être significativement différents. La différence entre deux lots est significative si p<0,1 (#), soit une probabilité de 90% pour deux lots d être significativement différents ou p<0,05(*), soit une probabilité de 95% pour deux lots d être significativement différents ou p<0,01(**), soit une probabilité de 99% pour deux lots d être significativement différents.
9 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 9 sur 10 DEVIATIONS Aucune déviation. ATTESTATION QUALITE L étude qui fait l objet de ce présent rapport a été réalisée selon les Bonnes Pratiques du Laboratoires (Arrêté du 10 Aout 2004), ainsi qu en respectant les procédures et modes opératoires validés par le Laboratoire BIO-EC. Les audits réalisés permettent de s assurer que toutes les étapes de l étude sont contrôlées. Les dates et les phases inspectées lors de nos différents audits sont indiquées dans le tableau ci-dessous : Type d audit Date Etape contrôlée Date des comptes rendus au Directeur d Etude Date des comptes rendus à la Direction Externe 07/2006 Laboratoire d histologie 27/07/ /07/2006 Externe 22/06/2010 Laboratoire d histologie 22/06/ /06/2010 Externe 24/08/2010 Laboratoire d histologie / / Interne 21/06/2012 Laboratoire d histologie 05/07/ /07/2012 Externe 16/07/2012 Laboratoire d histologie 20/07/ /07/2012 Ce rapport a été examiné par le Responsable Qualité qui atteste que les méthodes et les modes opératoires ont été entièrement respectés. Ce rapport a été examiné par le Directeur d étude qui atteste que les observations et les résultats obtenus sont fidèlement indiqués et reflètent avec exactitude les données brutes de l étude.
10 Etude 13E2641 ETHNODYNE page 10 sur 10 RESUME DE L ETUDE Produits P1 : DERMOSTANE lot AK : Acide Kojique à 0.06% Modèle Epidermes séparés exposés à la DOPA. Résultats / Conclusion Dénombrement des mélanocytes DOPA positifs/mm² d épiderme. Lot Moyenne Ecart-type Variation/T (%) S*/T T 329,3 44,9 AK 7,3 4,7-98 ** DERMOSTANE 8,0 4,4-98 ** Dans les conditions opératoires décrites ci-dessus : Le produit acide kojique induit une très forte activité dépigmentante (-98%**) par rapport au Témoin DOPA. Le produit DERMOSTANE présente une forte activité antityrosinase (-98%**) similaire à celle de l acide kojique à 0.06%. - # : significativité pour p<0.1 - * : significativité pour p< ** : significativité pour p<0.01
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