JAA 2010/07 Français. Milieux préparés en tube BBL pour la croissance des microorganismes

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1 Milieux préparés en tube BBL pour la croissance des microorganismes JAA 2010/07 Français BHI with 0.1% Agar, 10 ml Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar, 9 ml APPLICATION Le Brain Heart Infusion (BHI) with 0.1% Agar (infusion cœur-cervelle avec 0,1 % de gélose) et le Trypticase Soy Broth (TSB) with 0.15% Agar (bouillon de soja Trypticase avec 0,15 % de gélose) sont des milieux polyvalents servant à cultiver des microorganismes exigeants et non exigeants, en particulier les bactéries anaérobies. RESUME ET EXPLICATION Le BHI est un milieu à base d infusion servant à cultiver un grand nombre de microorganismes (bactéries, levures et moisissures). 1 Le BHI with 0.1% Agar sert à cultiver des anaérobies grâce à la tension d oxygène réduite dans le milieu. Le TSB est un milieu nutritif permettant de cultiver un grand nombre de microorganismes communs (aérobies, anaérobies et anaérobies facultatives, et champignons). 1,2 L ajout de gélose favorise la culture de certains microorganismes, notamment les anaérobies prélevés sur les canaux radiculaires et d autres échantillons cliniques. 1 PRINCIPES DE LA METHODE Le bouillon BHI est un milieu nutritif tamponné à base d infusions de tissus de cœur et de cervelle et de peptones, qui apporte les protéines et les autres nutriments nécessaires à la croissance des microorganismes exigeants et non exigeants. Le TSB contient des produits de digestion enzymatique de caséine et de semoule de soja qui apportent des composés azotés. Le dextrose est une source d énergie et le chlorure de sodium assure l équilibre osmotique du milieu. Le supplément de gélose facilite la culture des anaérobies dans ces milieux. La gélose présente dans le milieu retarde l absorption de l oxygène en réduisant les courants de convection dans le milieu. REACTIFS BHI with 0.1% Agar Formule approximative* par litre d eau purifiée Digestion pancréatique de gélatine...14,5 g Infusion de cœur-cervelle (matières solides)...6,0 g Digestion peptique de tissu animal...6,0 g Dextrose...3,0 g Chlorure de sodium...5,0 g Phosphate disodique...2,5 g Gélose...1,0 g *Ajustée et/ou complémentée en fonction des critères de performances imposés.

2 Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar Formule approximative* par litre d eau purifiée Digestion pancréatique de caséine...17,0 g Digestion papaïque de semoule de soja...3,0 g Dextrose...2,5 g Chlorure de sodium...5,0 g Phosphate disodique...2,5 g Gélose...1,5 g *Ajustée et/ou complémentée en fonction des critères de performances imposés. Avertissements et précautions Réservé au diagnostic in vitro. Ouvrir avec précaution les tubes étroitement bouchés pour ne pas risquer d être blessé par un bris de verre. Respecter les techniques d asepsie et prendre les précautions en vigueur contre les dangers microbiologiques. Après utilisation, stériliser à l autoclave les tubes préparés, les récipients ayant contenu des échantillons et tout autre matériel contaminé avant de les éliminer. Instructions pour la conservation : Dès réception, conserver les tubes dans l obscurité, à une température comprise entre 2 et 25 C. Ne pas les congeler ni les surchauffer. Ne pas ouvrir prématurément. Maintenir à l abri de la lumière. Conservés comme indiqué sur l étiquette, les milieux en tube peuvent être ensemencés jusqu à la date de péremption et incubés pendant les durées d incubation recommandées. Laisser le milieu s équilibrer à température ambiante avant de l ensemencer. Détérioration du produit : Ne pas utiliser les tubes s ils présentent des signes de contamination microbienne, décoloration ou dessiccation, ou d autres signes de détérioration. PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS Le BHI et le TSB avec gélose ne conviennent pas pour réaliser une culture directe d échantillons cliniques ou d autres sources contenant des flores microbiennes mixtes, sauf comme milieux «auxiliaires» en plus des milieux d isolement primaires. Consulter les publications citées en référence pour plus d informations. 3-5 METHODE Matériaux fournis : BHI with 0.1% Agar ou Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar Matériaux requis mais non fournis : Milieux de culture auxiliaires, réactifs, souches de contrôle de qualité et matériel de laboratoire requis pour cette méthode. Mode opératoire du test : Respecter les techniques d asepsie. Avant de les ensemencer, réduire les milieux liquides destinés à une incubation anaérobie en plaçant les tubes, avec les bouchons desserrés, en conditions anaérobies pendant 18 à 24 h avant l emploi. Le système anaérobie GasPak et d~ëm~â EZ permet d obtenir facilement et efficacement les conditions anaérobies adéquates. 6 Les microorganismes à cultiver doivent tout d abord être isolés en culture pure sur un milieu d étalement ou une gélose inclinée appropriée. A l aide d un ensemenceur à anse ou à fil droit stérile, transférer de jeunes colonies prélevées sur la boîte ou la gélose inclinée dans le milieu en tube pour obtenir la concentration souhaitée de microorganismes viables. Les échantillons suspectés de contenir ou contenant des anaérobies obligatoires doivent être ensemencés à proximité du fond du tube. Les milieux en tube conçus pour l isolement et la culture des anaérobies doivent être incubés en conditions anaérobies jusqu à 7 jours.

3 Contrôle de qualité par l utilisateur : 1. S assurer que les milieux ne présentent aucun signe de détérioration, comme indiqué à la rubrique «Détérioration du produit». 2. Contrôler les performances en ensemençant un échantillon représentatif de chaque tube avec des cultures pures de souches de contrôle stables, produisant une réaction connue. Les souches de test suivantes sont recommandées : SOUCHE DE TEST Bacteroides fragilis ATCC Streptococcus pyogenes ATCC RESULTAT ATTENDU Croissance Croissance Effectuer les contrôles de qualité conformément aux réglementations nationales et/ou internationales, aux exigences des organismes d homologation concernés et aux procédures de contrôle de qualité en vigueur dans l établissement. Il est recommandé à l utilisateur de consulter les directives NCCLS et la réglementation CLIA concernées pour plus d informations sur les modalités de contrôle de qualité. RESULTATS La croissance en tube est mise en évidence par l apparition d une turbidité comparativement au milieu de contrôle non ensemencé. Si une croissance est visible, les cultures doivent être examinées par coloration de Gram et repiquées sur des milieux appropriés, p. ex., une boîte d étalement sur gélose au sang et/ou gélose au chocolat II, une boîte d étalement sur gélose EMB ou gélose de MacConkey II, etc. Si l on soupçonne la présence d anaérobies, repiquer la culture sur des milieux d étalement anaérobies, en système anaérobie GasPak ou GasPak EZ. LIMITES DE LA PROCEDURE La présence de gélose dans ces milieux produit une légère turbidité qui peut être confondue avec une croissance bactérienne. Réaliser une coloration de Gram sur un frottis et un repiquage pour établir la présence de croissance bactérienne. Pour procéder à l identification, le microorganisme doit se trouver en culture pure. Des tests biochimiques et d autres tests d identification doivent être effectués pour une identification définitive. Consulter les textes appropriés pour obtenir des informations supplémentaires. 3,7-9 CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES BHI with 0.1% Agar Les caractéristiques de performances de tous les lots de Brain Heart Infusion with 0.1% Agar sont testées en usine. Des échantillons représentatifs du lot sont ensemencés avec des suspensions de Bacteroides fragilis ATCC et de Streptococcus pyogenes ATCC diluées avec du sérum physiologique à une concentration finale de 10 3 à 10 4 UFC. Les tubes sont incubés jusqu à 7 jours en conditions anaérobies, bouchons desserrés, à une température comprise entre 35 et 37 C en récipient BBL GasPak. Les deux microorganismes présentent une croissance modérée à importante. CONDITIONNEMENT N o réf. Description BBL BHI Agar with 0.1% Agar, 10 ml, carton de 100 tubes de taille D BBL Trypticase Soy Broth with 0.15% Agar, 9 ml, carton de 100 tubes de taille K

4 REFERENCES 1. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 2. Fredette, V., A. Auger, and A. Forget Anaerobic flora of chronic nasal sinusitis in adults. Can. Med. Assoc. J. 84: Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott s diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 4. Miller, J.M., and H.T. Holmes Specimen collection, transport, and storage, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Isenberg, H.D., F.D. Schoenknecht, and A. von Graevenitz Cumitech 9, Collection and processing of bacteriological specimens. Coordinating ed., S.J. Rubin. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Seip, W.F., and G.L. Evans Atmospheric analysis and redox potentials of culture media in the GasPak system. J. Clin. Microbiol. 11: Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Engelkirk, P.G., J. Duben-Engelkirk, and V.R. Dowell, Jr Principles and practice of clinical anaerobic bacteriology. Star Publishing Co., Belmont, Calif. 9. Summanen, P., E.J. Baron, D.M. Citron, C.A. Strong, H.M. Wexler, and S.M. Finegold Wadsworth anaerobic bacteriology manual, 5th ed. Star Publishing Co., Belmont, Calif.

5 =_ÉÅíçåI=aáÅâáåëçå=~åÇ=`çãé~åó= =_ÉåÉñ=iáãáíÉÇ= = T=içîÉíçå=`áêÅäÉ= = oáåé~åå~=eçìëé= = pé~êâëi=ja=onnro=rp^= = pü~ååçå=cêéé=wçåé= _ÉÅíçåI=aáÅâáåëçå=~åÇ=`çãé~åó _bkbu=iáãáíéç = UMMJSPUJUSSP= T=içîÉíçå=`áêÅäÉ _~ó=h=n~lçi=pü~ååçå=fåçìëíêá~ä=bëí~íé = pü~ååçåi=`çìåíó=`ä~êéi=fêéä~åç= = ïïïkäçkåçãlçë= pé~êâëi=j~êóä~åç=onnro=rp^ pü~ååçåi=`çìåíó=`ä~êéi=fêéä~åç = UMMJSPUJUSSP qéäw=prpjsnjqtjovjom c~ñw=prpjsnjqtjorjqs ^q``=áë=~=íê~çéã~êâ=çñ=^ãéêáå~å=qóéé=`ìäíìêé=`çääéåíáçåk= _ai=_a=içöçi= ii=d~ëm~â=~åç=qêóéíáå~ëé=~êé=íê~çéã~êâë=çñ=_éåíçåi=aáåâáåëçå=~åç=`çãé~åók=«=omnm=_ak=