Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales
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- Gabrielle Brousseau
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1 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Olivier Decaux Service de Médecine Interne Hôpital Sud - Rennes Djaouida Bengoufa Laboratoire d immunologie Hôpital Saint Louis Paris 39 colloque national des biologistes des hôpitaux Lille 4-8 Oct. 2010
2 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Pourquoi un nouveau test? Description du test Hevylite Intérêt potentiel du test Hevylite -Au diagnostic -Pour le suivi -Marqueur pronostique?
3 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Pourquoi un nouveau test? Description du test Hevylite Intérêt potentiel du test Hevylite -Au diagnostic -Pour le suivi -Marqueur pronostique?
4 Techniques conventionnelles Electrophorèse Dosage pondéral des immunoglobulines Immunofixation
5 Electrophorèse des protides sériques Taux de l immunoglobuline monoclonale - suivi des patients - évaluation de la réponse au traitement Evalué par - densitométrie du gel (ELP en gel d agarose) - intégration du pic (ELP capillaire)
6 Electrophorèse des protides sériques Intégration du pic
7 Electrophorèse des protides sériques Taux de l immunoglobuline monoclonale MAIS Limites de l ELP
8 MAIS Pic migrant dans les beta globulines ou masqué par la transferrine
9 MAIS Pic de petite taille
10 Dosage pondéral des immunoglobulines Ne dois pas être utilisé pour le suivi sauf si mesure de l immunoglobuline monoclonale est impossible par ELP Néphélémétrie mesure les immunoglobulines Néphélémétrie mesure les immunoglobulines totales (monoclonales et polyclonales) mais ne mesure pas les Ig κ et Ig λ.
11 Immunofixation Meilleure sensibilité 100 mg/l Confirmation caractère monoclonal Caractérisation de l isotype du composant monoclonal Ne permet pas la quantification de la protéine monoclonale
12 Métabolisme des IgG IgG ~ 20 jours (quelques jours semaines) IgA 6 jours IgM 5 jours
13 Endothelial cell Fluid phase uptake Degradation
14 Métabolisme des IgG Albumin IgG Neonatal Fc receptor FcRn
15 Recycling of IgG Fluid phase uptake Endothelial cell FcRn binds IgG inside endosome Bound IgG is recycled Degradation
16 Métabolisme des IgG Serum IgG con ncentration (g/l) IgG M-protein production underestimated IgG half life (days) FcRn est «saturable»dans les normales concentrations des IgG. Catabolisme IgG concentration dépendant. Waldmann and Strober Prog Allergy 1969; 13: 1-110
17 Hématocrite et volume plasmatique Concentration de l immunoglobuline monoclonale varie en fonction de l hématocrite et volume plasmatique
18 Hématocrite et volume plasmatique Le ratio corrige les variations dues au volume plasmatique et à l hématocrite. Ig /Ig = 3/1 Ig /Ig = 3/1 Ig /Ig = 3/1
19 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Pourquoi un nouveau test? Description du test Hevylite Intérêt potentiel du test Hevylite -Au diagnostic -Pour le suivi -Marqueur pronostique?
20 HEVYLITE Automated immunoassay (BNII and SPAPLUS) Polyclonal sheep antisera reagent
21 HEVYLITE IgG IgG IgA IgA IgM IgM Future: IgD IgD
22 HEVYLITE IgA 191 donneurs sains - 33 myélome multiple IgA
23 HEVYLITE Valeurs normales Mean (g/l) 95%ile Range (g/l) (100%ile) IgA kappa ( ) IgA lambda ( ) IgA k/l ratio ( ) IgG kappa ( ) IgG lambda ( ) IgG k/l ratio ( )
24 HEVYLITE Corrélation avec dosage pondéral
25 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Pourquoi un nouveau test? Description du test Hevylite Intérêt potentiel du test Hevylite -Au diagnostic -Pour le suivi -Marqueur pronostique?
26 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Pourquoi un nouveau test? Description du test Hevylite Intérêt potentiel du test Hevylite -Au diagnostic -Pour le suivi -Marqueur pronostique?
27 HEVYLITE Au diagnostic 35 myélome IgA dont 5 non quantifiables en ELP
28 HEVYLITE Au diagnostic 94 IgA (60 IgAκ 34 IgAλ) US Normals Batch IgA MM sera IgA lambda (g/l) IgA kappa (g/l)
29 HEVYLITE Au diagnostic 225 IgG (166 IgGκ 79 IgGλ) IgG MM P res entation S era IgG lambda a (g/l ) Ig G kappa (g /L )
30 ETUDE Saint- Louis Paris HEVYLITE Au diagnostic 31 MGUS IgA (15 IgAκ,16 IgAλ) dont 42% n ont pas de pics/ou ont des pics non mesurables sur EPS M GUS n=3 1 levels hevylite e y = 1, 5122x peak g/l R 2 = 0, 8857
31 ETUDE Saint-Louis Paris HEVYLITE Au diagnostic 31 MGUS IgA (15 IgAκ,16 IgAλ) dont 42% n ont pas de pics/ou ont des pics non mesurables sur EPS -le dosage de hevylite est corrélé avec la mesure du pic lorsque celle-ci est possible. -4patients/31 IgA MGUS ont des ratios dans les normes.les monoclonales disparaissent lors du suivi de ces patients.
32 ETUDE Saint-Louis Paris HEVYLITE Au diagnostic 51 MM IgA (34IgAκ,17 IgAλ) dont 48% n ont pas de pics/ou ont des pics non mesurables sur EPS level hevylite g/l my e l ome mul t i pl e n=5 1 y = 1, x IgA Peak g/l R 2 = 0, Tous les MM ont des ratios anormaux le dosage de hevylite est corrélé avec la mesure du pic lorsque celle-ci est possible.
33 HEVYLITE Au diagnostic Hevylite identifie tous les patients ayant un myélome IgA Hevylite IgG ne détecte pas les patients ayant un taux très faible d IgG monoclonale sans immunodépression associée
34 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Pourquoi un nouveau test? Description du test Hevylite Intérêt potentiel du test Hevylite -Au diagnostic -Pour le suivi -Marqueur pronostique?
35 ETUDE Saint-Louis Paris HEVYLITE Au suivi Etude de suivi de 3MM CASE 1 ratio h evylite 0,25 0,2 0,15 0,1 0, / 03/ / 07/ ratio hevylite/ratio freelite 06/ 12/ / 04/ / 09/ / 01/ / 05/ / 10/ da t e RéponseIgA Kappa-Lambda Monitoring patients : 3 cases Case 1: MM IgAλ, No response after initial treatment with melphalan/ prednisone: Tous les MM ont des ratios normaux le dosage de hevylite est corrélé avec la mesure du pic lorsque celle-ci est possible. No corrélation between hevylite and freelite ratios R²= 0.52
36 ETUDE Saint-Louis Paris HEVYLITE Au suivi Etude de suivi de 3MM CASE 2 hevylit e/ f reelit e Thalidomide 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 06/ 08/ 2 14/ 11/ 2 22/ 02/ 2 01/ 06/ 2 09/ 09/ 2 18/ 12/ 2 28/ 03/ dat e Réponse IgA K appa-lambda Case 2: MM IgAλ, Very good partial response (VGPR) to front line therapy including thalidomide/dex and High dose therapy Tous les MM ont des ratios normaux l dosage de hevylite est corrélé avec la mesure du pic lorsque celle-ci est possible. Corrélation between hevylite and freelite ratios R²= 0.86.
37 ETUDE Saint-Louis Paris HEVYLITE Au suivi Etude de suivi de 3MM CASE 3 Post allogreffe relapse 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Thali/Dex Good response VGPR EPS detectable peak relapse Juil 08 Pts7 MM IgAλ Relapse after allergenic BMT. Treatment with thalidomide/ Dex leading to a VGPR. Decrease of hevylite ratio preceeding within one year the detection of a peak. Heavylite ratio is predictive of the relapse before EPS analysis Tous les MM ont
38 HEVYLITE Evaluation de la réponse 9 myélome IgG 4/5 pas de RC IFE et IgGk /λ anormaux 5/9 RC IgGk /λ indicateur plus précoce de rechute (3 patients)
39 Exemple d un myélome IgG lambda
40 Exemple d un myélome IgG lambda
41 Exemple d un myélome IgG lambda
42 Exemple d un myélome IgG lambda
43 Exemple d un myélome IgG lambda
44 CVAMP Total IgA (g/l) Total IgA IgA kappa / lambda Ratio Autologous cell transplant SPE / IFE Negative IgA NR IgA NR 1 10 IgA KIgA / IgA λ λnr k / IgA NR 0, Time (days) 1000 IgA kappa / IgA lambda ratio Exemple d un myélome Ig A kappa
45 CVAMP Total IgA (g/l) Total IgA IgA kappa / lambda Ratio Autologous cell transplant SPE / IFE Negative IgA NR IgA NR 1 10 IgA KIgA / IgA λ λnr k / IgA NR 0, Time (days) 1000 IgA kappa / IgA lambda ratio Exemple d un myélome Ig A kappa
46 CVAMP Total IgA (g/l) Total IgA IgA kappa / lambda Ratio Autologous cell transplant SPE / IFE Negative IgA NR 1 10 IgA K / IgA λ NR 0, Time (days) 1000 IgA kappa / IgA lambda ratio Exemple d un myélome Ig A kappa
47 CVAMP Total IgA (g/l) Total IgA IgA kappa / lambda Ratio Autologous cell transplant Impact clinique de la détection précoce des rechutes? SPE / IFE Negative IgA NR 1 10 IgA K / IgA λ NR 0, Time (days) 1000 IgA kappa / IgA lambda ratio Exemple d un myélome Ig A kappa
48 HEVYLITE Evaluation de la réponse Evaluation de la réponse en l absence de pic à l ELP Plus sensible que IFE pour évaluation maladie résiduelle Informations sélectivité diminution Ig Absence de diminution du ratio = clone résistant?
49 Intérêt du test Hevylite dans le diagnostic des gammapathies monoclonales Pourquoi un nouveau test? Description du test Hevylite Intérêt potentiel du test Hevylite -Au diagnostic -Pour le suivi -Marqueur pronostique?
50 HEVYLITE Marqueur pronostique 339 patients inclus dans le protocole IFM (VAD vs VD en induction)
51 Covariates Univariate Analysis Del 13 t(4;14) Del 17p β 2 M>5.5mg/l β 2 M>3.5mg/l Albumin<35g/l FLC Ratio Tertiles Monoclonal Tertiles** 200<HLC Ratio< * (n=283) 0.05* (n=252) 0.08 (n=277) 0.51 (n=308) 0.001* (n=308) (n=302) (n=307) 0.16 (n=300) 0.017* (n=308)
52 HEVYLITE Marqueur pronostique Pic < 39 g/l p=0.1 Pic > 39 g/l PFS en fonction du pic (évalué par ELP)
53 HEVYLITE Marqueur pronostique R Ig k/λ Nx (202 pts) R Ig k/λ extrême (108 pts) p=0.002 PFS en fonction du rapport R Ig k/λ (0,01 200)
54 Covariates Univariate Analysis Multivariate Analysis (n=242) Del * (n=283) t(4;14) 0.05* (n=252) Del 17p 0.08 (n=277) β2m>5.5mg/l 0.51 (n=308) β2m>3.5mg/l 0.001* (n=308) 0.045* Albumin<35g/l (n=302) FLC Ratio Tertiles (n=307) Monoclonal Tertiles** 0.16 (n=300) <HLC Ratio< * (n=308) 0.001*
55 HEVYLITE Marqueur pronostique R Ig k/λ Nx + β2m < 3,5 mg/l (202 pts) R Ig k/λ extrême OU β2m > 3,5 mg/l p= R Ig k/λ extrême ET β2m > 3,5 mg/l PFS en fonction de R Ig k/λ (0,01 200) et β2m (3,5 mg/l)
56 HEVYLITE Marqueur pronostique R Ig k/λ Nx + β2m < 3,5 mg/l (202 pts) Impact clinique des marqueurs prédictifs? R Ig k/λ extrême OU β2m > 3,5 mg/l p= R Ig k/λ extrême ET β2m > 3,5 mg/l PFS en fonction de R Ig k/λ (0,01 200) et β2m (3,5 mg/l)
57 HEVYLITE Marqueur pronostique Rapport Ig kappa/lambda = marqueur prédictif de PFS
58 CONCLUSIONS Intérêt potentiel -Au diagnostic -Évaluation de la réponse maladie résiduelle -Dépistage rechutes -Pronostic Etudes complémentaires nécessaires -Confirmer ces premiers résultats -Évaluer l impact sur la prise en charge des patients
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