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1 Compte rendu 142 Auto-immunité : QUAL-IMMUN 4 Centre Toulousain pour le Contrôle de qualité en Biologie clinique Association déclarée à la Préfecture de la Haute-Garonne le 30 Octobre 1973 et enregistrée sous le n W CTCB - 33 route de Bayonne TOULOUSE : Fax : secretariat.ctcb@ctcb.com site Internet : Siret : APE : 8559A Statut du document : Définitif 1 - PRESENTATION DU PROGRAMME D INTERCOMPARAISON Coordonnateur et Expert du programme : Stéphanie Albarède, CTCB, s.albarede@ctcb.com Expert du programme : Mme Fortenfant, Laboratoire d Immunologie, fortenfant.f@chu-toulouse.fr Un large programme vous est proposé en auto-immunité en collaboration avec la société THERADIAG. THERADIAG apporte ainsi son savoir-faire dans la fabrication d échantillon et le CTCB son expérience et son indépendance pour le traitement des données. Fréquence de passage (pour chaque programme d auto-immunité) : 2 enquêtes par an, avec 3 échantillons ( µl de niveaux différents) Présentation du programme : L ensemble des échantillons sera adressé en une seule fois par la société THERADIAG. Le programme proposé est réparti de la façon suivante : - GLIA Anticorps anti-gliadine IgA et/ou IgG - ttg Anticorps anti-transglutaminase tissulaire IgA et/ou IgG - DPG Anticorps anti-peptides desamidé de la gliadine IgA et/ou IgG - ENDO Anticorps anti-endomysium IgA 2 - DETERMINATION DE LA NOTATION DU LABORATOIRE Le système de notation qualitatif repose sur l échelle d'évaluation suivante : A = Réponse attendue B = Réponse acceptable C = Réponse à analyser par le laboratoire D = Réponse erronée Le résultat attendu est la valeur assignée qualitative transmise par le fournisseur lorsque les résultats des participants sont cohérents en inter-réactifs. Des différences par groupe de pairs peuvent amener l Expert à moduler cette valeur, le fournisseur ne pouvant pas tester tous les dispositifs médicaux de diagnostic in vitro (DMDIV) présents sur le marché. En effet, dans le domaine de l auto-immunité, de nombreux facteurs dont la nature et la présentation de l antigène, peuvent induire des discordances de résultats entre deux techniques voire deux réactifs d une même technique. Ceci explique que les valeurs indicatives disponibles sur le site internet à la date de clôture puissent différer de la valeur attendue. Etant donné les faibles effectifs et la dispersion des résultats, les données quantitatives ne sont pas exploitées (pas d évaluation des résultats quantitatifs). 3 - TRAITEMENT STATISTIQUE QUANTITATIF Le traitement statistique quantitatif est réalisé selon les protocoles suivants : - Pour les résultats rendus en inverse de dilution : Détermination de l effectif (N), effectif après élimination des résultats rendu avec un signe < ou > (N*), de la Médiane, Min et Max. - Pour les résultats rendus en unité internationale : Détermination de l effectif (N), effectif après troncature (N*), moyenne après exclusion des valeurs aberrantes par la médiane +/-50%, écart type (ET), coefficient de variation (CV), valeur minimum et maximum (Min, Max) avant troncature. - Critères de rendus des résultats : si l effectif est supérieur ou égal à 3. Page 1 sur 11

2 4 - ANALYSE DES REPONSES ET COMMENTAIRES I. Matériel et méthode A. Dosage des anticorps anti-gliadine Le nombre de participants dépend de l isotype détecté : - 10 laboratoires réalisent la recherche d IgA anti-gliadine - 10 laboratoires réalisent la recherche d IgG anti-gliadine - 1 laboratoire réalise la recherche des anticorps anti-gliadine sans distinction d isotype Deux techniques sont utilisées : l immunoenzymologie et l X-MAP (figures 1). Un seul participant a employé une technique immunodot sans distinction d isotype (réactif polyvalent utilisé en première intention Orgentec Gastro 5 Line). 30% 70% Immunoenzymologie X-MAP Figure 1. IgA et IgG anti-gliadine : répartition des techniques B. Dosage des anticorps anti-transglutaminase (anti-ttg) La recherche d IgA anti-ttg a été réalisée par 33 laboratoires et celle des IgG par 19 laboratoires. La technique immuno-enzymologique est la plus employée (figures 2 et 3), par plus de 82% des utilisateurs. 3% 15% Chimiluminescence Immunoenzymologie X-MAP 82% Figure 2. IgA anti-ttg : répartition des techniques Page 2 sur 11

3 16% 5% Chimiluminescence Immunoenzymologie X-MAP 79% Figure 3. IgG anti-ttg : répartition des techniques C. Dosage des anticorps anti-peptides desamides de la gliadine (anti-dpg) 5 laboratoires réalisent la recherche d anticorps IgA anti-dpg et d anticorps IgG anti-dpg. Deux techniques sont majoritairement employées: la technique X-MAP et l immunoenzymologie (figures 4 et 5). 20% Immunoenzymologie X-MAP 80% Figure 4. IgA anti-dpg : répartition des techniques 20% 60% 20% Chimiluminescence Immunoenzymologie X-MAP Figure 5. IgG anti-dpg : répartition des techniques Page 3 sur 11

4 D. Dosage des anticorps anti endomysium Parmi les 23 laboratoires ayant participé, 56,5% utilisent un grossissement de l objectif de 40 (tableau I) et 78% une dilution de dépistage au 1/10 (tableau II), les lames les plus utilisées sont celles commercialisées par INOVA Diagnostics et BIO-RAD. Grossissement de l'objectif Effectif Total général 23 Tableau I. Grossissement de l objectif utilisé pour la recherche des anticorps anti-endomysium. Dilution de dépistage Effectif Total général 23 Tableau II. Dilution de dépistage utilisée pour la recherche des anticorps anti-endomysium. Réactif Effectif BIO ADVANCE Endomysium foie de singe 1 BIO ADVANCE Endomysium, reticuline Œsophage de singe 4 BIO-RAD Kallestad Monkey Endomysium (réf 29003, 29060) 6 BMD/ THERADIAG Œsophage de singe 3 INOVA NOVA Lite monkey oesophagus 9 Total général 23 Tableau III. Nombre d utilisateurs par réactif. Page 4 sur 11

5 II. Echantillon 1424 Cet échantillon contenait des anticorps IgA anti-endomysium, des anticorps IgA anti-ttg et des traces d anticorps IgG ant-ttg. A. Dosage des anticorps anti-gliadine On observe 100% de bonnes réponses (négatives) quel que soit l isotype recherché. B. Dosage des anticorps anti-transglutaminase (anti-ttg) Pour l isotype IgA, on observe 100% de bonnes réponses positives. Les résultats quantitatifs sont reportés dans les tableaux IV. Réactifs N N* Moyenne ET CV Min Max BMD/ THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgA ,00 7,00 10, ORGENTEC Anti-Tissue transglutaminase IgA ,78 7,01 16,02 34,3 50,9 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Celikey IgA ,94 8,61 16, ,9 Tableau IV. Résultats quantitatifs du dosage des IgA anti-transglutaminase dans le sérum 1424 Pour l isotype IgG, parmi les 19 participants, on observe 12 réponses négatives, 5 réponses douteuses et deux positives. Les réponses positives et douteuses ont été obtenues avec le même réactif EliA Celikey IgG de la société PHADIA/THERMO FISCHER : les titres observés sont proches du seuil (seuil de positivité à 10, valeurs allant de 9 à 11). Marqueur IgG Négatif Douteux Positif Chimiluminescence 1 INOVA QUANTA Flash ttg IgG 1 Immunoenzymologie BIO-RAD Anti-tissus Transglutaminase (ttg) Assays 1 BMD/ THERADIAG Chorus ttg IgG 1 EUROBIO eu-ttg IgA Eurospital 1 MENARINI ZENIT ttg IgG (Ag humain recombinant) 1 ORGENTEC Anti-Tissue transglutaminase IgG 4 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Celikey IgG 5 2 X-MAP 3 BMD/ THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgG 3 Total général Tableau V. Résultats de la recherche des IgG anti-transglutaminase dans le sérum 1424 C. Dosage des anticorps anti-peptides désamidés de la gliadine (anti-dpg) Pour l isotype IgA, un laboratoire parmi les 5 participants a rendu un résultat positif avec la technique X-MAP réactif BIORAD (tableau VI). Les effectifs ne permettent pas d imputer cette réponse à la méthode de dosage. On observe 100% de bonnes réponses (négatives) pour l isotype IgG. Page 5 sur 11

6 IgA Douteux Négatif Immunoenzymologie 1 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Gliadin DP IgA 1 X-MAP 1 3 BIORAD BioPlex 2200 Celiac IgA 1 BMD/THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgA 3 Total général 1 4 IgG Négatif Chimiluminescence 1 INOVA QUANTA Flash DGP IgG 1 Immunoenzymologie 1 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Gliadin DP IgG 1 X-MAP 3 BMD/THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgG 3 Total général 5 Tableau VI. Résultats de la recherche des anticorps anti-dpg dans le sérum 1424 D. Dosage des anticorps anti-endomysium Parmi les 23 participants (tableau VII), on observe 21 réponses positives (91,3%) et 2 réponses douteuses obtenues avec les lames commercialisées par BIORAD et INOVA. Le titre rendu pour ces deux réponses douteuses est 10. La médiane des résultats quantitatifs est de 1/30 (figure 6). Les résultats quantitatifs par réactifs sont reportés dans le tableau VIII. Lames Douteux Positif BIO ADVANCE Endomysium foie de singe 1 BIO ADVANCE Endomysium, reticuline Œsophage de singe 4 BIO-RAD Kallestad Monkey Endomysium (réf 29003, 29060) 1 5 BMD/ THERADIAG Œsophage de singe 3 INOVA NOVA Lite monkey oesophagus 1 8 Total général 2 21 Tableau VII. Résultats de la recherche des anticorps IgA anti-endomysium dans le sérum 1424 Nombre de réponse Répartition des titres en inverse de dilution - Dosage des anticorps anti-endomysium -Echantillon 1424 Médiane = > Total Figure 6. Répartition des titres en inverse de dilution pour le dosage des anticorps anti-endomysium Echantillon 1424 Réactif N N* Médiane Min Max BIO-RAD Kallestad Monkey Endomysium (réf 29003, 29060) INOVA NOVA Lite monkey oesophagus Tableau VIII. Résultats quantitatifs IFI du dosage des anticorps anti-endomysium Echantillon 1424 Page 6 sur 11

7 E. Commentaires Les résultats sont bons. Concernant les anticorps IgG anti-transglutaminase, la discordance interréactif est liéé au faible titre d anticorps et à la différence de sensibilité des tests. Ce n est pas un problème relevant de la réactovigilance. Dans ce cas, les laboratoires sont uniquement évalués par rapport au consensus de leur groupe de pair. Page 7 sur 11

8 III. Echantillon 1425 Cet échantillon contenait des anticorps IgA anti-endomysium, des anticorps IgA et IgG anti-ttg et un taux faible d IgG anti-dpg. A. Dosage des anticorps anti-gliadine On observe 100% de bonnes réponses (négatives) quel que soit l isotype recherché. A noter que le laboratoire utilisant le réactif sans distinction d isotype (réactif polyvalent utilisé en première intention Orgentec Gastro 5 Line) a rendu une réponse douteuse pour cet échantillon. B. Dosage des anticorps anti-transglutaminase (anti-ttg) L ensemble des participants a bien mis en évidence la présence d IgA anti-ttg. Les résultats quantitatifs sont reportés dans les tableaux IX. Concernant les IgG (tableau X), parmi les 19 participants, on observe une seule réponse négative obtenue avec le réactif BMD/ THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgG. Les résultats quantitatifs sont reportés dans les tableaux XI. Réactifs N N* Moyenne ET CV Min Max ORGENTEC Anti-Tissue transglutaminase IgA ,42 26,64 21,07 87,6 149 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Celikey IgA ,3 16,88 13, BMD/ THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgA ,67 16,07 16, Tableau IX. Résultats quantitatifs du dosage des IgA anti-transglutaminase dans le sérum 1425 Marqueur IgG Négatif Positif Chimiluminescence 1 INOVA QUANTA Flash ttg IgG 1 Immunoenzymologie 15 BIO-RAD Anti-tissus Transglutaminase (ttg) Assays 1 BMD/ THERADIAG Chorus ttg IgG 1 EUROBIO eu-ttg IgA Eurospital 1 MENARINI ZENIT ttg IgG (Ag humain recombinant) 1 ORGENTEC Anti-Tissue transglutaminase IgG 4 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Celikey IgG 7 X-MAP 1 2 BMD/ THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgG 1 2 Total général 1 18 Tableau X. Résultats de la recherche des IgG anti-transglutaminase dans le sérum 1425 Réactifs N N* Moyenne ET CV Min Max ORGENTEC Anti-Tissue transglutaminase IgG ,2 15,19 18,95 65,6 101,2 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Celikey IgG ,2 9,7 10, Tableau XI. Résultats quantitatifs du dosage des IgG anti-transglutaminase dans le sérum 1425 C. Dosage des anticorps anti-peptides désamidés de la gliadine (anti-dpg) Pour l isotype IgA, parmi les 5 participants on observe 3 réponses négatives et deux douteuses obtenues avec le réactif BMD/THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgA (tableauxii), les titres observés sont proches du seuil (seuil de positivité à 20, valeurs allant de 17 à 21).. Page 8 sur 11

9 Pour l isotype IgG, parmi les 5 participants on observe 3 réponses positives, une douteuses avec le réactif PHADIA/THERMO FISCHER EliA Gliadin DP IgG et une négative obtenue avec le réactif INOVA QUANTA Flash DGP IgG (tableauxii). IgA Douteux Négatif Immunoenzymologie 1 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Gliadin DP IgA 1 X-MAP 2 2 BIORAD BioPlex 2200 Celiac IgA 1 BMD/THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgA 2 1 Total général 2 3 IgG Douteux Négatif Positif Chimiluminescence 1 INOVA QUANTA Flash DGP IgG 1 Immunoenzymologie 1 PHADIA/THERMO FISCHER EliA Gliadin DP IgG 1 X-MAP 3 BMD/THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgG 3 Total général Tableau XII. Résultats de la recherche des anticorps anti-dpg dans le sérum 1425 Réactifs N N* Moyenne ET CV Min Max BMD/THERADIAG FIDIS CELIAC DPG IgG ,61 10, Tableau XIII. Résultats quantitatifs du dosage des IgG anti-dpg dans le sérum 1425 D. Dosage des anticorps anti-endomysium L ensemble des participants a mis en évidence la présence d anticorps enti-endomysium. La médiane des résultats quantitatifs est de 1/45 (figure 7). Les résultats quantitatifs par réactifs sont reportés dans le tableau XIV. Nombre de réponse Répartition des titres en inverse de dilution - Dosage des anticorps anti-endomysium -Echantillon 1424 Médiane = > Total Figure 7. Répartition des titres en inverse de dilution pour le dosage des anticorps anti-endomysium Echantillon 1425 Page 9 sur 11

10 Réactif N N* Médiane Min Max BIO-RAD Kallestad Monkey Endomysium (réf 29003, 29060) INOVA NOVA Lite monkey oesophagus Tableau XIV. Résultats quantitatifs IFI du dosage des anticorps anti-endomysium Echantillon 1412 E. Commentaires Les résultats sont bons. Concernant les anticorps IgG anti-dpg, la discordance inter- réactif est vraisemblablement liéé au faible titre d anticorps et à la différence de sensibilité des réactifs. Cependant, le faible nombre de laboratoires participants ne permet pas de le confirmer. L évaluation des résultats individuels tient compte de ces remarques. Pour ce marqueur, aucun résultat na été jugé erroné. Page 10 sur 11

11 IV. Echantillon 1426 Cet échantillon était négatif pour les quatre spécificités antigéniques. A. Dosage des anticorps anti-gliadine On observe 100% de bonnes réponses (négatives) quelques soit l isotype recherché. B. Dosage des anticorps anti-transglutaminase (anti-ttg) On observe 100% de bonnes réponses (négatives) quelques soit l isotype recherché. C. Dosage des anticorps anti-peptides desamides de la gliadine (anti-dpg) On observe 100% de bonnes réponses (négatives) quelques soit l isotype recherché. D. Dosage des anticorps anti-endomysium L ensemble des participants ont trouvé la bonne réponse c est dire absence d anticorps antiendomysium. E. Commentaires Les résultats sur cet échantillon négatif 1426 sont excellents. ***** Rédaction : Dr S. ALBAREDE - s.albarede@ctcb.com Pharmacien Biologiste Dr F. FORTENFANT - fortenfant.f@chu-toulouse.fr Laboratoire d Immunologie - CHU de Toulouse - Hôpital Rangueil Autorisation du rapport d essai d aptitude par le Coordonnateur des programmes : Dr S. ALBAREDE - s.albarede@ctcb.com Pharmacien Biologiste ***** PS : Ces documents doivent être archivés selon les recommandations du GBEA (Arrêté du 26 novembre 1999, paru au JO du 11 décembre 1999) Pour tout renseignement : ADMINISTRATIF : Marie-Christine ONDERBEKE, Tél. : Fax : secretariat.ctcb@ctcb.com ADMINISTRATIF et TRAITEMENT STATISTIQUE : Delphine GARIMBAY, Tél. : d.garimbay@ctcb.com ASSURANCE QUALITE : Erick SANCHEZ, Tél. : e.sanchez@ctcb.com INFORMATIQUE : Philippe GONZALVO - p.gonzalvo@ctcb.com Information : Les essais d homogénéité et de stabilité se sont avérés conformes aux modalités décrites dans la procédure de contrôle. Les documents utilisés pour réaliser ce programme d intercomparaison (préparation des objets d essai, détermination des valeurs indicatives et assignées, traitement statistique, ) sont disponibles sur demande auprès du CTCB. L interprétation de ces résultats ne doit pas se faire isolément et doit être rapprochée de ceux obtenus lors des autres opérations de contrôle effectuées dans le cadre de l évaluation interne et de l évaluation externe du laboratoire. Page 11 sur 11

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