PHILADELPHIA P210 Q - PCR Alert kit Ref. RTSG07-210

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1 ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Offices: Tel Fax E. mail: WEB site: PHILADELPHIA Q - PCR Alert kit Ref. RTSG Composto da: Composed by: Composé par: Compuesto por: Composta por: Komponiert von: PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE Q - PCR Alert AmpliMASTER RTSG P RTS000 RTSG07-210_Front

2 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX recherche et dosage de l'adnc de BCR- TE DES MATIÈRES ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Bureaux: Tel Fax emd.support@elitechgroup.com Site internet: C APPLICATION Page 1 PRINCIPE DU TEST Page 2 DESCRIPTION DU PRODUIT Page 2 MATÉRIEL FOURNI Page 2 MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI Page 3 AUTRES PRODUITS REQUIS Page 3 AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Page 3 ÉCHANTILLONS ET CONTRÔLES Page 5 PROCÉDURE Page 6 LIMITES DE LA PROCÉDURE Page 12 CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES Page 13 BIBLIOGRAPHIE Page 15 PROBLÈMES ET SOLUTIONS Page 16 LÉGENDE DES SYMBOLES Page 17 PRINCIPE DU TEST Le test prévoit l'exécution, pour chaque échantillon, d'une réaction d'amplification real time en duplication pour la cible et d'une réaction d'amplification real time en duplication pour le contrôle. Les quatre réactions sont menées dans une microplaque avec thermostat programmable avec système optique de détection de la fluorescence (thermocycleur pour real time). Dans les premiers deux puits est effectuée une réaction d amplification spécifique d une région de l ARNm et dans les autres deux puits est effectuée une réaction d amplification spécifique d une région de l ARNm d en utilisant l ADNc produit par la réaction de transcription inverse de l ARN extrait des échantillons à l examen. Dans chaque réaction d amplification, la sonde spécifique marquée avec le fluorophore FAM est activée lorsqu'elle s'hybride avec le produit spécifique de la réaction d'amplification. L'émission de la fluorescence augmente au fur et à mesure qu'augmentent les produits spécifiques des réactions d'amplification et elle est mesurée et enregistrée par l'instrument. Le traitement des données permet de déterminer la présence et le titre de l'adnc de BCR- dans l'échantillon initial par rapport à l ADNc d de référence. La standardisation du système a été réalisée sur instruments Applied Biosystems de la série Le produit fournit les composants suivants : DESCRIPTION DU PRODUIT AmpliMIX Un mélange d'oligonucléotides d'amorçage spécifique pour pour l'amplification real time dans une solution stabilisante, pré-répartie dans deux tubes jetables (bouchon à l'insert BLANC). Chaque tube contient 110 µl de solution, suffisants pour 24 réactions. Les oligonucléotides d'amorçage pour sont spécifiques d'une région de l'arnm résultant du transcrit BCR- variante. AmpliMIX Un mélange d'oligonucléotides d'amorçage spécifique pour pour l'amplification real time dans une solution stabilisante, pré-répartie dans deux tubes jetables. Chaque tube contient 110 µl de solution, suffisants pour 24 réactions. Les oligonucléotides d'amorçage pour sont spécifiques d'une région de l'arnm du gène humain codant. Le produit permet d effectuer 24 déterminations en duplication pour l ADNc de et 24 déterminations en duplication pour l ADNc d, standards et contrôles inclus (par exemple, 19 patients au cours d'une même session). APPLICATION Le produit «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX» est un test quantitatif d amplification des acides nucléiques pour la recherche de l ADNc du transcrit BCR-, translocation t(9;22), chromosome Philadelphia, variante (), et pour le dosage de l'adnc de par rapport à l'adnc du gène () dans le produit de la réaction de transcription inverse obtenu de l ARN total extrait d échantillons de sang périphérique prélevé sur EDTA ou citrate, sang médullaire prélevé sur EDTA ou citrate, suspensions de lymphomonocytes et suspensions de leucocytes. Ce produit est utilisé, conjointement aux données cliniques et à d autres examens de laboratoire, dans le diagnostic et le monitorage des cas de leucémie myéloïdes chronique (CML), leucémie lymphoblastique aiguë (ALL) et leucémie myéloïde aiguë (AML), positives à ce marqueur. Les résultats obtenus avec ce produit peuvent être alignés à l'échelle internationale (IS) en utilisant le facteur de conversion qui peut être atteint par le produit «PHILADELPHIA RNA Reference» de ELITechGroup S.p.A., étalonné par rapport au "1 st World Health Organization (WHO) International Genetic Reference Panel for quantitation of BCR- translocation by RQ-PCR". SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 1/17 MATÉRIEL FOURNI Composant Description Quantité Composition Étiquetage AmpliMIX AmpliMIX mélange d'oligonucléotides d'amorçage, bouchon BLANC mélange d'oligonucléotides d'amorçage 2 x 110 µl 2 x 110 µl Oligonucléotides, TRIS base, TRIS chlorhydrate, Glycérol, Triton X-100 Oligonucléotides, TRIS base, TRIS chlorhydrate, Glycérol, Triton X-100 SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 2/17 - -

3 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI - Hotte à flux laminaire. - Gants sans poudre, jetables en latex ou équivalent. - Malaxeur vortex. - Microcentrifugeuse de paillasse ( tr/min). - Micro pipettes et embouts stériles avec filtre pour aérosol ou à distribution positive (0,5-10 µl, 2-20 µl, 5-50 µl, µl, µl). - Eau bi-distillée stérile. - Thermostat programmable avec système optique de détection de la fluorescence. AUTRES PRODUITS REQUIS Les réactifs pour l'extraction de l'arn des échantillons à analyser, les réactifs pour la transcription inverse de l ARN, les réactifs optimisés pour l amplification, les réactifs de révélation (sondes fluorescentes) et les ADN standard à quantité connue ne sont pas fournis dans ce produit. Pour procéder à ces phases d'analyse, il est conseillé d'utiliser les produits accessoires suivants fabriqués par ELITechGroup S.p.A.: «EXTRAzol» (code EXTR01), kit d'extraction de l'arn à partir d'échantillons cellulaires et non cellulaires; le kit permet d'effectuer 50 extractions. «RT - kit plus» (code BRK200), kit de transcription inverse de l ARN avec "random primer"; le produit permet d'effectuer 50 transcriptions inverses. «Q - PCR Alert AmpliMASTER» (code RTS000), mélange de réactifs optimisés, microplaques et feuilles adhésives pour l'amplification real time; le produit permet d'effectuer 96 réactions. «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE» (code RTSG P), sondes fluorescentes pour l'amplification real time de l'adnc de et de l'adnc d'; le produit permet d'effectuer 24 déterminations en duplication pour l'adnc de et 24 déterminations en duplication pour l'adnc d'. «PHILADELPHIA Q - PCR Standard» (code STDG07-210), ADN plasmidique à quantité connue pour obtenir la courbe standard pour l'adnc de et pour l'adnc d'; le produit permet d'effectuer 4 sessions. «PHILADELPHIA RNA Reference» (code SPG07-210), des mélanges d'arn total en quantité connue par convertir les résultats à l'échelle internationale (IS) du "1 st World Health Organization (WHO) International Genetic Reference Panel for quantitation of BCR- translocation by RQ- PCR"; le produit permet d'effectuer 6 sessions. AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Ce produit est réservé uniquement à l'usage in vitro. Avertissements et précautions Manipuler et éliminer tous les échantillons biologiques comme s'ils pouvaient transmettre des agents infectieux. Éviter le contact direct avec les échantillons biologiques. Éviter les éclaboussures ou les aérosols. Le matériel qui entre en contact avec les échantillons biologiques doit être décontaminé à l hypochlorite de sodium à 3% pendant un temps minimum de 30 minutes ou autoclavé à 121 C pendant une heure avant d être éliminé. Manipuler et éliminer tous les réactifs et tous les matériels utilisés pour le test comme s'ils étaient potentiellement infectieux. Éviter le contact direct avec les réactifs. Éviter les éclaboussures ou les aérosols. Les déchets doivent être traités et éliminés conformément aux normes de sécurité. Le matériel jetable combustible doit être incinéré. Les déchets liquides contenant des acides ou des bases doivent être neutralisés avant leur élimination. Porter des vêtements de protection et des gants et protéger les yeux et le visage. Ne jamais pipeter les solutions à la bouche. Ne pas manger, boire, fumer ni se maquiller dans l'environnement de travail. Se laver parfaitement les mains après avoir manipulé les échantillons et les réactifs. Éliminer les réactifs en surplus et les déchets en respectant les réglementations en vigueur. Lire toutes les instructions fournies dans le produit avant de procéder au test. Respecter scrupuleusement les consignes fournies dans le produit pendant l exécution du test. Respecter la date de péremption du produit. N utiliser que les réactifs présents dans le produit et ceux conseillés par le producteur. Ne pas mélanger des réactifs provenant de lots différents. Ne pas utiliser de réactifs provenant de produits d autres fabricants. Avertissements et précautions à adopter en biologie moléculaire Les procédures de biologie moléculaire, comme l extraction, la transcription inverse, l amplification et la révélation d acides nucléiques doivent être exécutées par un personnel ayant reçu une formation appropriée afin d éviter tout risque de résultats erronés dus en particulier à la dénaturation des acides nucléiques ou à la contamination des échantillons par des produits d amplification. Il est nécessaire de disposer de zones distinctes pour l extraction / préparation des réactions d amplification et pour l amplification / révélation des produits d amplification. Ne jamais introduire un produit d amplification dans la zone d extraction / préparation des réactions d amplification. Il est nécessaire de disposer de blouses, gants et instruments dédiés pour l'extraction / préparation des réactions d'amplification et pour l'amplification / révélation des produits d'amplification. Ne jamais transférer les blouses, gants et instruments de la zone dédiée à l'amplification / révélation des produits d'amplification vers la zone dédiée à l'extraction / préparation des réactions d'amplification. Les échantillons ne doivent être utilisés que pour ce type d'analyse. Les échantillons doivent être manipulés sous une hotte à flux laminaire. Les tubes contenant des échantillons différents ne doivent jamais être ouverts simultanément. Les pipettes utilisées pour manipuler les échantillons ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Les pipettes doivent être du type à distribution positive ou utiliser des embouts à filtre pour aérosol. Les embouts utilisés doivent être stériles, dépourvus de ADNses et ARNses, dépourvus d'adn et d ARN. Les réactifs doivent être manipulés sous une hotte à flux laminaire. Les réactifs nécessaires à l'amplification doivent être préparés de façon à être utilisés en une seule session de travail. Les pipettes utilisées pour manipuler les réactifs ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Les pipettes doivent être de type à distribution positive ou utiliser des embouts à filtre pour aérosol. Les embouts utilisés doivent être stériles, dépourvus de ADNses et ARNses, dépourvus d'adn et d ARN. Les produits d'amplification doivent être manipulés de façon à en limiter le plus possible la dispersion dans l environnement afin d'éviter tout risque de contamination. Les pipettes utilisées pour manipuler les produits d'amplification ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Avertissements et précautions concernant les composants Les tubes contenant l'amplimix sont des tubes jetables. Ils ne doivent donc être utilisés qu'une seule fois pour la préparation du mélange de réaction. L'utilisation d'amplimix n'implique pas de phrases de risque (R) et implique les conseils de prudence suivants (S): S Ne pas respirer les gaz/fumées/vapeurs/aérosols. Eviter le contact avec les yeux. 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4 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX ÉCHANTILLONS ET CONTRÔLES PROCÉDURE Échantillons Ce produit doit être utilisé avec le produit de la réaction de transcription inverse (ADNc) obtenu à partir de l'arn extrait des échantillons biologiques suivants : sang périphérique prélevé sur EDTA ou citrate, sang médullaire prélevé sur EDTA ou citrate, suspensions de leucocytes et suspensions de lymphomonocytes. Sang périphérique prélevé sur EDTA et sang médullaire prélevé sur EDTA ou sodium citrate Le sang périphérique prélevé sur EDTA, ou sang médullaire prélevé sur EDTA ou sodium citrate destiné à l'extraction de l'arn, doit être prélevé selon les indications du laboratoire, transporté à +2 / +8 C et conservé à +2 / +8 C pendant quatre heures maximum. À partir de sang périphérique ou médullaire, il est conseillé de procéder à la séparation des lymphomonocytes sur Ficoll TM en suivant les indications du laboratoire. La quantité optimale de leucocytes à partir desquels extraire l ARN total est d environ de cellules. Ne pas congeler le sang périphérique ou médullaire de façon à éviter la dénaturation de l ARN. Les instructions pour l'extraction de l'arn sont fournies dans la Notice d'instructions et d'utilisation du produit «EXTRAzol». Suspensions de lymphomonocytes ou de leucocytes. Les suspensions de lymphomonocytes ou de leucocytes destinés à l'extraction de l'arn doivent être préparées selon les indications du laboratoire, remises en suspension dans une solution physiologique stérile ou PBS stérile, comptées et conservées à +2 / +8 C pendant quatre heures maximum. La quantité optimale de lymphomonocytes ou de leucocytes à partir desquels extraire l ARN total est d environ de cellules. Ne pas congeler les suspensions de lymphomonocytes ou de leucocytes afin d'éviter la dénaturation de l ARN. Les instructions pour l'extraction de l'arn sont fournies dans la Notice d'instructions et d'utilisation du kit «EXTRAzol». Substances interférentes L'ADNc doit être produit à partir d'arn ne contenant ni héparine, ni hémoglobine ni Ficoll TM afin d'éviter des phénomènes d'inhibition et la survenue trop fréquente de résultats non valables. Aucune donnée n'est disponible concernant les éventuels phénomènes d'inhibition par des médicaments antibiotiques, antiviraux, chimiothérapiques ou immunosuppresseurs. Contrôles d amplification Chaque étape d'amplification doit impérativement être validée en préparant une réaction de contrôle négatif et une réaction de contrôle positif. Pour le contrôle négatif, utiliser de l'eau bi-distillée stérile (non comprise dans le produit) à ajouter à la réaction à la place de l'adnc extrait de l'échantillon. Pour le contrôle positif, utiliser le produit «PHILADELPHIA Q - PCR Standard». Contrôles de la qualité Il est conseillé de valider toute la procédure d'analyse de chaque session, extraction, transcription et amplification, en utilisant un échantillon négatif et un échantillon positif déjà testés. Notes sur la réaction de transcription inverse Le kit «RT - kit plus» est un système de transcription inverse de l'arn qui utilise les "random primer" pour l'amorçage de la réaction de polymérisation. Il requiert l'ajout d'arn extrait dans un volume de 10 µl et il atteint un volume final de 25 µl. La quantité optimale d'arn total à ajouter à la réaction de transcription inverse avec volume final de 25 µl est d'environ 1 µg. Mise en œuvre de la session d amplification real time (À effectuer dans la zone d'amplification / révélation des produits d'amplification) Avant de lancer la session, en se référant à la documentation de l'instrument il est nécessaire de: - allumer le thermocycleur pour real time, allumer l'ordinateur de contrôle, lancer le logiciel dédié et ouvrir une session "absolute quantification". - paramétrer le "détecteur" pour la sonde pour avec le "reporteur" = "FAM" et le "quencher" = "TAMRA" et l'appeler "". - paramétrer le "détecteur" pour la sonde pour avec le "reporteur" = "FAM" et le "quencher" = "TAMRA" et l'appeler "". - pour chaque puits de la microplaque utilisé, paramétrer les "détecteur" (type de fluorescence à mesurer), la "passive reference" = "ROX" (normalisation de la fluorescence mesurée) et le type de réaction (échantillon, contrôle négatif d'amplification, ADN standard avec quantité connue correspondante). Remplir la Grille de travail annexée à cette notice d'instructions et d'utilisation en reportant ces informations ou imprimer l'organisation de la microplaque. La Grille de travail doit être suivie scrupuleusement pendant le transfert du mélange de réaction et des échantillons dans les puits. Remarque : pour déterminer le titre de l'adnc dans l'échantillon initial, il est nécessaire de préparer deux séries de réactions avec les Q - PCR standard (10 5 copies, 10 4 copies, 10 3 copies, 10 2 copies) pour obtenir les deux Courbes standard, une pour et une pour. Remarque : Les puits de chaque duplication doivent être référencés avec le même nom. Légende: Illustration d'un exemple d'organisation de l'analyse de 3 échantillons. E1 E1 E2 E2 E3 E3 CN CN E1 E1 E2 E2 E3 E3 CN CN E1 - E5 : réactions pour avec les échantillons à analyser ; CN : réaction pour avec le Contrôle négatif ; 10 2, 10 3, 10 4, 10 5, réactions pour avec l'adn standard 10 2, 10 3, 10 4 et 10 5 copies. E1 - E5: réactions pour avec les échantillons à analyser; CN: réactions pour avec le Contrôle négatif d'amplification ; 10 2, 10 3, 10 4, 10 5, réactions pour avec l'adn standard 10 2, 10 3, 10 4 et 10 5 copies. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 5/17 SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 6/17

5 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX - En consultant la documentation de l'instrument, sur le thermocycleur paramétrer le cycle de température et un volume de réaction de 25 µl et, lorsqu'il est possible, sélectionner l'option "9600 emulation". Cycle des températures d'amplification Phase Températures Temps Décontamination 50 C 2 min. Dénaturation initiale 95 C 10 min. 45 cycles 95 C 15 sec. 60 C 1 min. Préparation de l'amplification (À effectuer dans la zone d'extraction / préparation de la réaction d'amplification) Avant de lancer la session, il est nécessaire de: - prélever et décongeler les tubes contenant les échantillons à analyser. Remuer gentiment les tubes pour 5 secondes pour reporter le contenu sur le fond et les conserver dans la glace; - prélever et décongeler les tubes de AmpliMIX (bouchon à l'insert BLANC) et de AmpliMIX nécessaires à la session. Se rappeler que le contenu de chaque tube suffit à la préparation de 24 réactions et que toutes les réactions pour et pour doivent être préparées en duplication. Remuer gentiment pendant 5 secondes pour reporter le contenu sur le fond et les conserver dans la glace; - prélever et décongeler le même nombre de tubes de AmpliPROBE (bouchon à l'insert BLANC) et de AmpliPROBE que le nombre de tubes d'amplimix respectifs. Remuer gentiment les tubes pendant 5 secondes pour reporter le contenu sur le fond et les conserver dans la glace; - prélever le même nombre de tubes d'amplimaster que de AmpliMIX. À l'encre indélébile, inscrire "" et la date sur l'étiquette des tubes. Centrifuger les tubes pendant 5 secondes pour reporter le contenu sur le fond et les conserver dans la glace; - prélever le même nombre de tubes d'amplimaster que d' AmpliMIX. À l'encre indélébile, écrire "" et la date sur l'étiquette des tubes. Centrifuger les tubes pendant 5 secondes pour reporter le contenu sur le fond et les conserver dans la glace; - prélever et décongeler les tubes de Q - PCR Standard nécessaires pour effectuer les réactions pour et pour qui doivent être préparées en duplication. Remuer gentiment les tubes et les centrifuger pendant 5 secondes pour reporter le contenu sur le fond et les conserver dans la glace; - prélever la microplaque d'amplification utilisée au cours de la session en prêtant attention à la manipuler avec des gants sans poudre et veiller à ne pas endommager les puits. 1. Transférer 100 µl de AmpliMIX dans le tube d'amplimaster marqué "". Mélanger soigneusement et pipeter trois fois le volume de 100 µl dans le mélange. 2. Transférer 100 µl de AmpliPROBE dans le tube d'amplimaster marqué "". Mélanger soigneusement et pipeter trois fois le volume de 100 µl dans le mélange. 3. Mélanger pendant 5 secondes au vortex à faible vitesse, en évitant de produire de la mousse. 4. Centrifuger les tubes pendant 5 secondes, pour en reporter le contenu sur le fond. 5. Répéter la procédure du point 1 au point 4 en ajoutant au tube d'amplimaster marqué "", le réactif AmpliMIX et le réactif AmpliPROBE. 6. Transférer, en les déposant soigneusement sur le fond, 20 µl du mélange de réaction "" ainsi obtenu dans les puits "" de la Microplaque d'amplification comme défini précédemment sur la Grille de travail (ne pas oublier de prévoir deux puits pour chaque échantillon, deux puits pour le Contrôle négatif et deux puits pour chaque Q - PCR Standard). 7. Transférer, en les déposant soigneusement sur le fond, 20 µl du mélange de réaction "" ainsi obtenu dans les puits "" de la Microplaque d'amplification comme défini précédemment sur la Grille de travail (ne pas oublier de prévoir deux puits pour chaque échantillon, deux puits pour le Contrôle négatif et deux puits pour chaque Q - PCR Standard). Remarque: Le mélange de réaction résiduel éventuel doit être conservé dans les tubes "" et "" à l'abri de la lumière, à une température de -20 C pendant un temps maximum d'un mois. Ne congeler et décongeler le mélange de réaction QU'UNE SEULE FOIS. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 7/17 8. Transférer, en les déposant délicatement dans le mélange de réaction, 5 µl d'adnc du premier échantillon dans deux puits "" et dans deux puits "" de la Microplaque d'amplification conformément à la Grille de travail élaborée précédemment. Procéder de même avec les ADNc des autres échantillons. 9. Transférer, en les déposant délicatement dans le mélange de réaction, 5 µl d'eau bi-distillée stérile (non comprise dans le produit), pour le contrôle négatif d'amplification dans les deux puits "" et dans les deux puits "" de la Microplaque d'amplification conformément à la Grille de travail élaborée précédemment. 10. Transférer, en les déposant délicatement dans le mélange de réaction, 5 µl de - Q - PCR Standard 10 2 copies dans les deux puits "" et dans les deux puits "" de la Microplaque d'amplification conformément à la Grille de travail élaborée précédemment. Procéder de même avec les autres - Q - PCR Standard (10 3, 10 4, 10 5 copies). 11. Sceller soigneusement la Microplaque d'amplification à l'aide du Film adhésif d amplification. 12. Transférer la Microplaque d'amplification dans le thermocycleur pour real time dans la zone d'amplification / révélation des produits d'amplification et lancer le cycle thermique d'amplification. Analyse qualitative des résultats Les valeurs enregistrées de la fluorescence émise par la sonde spécifique pour (détecteur FAM "") dans les réactions d'amplification et par la sonde spécifique pour (détecteur FAM "") dans les réactions d'amplification doivent être analysées à l'aide du logiciel de l'instrument. Avant de procéder à l'analyse, en consultant la documentation de l'instrument, il est nécessaire de: - paramétrer manuellement l'intervalle de calcul du Niveau de fluorescence de base (Baseline) du cycle 6 au cycle 15*. *Remarque: Dans le cas d'un échantillon positif à titre de ou élevé, la fluorescence FAM de la sonde spécifique pour ou peut commencer d'augmenter avant le 15ème cycle. Dans ce cas, l'intervalle de calcul du Niveau de la fluorescence de base doit être paramétré du cycle 6 au cycle dans lequel la fluorescence FAM commence à augmenter. - paramétrer manuellement le Seuil (Threshold) de la fluorescence FAM "" à 0,2; - paramétrer manuellement le Seuil (Threshold) de la fluorescence FAM "" à 0,2; Les valeurs de fluorescence émises par les sondes spécifiques dans les réactions d'amplification et la valeur Seuil de fluorescence permettent de déterminer le Cycle Seuil (Thresold cycle, Ct), le cycle dans lequel on a atteint la valeur Seuil de fluorescence. Dans les réactions d'amplification avec le Q - PCR Standard 10 5, la valeur de Ct émise par les sondes spécifiques par et par est utilisée pour valider l'amplification et la révélation comme décrit dans le tableau suivant: Réaction du Q - PCR Standard 10 5 (FAM "") Résultat du test Amplification / Révélation Ct 25 POSITIF CORRECTE Réaction du Q - PCR Standard 10 5 (FAM "") Résultat du test Amplification / Révélation Ct 25 POSITIF CORRECTE Si le résultat de la réaction d'amplification du Q - PCR Standard 10 5 est Ct > 25 ou Ct Non interprétable (Undetermined), cela indique que l'adn cible n'a pas été révélé. Cela indique la survenue de problèmes en phase d'amplification ou de révélation (volumes de mélange de réaction erronés, distribution erronée de mélange de réaction ou des standards, dégradation de la sonde ou des standards, paramétrage erroné de la position des standards, paramétrage erroné du cycle de température) qui peuvent engendrer des résultats erronés. La session n'est pas valable et doit être recommencée à partir de la phase d'amplification. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 8/17

6 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX Dans les réactions d'amplification du Contrôle négatif la valeur de Ct par les sondes spécifiques pour et sont utilisées pour valider l'amplification et la révélation comme décrit dans le tableau suivant: Réaction du Contrôle négatif (FAM "") Résultat du test Amplification Ct Non interprétable NÉGATIF CORRECTE Réaction du Contrôle négatif (FAM "") Résultat du test Amplification Ct Non interprétable NÉGATIF CORRECTE Si le résultat de la réaction d'amplification du Contrôle négatif est différent de Ct Non interprétable (Undetermined) cela indique que la présence d'adn cible a été révélé. Cela indique aussi la survenue de problèmes au cours de la phase d'amplification (contamination) pouvant engendrer des résultats erronés et faux positifs. La session n'est pas valable et doit être recommencée à partir de la phase d'amplification. Dans les réactions d'amplification de chaque échantillon, les valeurs de Ct par la sonde spécifique pour sont utilisées pour révéler la présence d'adnc cible tandis que les valeurs de Ct par la sonde spécifique pour sont utilisées pour valider l'extraction, la transcription inverse, l'amplification et la révélation. Remarque: Avec le software de l'instrument (Results, Amplification plot, delta Rn vs Cycle) vérifier que le Ct soit déterminé exclusivement par un accroissement rapide et régulier des valeurs de fluorescence et ne soit pad dû aux phénomènes de pic ou d'accroissement du signal de fond. Ce produit est en mesure de révéler une quantité minimum de 10 copies d'adnc de par réaction d amplification (voir paragraphe sur les Caractéristiques des performances page 13). Les résultats comme Ct des réactions d'amplification relatives à chaque échantillon sont utilisés pour la recherche de, comme décrit dans le tableau ci-dessous: Réaction de l'échantillon (FAM "") Ct Non interprétable Ct Interprétable (FAM "") Ct > 29 ou Ct Non interprétable Échantillon adapté Résultat du test ADNc de non adapté non valable - Ct 29 adapté valable, négatif NON RÉVÉLÉ Ct > 29 ou Ct Non interprétable adapté* valable, positif PRÉSENT Ct 29 adapté valable, positif PRÉSENT Si le résultat de la réaction d'amplification d'un échantillon est Ct Non interprétable pour la sonde spécifique par et Ct > 29 ou Ct Non interprétable pour la sonde spécifique par, cela indique qu'il n'a pas été possible de révéler correctement l'adnc de l'. Cela indique la survenue de problèmes pendant la phase d'amplification (amplification inefficace ou nulle), de transcription inverse (transcription inverse inefficace ou nulle) ou d'extraction (absence d'arn, présence d'inhibiteurs, ARN extrait dégradé), qui peuvent générer des résultats erronés et faux négatifs. L'échantillon n'est pas adapté, le test n'est pas valable et doit être répété à partir de l'extraction d'un nouvel échantillon. Si le résultat de la réaction d'amplification d'un échantillon est Ct Non interprétable pour la sonde spécifique par et Ct 29 pour la sonde spécifique par l', l'adnc de n'a pas été révélé dans l'adnc extrait de l'échantillon, mais on ne peut exclure que l'adnc de soit présent à un titre inférieur au seuil de révélation du produit (voir paragraphe sur les Caractéristiques des performances, page 13). Dans ce cas, le résultat serait un faux négatif. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 9/17 Les résultats obtenus avec ce test doivent être interprétés compte-tenu de toutes les données cliniques et des autres examens de laboratoire concernant le patient. *Remarque: Lorsque dans la réaction d'amplification relative à un échantillon la présence d'adnc de a été révélée mais que l'amplification de l'adnc d' présente un Ct > 29 ou Ct Non interprétable, l'échantillon est quoi qu'il en soit adapté du point de vue qualitatif et le résultat du test est valable. Dans ce cas il n'est cependant pas possible d'utiliser les données pour l'analyse quantitative des résultats (voir pages suivantes). Analyse quantitative des résultats Après avoir exécuté la procédure pour l'analyse qualitative des résultats, il est possible de procéder à l'analyse quantitative des résultats relatifs aux échantillons positifs. Les valeurs de Ct par les sondes spécifiques pour et dans les réactions d'amplification des quatre Q - PCR Standard sont utilisées pour calculer les deux Courbes standard (Standard Curve) de la session d'amplification et pour valider l'amplification et la révélation, comme décrit dans le tableau suivant: Courbe standard (FAM "") Intervalle d'acceptabilité Amplification / Révélation Coefficient de Corrélation (R2) 0,990 R2 1,000 CORRECTE Courbe standard (FAM "") Intervalle d'acceptabilité Amplification / Révélation Coefficient de Corrélation (R2) 0,990 R2 1,000 CORRECTE Si la valeur du Coefficient de corrélation (R2) ne s'inscrit pas dans les limites, cela indique la survenue de problèmes pendant la phase d'amplification ou de révélation (préparation erronée du mélange de réaction, distribution erronée du mélange de réaction ou des standards, dégradation de la sonde ou des standards, paramétrage erroné de la position des standards, paramétrage erroné du cycle de température) qui peuvent générer des résultats erronés. La session n'est pas valable et doit être recommencée à partir de la phase d'amplification. Les valeurs de Ct des sondes spécifiques par et par dans les réactions d'amplification de chaque échantillon et la Courbe standard par et par de la session d'amplification sont utilisées pour calculer la Quantité (Quantity) d'adnc de et de présentes dans les réactions relatives aux échantillons. Ce produit est en mesure de doser de à 10 copies d'adnc de par réaction d amplification (voir paragraphe sur les Caractéristiques des performances page 13), comme décrit dans le tableau ci-dessous: Résultat de l'échantillon (FAM "") ADNc de par réaction Quantité >1 x 10 6 SUPÉRIEUR À x 10 1 Quantité 1 x 10 6 = Quantité Quantité < 1 x 10 1 INFÉRIEUR À 10 Pour chaque réaction d amplification, ce produit est en mesure de doser de à 100 copies d ADNc d (voir paragraphe sur les Caractéristiques des performances page 13). Cependant, aux fins du dosage quantitatif, l intervalle utile est compris entre et environ copies (correspondant à un Ct d'environ 29), comme décrit dans le tableau suivant: Résultat de l'échantillon (FAM "") Quantité >1 x 10 6 ADNc d par réaction SUPÉRIEUR À DE COPIES ~ 1 x 10 3 Quantité 1 x 10 6 = Quantité Quantité < ~ 1 x 10 3 INFÉRIEUR À ~ COPIES (ÉCHANTILLON NON-ADAPTÉ) SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 10/17

7 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX Analyse des duplications Lorsque ce produit est utilisé pour le dosage quantitatif de, les résultats (Quantité) des réactions d'amplification relatives aux échantillons sont utilisés pour calculer le pourcentage de copies d ADNc de par rapport au nombre total de copies d ADNc d ( %) présentes dans l'échantillon initial, suivant cette formule: Quantité d ADNc de % = x 100 Quantité d ADNc d Avant de procéder au calcul de % il est nécessaire d'analyser les données obtenues dans les deux réplications de l'échantillon. Le tableau suivant illustre les différents cas pouvant se présenter lors d'une session d'amplification et l'approche conseillée pour l'évaluation de la donnée qui doit être interprétée compte tenu de toutes les données cliniques et les autres examens de laboratoire concernant le patient: Échantillon Conformité de l'échantillon ADNc de Quantité d ADNc de 1 réplication adapté PRÉSENT moyenne des Quantités d ADNc 2 réplication adapté PRÉSENT de 1 réplication adapté NON RÉVÉLÉ 2 réplication adapté NON RÉVÉLÉ 1 réplication adapté PRÉSENT (< 10 copies) 2 réplication adapté NON RÉVÉLÉ 1 réplication adapté PRÉSENT (> 10 copies) 2 réplication adapté NON RÉVÉLÉ 1 réplication non adapté 2 réplication adapté 1 réplication non adapté 2 réplication non adapté PRÉSENT ou NON RÉVÉLÉ PRÉSENT ou NON RÉVÉLÉ PRÉSENT ou NON RÉVÉLÉ PRÉSENT ou NON RÉVÉLÉ 0 Quantité d ADNc de si présent Quantité d ADNc d moyenne de la Quantité d ADNc d moyenne de la Quantité d ADNc d moyenne de la Quantité d ADNc d AB Répéter l'analyse de l'échantillon Répéter l'analyse de l'échantillon Répéter l'analyse de l'échantillon Les résultats obtenus avec ce test doivent être interprétés compte-tenu de toutes les données cliniques et des autres examens de laboratoire concernant le patient. LIMITES DE LA PROCÉDURE Avec ce produit, utiliser uniquement l'adnc obtenu par transcription inverse à partir de l'arn extrait des échantillons humains suivants : sang périphérique prélevé sur EDTA ou citrate, sang médullaire prélevé sur EDTA ou citrate, suspensions de leucocytes et suspensions de lymphomonocytes. Avec ce produit, ne pas utiliser l'adnc obtenu par transcription inverse d'arn extrait des échantillons héparinés: l'héparine inhibe les réactions de transcription inverse et d'amplification des acides nucléiques et génère des résultats erronés. Ne pas utiliser avec ce produit, l'adnc obtenu par transcription inverse d'arn contaminé à l hémoglobine ou Ficoll TM : ces substances peuvent inhiber les réactions de transcription inverse et d'amplification des acides nucléiques et générer des résultats erronés. Aucune donnée n'est disponible concernant les éventuels phénomènes d'inhibition par des médicaments antibiotiques, antiviraux, chimiothérapiques ou immunosuppresseurs. Les résultats obtenus avec ce produit sont subordonnés à la bonne exécution de la collecte, du transport, de la conservation et de la préparation des échantillons; pour éviter tout résultat erroné, il est donc essentiel d'y apporter tout le soin possible et de suivre attentivement les instructions fournies avec les produits pour l'extraction des acides nucléiques. Compte tenu de sa forte sensibilité analytique, la méthode d'amplification nichée des acides nucléiques utilisée dans ce produit, est sujette à contamination par des échantillons cliniques positifs pour, par des contrôles positifs et par les produits mêmes de la réaction d'amplification. Les contaminations entraînent des résultats faux positifs. Les modes de réalisation du produit peuvent limiter les contaminations; cependant, ces phénomènes ne peuvent être évités qu'avec une bonne pratique des techniques de laboratoire et le respect scrupuleux des consignes fournies dans cette notice. Pour éviter tout accident pouvant avoir des conséquences graves pour l'utilisateur ou des tierces personnes, ce test doit être réalisé par un personnel formé à la manipulation aussi bien des échantillons biologiques pouvant transmettre des agents infectieux que des produits chimiques classés comme dangereux. Pour éviter tout accident pouvant avoir des conséquences graves pour l'utilisateur ou des tierces personnes, l utilisation de produit requiert le port de vêtements de travail et des locaux adaptés à la manipulation aussi bien des échantillons biologiques pouvant transmettre des agents infectieux que des produits chimiques classés comme dangereux. Ce produit doit être manipulé par un personnel formé aux procédures de biologie moléculaire, notamment l'extraction, l'amplification et la révélation d'acides nucléiques afin d'éviter d'aboutir à des résultats erronés. L'utilisation de ce produit demande de disposer de locaux distincts pour l'extraction / préparation des réactions d'amplification et pour l'amplification / révélation des produits d'amplification afin d'éviter tout résultat faux positif. L'utilisation de ce produit demande le port de vêtements de travail et d'instruments dédiés pour l'extraction / préparation des réactions d'amplification et pour l'amplification / révélation des produits d'amplification afin d'éviter tout résultat faux positif. Un résultat négatif obtenu avec ce produit indique que l'adnc n'a pas été révélé dans le produit de la transcription inverse obtenu à partir de l'arn extrait de l'échantillon mais il n'est pas à exclure que l'adnc soit présent à un titre inférieur au seuil de révélation du produit (consulter le paragraphe sur les Caractéristiques des performances page 13); dans ce cas, le résultat serait un faux négatif. À l'instar de tous les autres dispositifs diagnostiques, les résultats obtenus avec ce produit doivent être interprétés compte tenu de toutes les données cliniques et des autres examens de laboratoire concernant le patient. À l'instar de tout autre dispositif de diagnostic, ce produit présente un risque résiduel de résultats non valables, faux positifs et faux négatifs. Ce risque résiduel ne peut être supprimé ni même diminué. Dans certaines situations, par exemple le diagnostic d'urgence, ce risque résiduel peut contribuer à la prise de décisions erronées pouvant avoir de graves conséquences pour le patient. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 11/17 SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 12/17

8 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX CARACTÉRISTIQUES DES PERFORMANCES Sensibilité analytique: limite de révélation pour La sensibilité analytique pour de ce test permet d'identifier la présence d'environ 10 molécules d'adn cible dans les 5 µl d'adnc obtenus, ajoutés à la réaction d'amplification. La sensibilité analytique pour du test, entendue comme seuil de révélation, a été testée à partir d'un ADN plasmidique contenant le produit d'amplification dont la concentration initiale a été mesurée par spectrophotométrie. L'ADN plasmidique a été utilisé, à un titre de 10 copies / 5 µl, dans 50 réplications pour effectuer l'amplification avec les produits ELITechGroup S.p.A. (voir paragraphie sur les produits accessoires). Les résultats finaux sont récapitulés dans le tableau suivant: Échantillons N positifs négatifs 10 copies ADN plasmidique Sensibilité analytique: intervalle linéaire de mesure pour La sensibilité analytique de ce test pour, entendue comme intervalle linéaire de mesure, permet de déterminer un titre de à 10 molécules d'adn cible dans les 5 µl d'adnc obtenus, ajoutés à la réaction d'amplification. La sensibilité analytique du test pour, entendue comme intervalle linéaire de mesure, a été déterminée en utilisant un panel de dilutions (1 log 10 entre une dilution et l'autre) d'adn plasmidique contenant le produit d'amplification dont la concentration initiale a été mesurée par spectrophotométrie. Les points du panel de 10 7 molécules par réaction à 10 1 molécules par réaction ont été utilisés dans 9 réplications pour réaliser l'amplification avec les produits ELITechGroup S.p.A. L'analyse des données obtenues, réalisée par régression linéaire, a démontré que le test présente une réponse linéaire pour tous les points du panel (coefficient de corrélation linéaire supérieur à 0,99). Le seuil supérieur de l'intervalle linéaire de mesure pour a été fixé à 10 6 molécules / 5 µl, dans un logarithme d'une valeur standard d'amplification Q - PCR Standard à la plus haute concentration, (10 5 molécules / 5µL). Le seuil inférieur de l'intervalle linéaire de mesure pour a été fixé à 10 molécules / 5 µl, dans un logarithme d'une valeur du standard d'amplification Q - PCR Standard à la plus basse concentration, (10 2 molécules / 5µL). Les résultats finaux sont récapitulés dans le tableau suivant: Seuil supérieur Seuil inférieur Sensibilité analytique pour : Précision Intervalle linéaire de mesure copies ADNc de / réaction 10 copies ADNc de / réaction L'étude de la précision du test pour, entendue comme variabilité des résultats obtenus avec différentes réplications d'un échantillon au cours d'une même session, a permis de déterminer un Coefficient de variation pourcentage moyen (CV %) de 24,9% compris dans un intervalle linéaire de mesure de 10 6 molécules / 5 µl à 10 molécules / 5 µl. Sensibilité analytique pour : Fidélité L'étude de la fidélité du test pour, entendue comme différence entre la moyenne des résultats obtenus au cours d'une même session avec différentes réplications d'un échantillon et la valeur théorique de la concentration de l'échantillon a permis de déterminer un manque de fidélité moyen de 9,9% compris dans un intervalle linéaire de mesure de 10 6 molécules / 5 µl à 10 molécules / 5 µl. Sensibilité analytique: intervalle linéaire de mesure pour La sensibilité analytique de ce test pour, entendue comme intervalle linéaire de mesure, permet de déterminer un titre de à 100 molécules d'adn cible dans les 5 µl d'adnc obtenus, ajoutés à la réaction d'amplification. La sensibilité analytique du test, entendue comme intervalle linéaire de mesure, a été déterminée en utilisant un panel de dilutions (1 log 10 entre une dilution et l'autre) d'adn plasmidique contenant le produit d'amplification dont la concentration initiale a été mesurée par spectrophotométrie. Les points du panel de 10 7 molécules par réaction à 10 1 molécules par réaction ont été utilisés dans 9 réplications pour réaliser l'amplification avec les produits ELITechGroup S.p.A. L'analyse des données obtenues, réalisée par régression linéaire, a démontré que le test présente une réponse linéaire pour les points du panel de à 100 molécules (coefficient de corrélation linéaire supérieur à 0,99). Le seuil supérieur de l'intervalle linéaire de mesure pour a été fixé à 10 6 molécules / 5 µl, dans un logarithme d'une valeur standard d'amplification Q - PCR Standard à la plus haute concentration, (10 5 molécules / 5µL). La limite inférieure de l'intervalle linéaire de mesure pour a été fixée à environ molécules / 5 µl, correspondant à un Ct d'environ 29, cette valeur représentant la valeur utile minimale aux fins de ce dosage quantitatif. Les résultats finaux sont récapitulés dans le tableau suivant: Seuil supérieur Seuil inférieur Sensibilité analytique pour : Précision Intervalle linéaire de mesure copies d'adnc d' / réaction ~ copies ADNc d' / réaction L'étude de la précision du test pour, entendue comme variabilité des résultats obtenus avec différentes réplications d'un échantillon au cours d'une même session, a permis de déterminer un Coefficient de Variation pourcentage moyen (CV %) de 11,5% compris dans un intervalle linéaire de mesure de 10 6 molécules / 5 µl à 100 molécules / 5 µl. Sensibilité analytique pour : Fidélité L'étude de la fidélité du test pour, entendue comme différence entre la moyenne des résultats obtenus au cours d'une même session avec différentes réplications d'un échantillon et la valeur théorique de la concentration de l'échantillon a permis de déterminer un manque de fidélité moyenne de 11,8% compris dans un intervalle linéaire de mesure de 10 6 molécules / 5 µl à 100 molécules / 5 µl. Sensibilité diagnostique: efficacité de la révélation et quantification sur les polymorphismes éventuels La sensibilité diagnostique du test, entendue comme efficacité de révélation et quantification sur d éventuels polymorphismes, a été évaluée en comparant des séquences avec des banques de données nucléidiques. L'examen de l'alignement des régions choisies pour l'hybridation des oligonucléotides d'amorçage d'amplimix ( et ) et des sondes fluorescentes des AmpliPROBE ( et ) avec les séquences disponibles dans la banque de données des gènes humaines BCR et ont démontré leur conservation et l'absence de mutations significatives. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 13/17 SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 14/17

9 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX Sensibilité diagnostique: échantillons positifs La sensibilité diagnostique du test, entendue comme confirmation d'échantillons cliniques positifs, a été évaluée à travers l'analyse d'un panel d'échantillons positifs pour et elle s'est avérée égale à 90,5%. La sensibilité diagnostique a été évaluée en utilisant comme matériel de référence 42 échantillons positifs pour, testés suivant une méthode d'amplification real time, par un laboratoire extérieur. Chaque échantillon a été utilisé pour effectuer la procédure d'analyse, transcription inverse et amplification, avec les produits ELITechGroup S.p.A. Les résultats finaux sont récapitulés dans le tableau suivant. Échantillons N positifs négatifs Échantillons positifs pour Les deux échantillons attendus positifs se sont révélés négatifs aussi bien avec les produits ELITechGroup S.p.A. qu'avec le système d'amplification real time du laboratoire extérieur, cette donnée est adapté à la donnée clinique puisque les échantillons proviennent de patients en rémission moléculaire majeure. Spécificité analytique: marqueurs potentiellement interférents La spécificité analytique du test, entendue comme réactivité croisée avec d'autres marqueurs potentiellement interférents, a été évaluée en comparant des séquences avec des banques de données nucléotidiques. L'examen de l'alignement des régions choisies pour l'hybridation des oligonucléotides d'amorçage des AmpliMIX ( et ) et des sondes fluorescentes des AmpliPROBE ( et ) avec les séquences disponibles dans la banque de données de régions génomiques humaines différentes des gènes humains BCR et, notamment celles du génome humain complet, a démontré la spécificité et l'absence d'homologies significatives. Spécificité diagnostique: échantillons négatifs La spécificité diagnostique du test, entendue comme confirmation d'échantillons cliniques négatifs, a été évaluée à travers l'analyse d'un panel d'échantillons négatifs pour et elle s'est avérée supérieure à 94,7%. La sensibilité diagnostique a été évaluée en utilisant comme matériel de référence 20 échantillons négatifs pour, testés suivant une méthode d'amplification real time, par un laboratoire extérieur. Chaque échantillon a été utilisé pour effectuer la procédure d'analyse, transcription inverse et amplification, avec les produits ELITechGroup S.p.A. Les résultats sont reportés dans le tableau suivant. Échantillons N positifs négatifs Échantillons négatifs pour Un échantillon s'est révélé non valable. Remarque : Les données et les résultats complets des tests effectués pour l'évaluation des caractéristiques des performances du produit ont été enregistrés dans la Section 7 du Fascicule Technique de Produit "PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX" et "PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE", FTP RTSG BIBLIOGRAPHIE J. Gabert et al. (2003) Leukemia 17: E. Beillard et al. (2003) Leukemia 17: PROBLÈMES ET SOLUTIONS ADN cible non révélé dans les réactions des Q - PCR Standard ou Coefficient de corrélation de la Courbe standard non valable Causes éventuelles Solutions Vérifier les volumes de réactifs distribués pendant la Erreur de préparation du mélange de réaction. préparation du mélange de réaction. Distribuer avec soin les réactions dans la microplaque en suivant la grille de travail. Erreur de distribution dans la microplaque. Vérifier les volumes de mélange de réaction distribués. Vérifier les volumes de standards distribués. Dégradation de la sonde. Dégradation des standards. Erreur de paramétrage de l'instrument. Présence d'adn cible dans la réaction de Contrôle négatif Causes éventuelles Erreur de distribution dans la microplaque. Erreur de paramétrage de l'instrument. Microplaque mal scellée. Contamination de l'eau bi-distillée stérile. Contamination du mix d'amplification. Contamination de la zone d'extraction / préparation des réactions d'amplification. Présence élevée de fluorescence de base dans les réactions Causes éventuelles Erreur de paramétrage de la baseline Utiliser un nouvel aliquot de sonde. Utiliser un nouvel aliquot de standards. Vérifier la position des réactions des standards paramétrée sur l'instrument. Vérifier le cycle de température paramétré sur l'instrument. Solutions Éviter de répandre le contenu des tubes contenant les échantillons. Changer toujours d'embout entre un échantillon et l'autre. Distribuer soigneusement échantillons, contrôles négatifs et standards dans la microplaque en suivant la grille de travail. Vérifier la position des échantillons, contrôles négatifs et standards paramétrée sur l'instrument Sceller méticuleusement la microplaque. Utiliser un nouvel aliquot d'eau stérile. Utiliser un nouvel aliquot de mix d'amplification. Nettoyer les surfaces et les instruments à l'aide d'un détergent aqueux, laver les blouses et remplacer les tubes et les embouts utilisés. Solutions Paramétrer l'intervalle de calcul de la "baseline" dans une plage de cycles où la fluorescence de base est déjà stabilisée (contrôler les enregistrements "component") et où la fluorescence du signal n'a pas encore commencé à croître, par exemple du cycle 9 au cycle 15. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 15/17 SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 16/17

10 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX LÉGENDE DES SYMBOLES Référence du catalogue. Seuil supérieur de température. Numéro du lot. Date de péremption (dernier jour du mois). Diagnostic In vitro. Conforme aux exigences essentielles de la Directive européenne 98\79\CE concernant le diagnostic in vitro. Contenu suffisant pour "x" tests. CONT Contenus. Attention, consulter le mode d'emploi. Fabriqué par. Ce produit permet à l'acheteur de l'utiliser pour l'amplification et la révélation de séquences d'acides nucléiques afin de fournir des services de diagnostic humain in vitro. Ce droit est accordé uniquement si le produit fourni est utilisé conjointement aux produits couverts par une licence "Positive Control" ou "Q - PCR Standard" d ELITechGroup S.p.A. L'achat de ce produit ne confère aucun droit général ni aucune autre licence, d'aucun type, différents de cette autorisation spécifique d'utilisation. SCH mrtsg07210m_fr 28/05/13 Révision 04 Page 17/17

11 GRILLE DE TRAVAIL A B C D E F G H

12 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE RTSG P PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE RTSG P TE DES MATIÈRES APPLICATION Page 1 DESCRIPTION DU PRODUIT Page 1 MATÉRIEL FOURNI Page 2 MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI Page 2 AUTRES PRODUITS REQUIS Page 2 AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Page 3 PROCÉDURE Page 4 BIBLIOGRAPHIE Page 4 LÉGENDE DES SYMBOLES Page 4 APPLICATION Le produit «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE» est un test quantitatif d amplification des acides nucléiques pour la recherche de l ADNc du transcrit BCR-, translocation t(9;22), chromosome Philadelphia, variante (), et pour le dosage quantitatif de l'adnc de par rapport à l'adnc du gène () dans le produit de la réaction de transcription inverse obtenu de l ARN total extrait d échantillons de sang périphérique prélevé sur EDTA ou citrate, sang médullaire prélevé sur EDTA ou citrate, suspensions de lymphomonocytes et suspensions de leucocytes. Ce produit est utilisé, conjointement aux données cliniques et à d autres examens de laboratoire, dans le diagnostic et le monitorage des cas de leucémie myéloïdes chronique (CML), leucémie aiguë lymphoblastique (ALL) et leucémie myéloïde aiguë (AML). Les résultats obtenus avec ce produit peuvent être alignés à l'échelle internationale (IS) en utilisant le facteur de conversion qui peut être atteint par le produit «PHILADELPHIA RNA Reference» de ELITechGroup S.p.A., étalonné par rapport au "1 st World Health Organization (WHO) International Genetic Reference Panel for quantitation of BCR- translocation by RQ-PCR". DESCRIPTION DU PRODUIT ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Bureaux: Tel Fax emd.support@elitechgroup.com Site internet: C Le produit fournit les composants suivants : AmpliPROBE Une sonde fluorescente spécifique pour pour l'amplification en temps réel dans une solution stabilisante, pré-répartie dans deux tubes jetables (bouchon à l'insert BLANC). Chaque tube contient 110 µl de solution, suffisants pour 24 tests. La sonde pour, marquée avec le fluorophore FAM et bloquée avec le fluorophore TAMRA est spécifique d'une région de l'arnm résultant du transcrit BCR- variante. SCH mrtsg07210p_fr 28/05/13 Révision 04 Page 1/4 AmpliPROBE Une sonde fluorescente spécifique pour pour l'amplification en temps réel dans une solution stabilisante, pré-répartie dans deux tubes jetables. Chaque tube contient 110 µl de solution, suffisants pour 24 tests. La sonde pour marquée avec le fluorophore FAM et bloquée avec le fluorophore TAMRA, est spécifique d une région de l ARNm du gène humain codant. Le produit permet d effectuer 24 déterminations en duplication pour l ADNc de et 24 déterminations en duplication pour l ADNc d, standard et contrôles inclus (par exemple, 19 patients au cours d'une même session). MATÉRIEL FOURNI Composant Description Quantité Composition Étiquetage AmpliPROBE AmpliPROBE sonde fluorescente marquée avec FAM / TAMRA, bouchon BLANC sonde fluorescente marquée avec FAM / TAMRA 2 x 110 µl 2 x 110 µl Oligonucléotides fluorescents, TRIS base, TRIS chlorhydrate, Glycérol, Triton X-100 Oligonucléotides fluorescents, TRIS base, TRIS chlorhydrate, Glycérol, Triton X-100 MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI - Hotte à flux laminaire. - Gants jetables en latex ou équivalent. - Malaxeur vortex. - Microcentrifugeuse de paillasse ( tr/min). - Micro pipettes et embouts stériles avec filtre pour aérosol ou à distribution positive (0,5-10 µl, 2-20 µl, 5-50 µl, µl, µl). - Eau bi-distillée stérile. - Thermostat programmable avec système optique de détection de la fluorescence (thermocycleur pour temps réel). AUTRES PRODUITS REQUIS Les réactifs pour l'extraction de l'arn des échantillons à analyser, les réactifs pour la transcription inverse de l ARN, les réactifs optimisés pour l amplification, les réactifs d'amorçage (oligonucléotides) et les ADN standard à quantité connue, ne sont pas fournis dans ce produit. Pour procéder à ces phases d'analyse, il est conseillé d'utiliser les produits accessoires suivants fabriqués par ELITechGroup S.p.A.: «EXTRAzol» (code EXTR01), kit d'extraction de l'arn à partir d'échantillons cellulaires et non cellulaires; le kit permet d'effectuer 50 extractions. «RT - kit plus» (code BRK200), produit de transcription inverse de l ARN avec "random primer"; le produit permet d'effectuer 50 extractions. «Q - PCR Alert AmpliMASTER» (code RTS000), mélange de réactifs optimisés, microplaques et feuilles adhésives pour l'amplification en temps réel; le produit permet d'effectuer 96 réactions. «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX» (code ), oligonucléotides d'amorçage pour l'amplification en temps réel de l'adnc de et de l'adnc d'; le produit permet d'effectuer 24 déterminations en duplication pour l'adnc de et 24 déterminations en duplication pour l'adnc d'. «PHILADELPHIA Q - PCR Standard» (code STDG07-210), ADN plasmidique à quantité connue pour obtenir la courbe standard pour l'adnc de et pour l'adnc d'; le produit permet d'effectuer 4 sessions. «PHILADELPHIA RNA Reference» (code SPG07-210), des mélanges d'arn total en quantité connue par convertir les résultats à l'échelle internationale (IS) du "1 st World Health Organization (WHO) International Genetic Reference Panel for quantitation of BCR- translocation by RQ- PCR"; le produit permet d'effectuer 6 sessions. SCH mrtsg07210p_fr 28/05/13 Révision 04 Page 2/4 - -

13 PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE RTSG P PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE RTSG P AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Ce produit est réservé uniquement à l'usage in vitro. Avertissements et précautions Manipuler et éliminer tous les échantillons biologiques comme s'ils pouvaient transmettre des agents infectieux. Éviter le contact direct avec les échantillons biologiques. Éviter les éclaboussures ou les aérosols. Le matériel qui entre en contact avec les échantillons biologiques doit être décontaminé à l hypochlorite de sodium à 3% pendant un temps minimum de 30 minutes ou autoclavé à 121 C pendant une heure avant d être éliminé. Manipuler et éliminer tous les réactifs et tous les matériels utilisés pour le test comme s'ils étaient potentiellement infectieux. Éviter le contact direct avec les réactifs. Éviter les éclaboussures ou les aérosols. Les déchets doivent être traités et éliminés conformément aux normes de sécurité. Le matériel jetable combustible doit être incinéré. Les déchets liquides contenant des acides ou des bases doivent être neutralisés avant leur élimination. Porter des vêtements de protection et des gants et protéger les yeux et le visage. Ne jamais pipeter les solutions à la bouche. Ne pas manger, boire, fumer ni se maquiller dans l'environnement de travail. Se laver parfaitement les mains après avoir manipulé les échantillons et les réactifs. Éliminer les réactifs en surplus et les déchets en respectant les réglementations en vigueur. Lire toutes les instructions fournies dans le produit avant de procéder au test. Respecter scrupuleusement les consignes fournies dans le produit pendant l exécution du test. Respecter la date de péremption du produit. N utiliser que les réactifs présents dans le produit et ceux conseillés par le producteur. Ne pas mélanger des réactifs provenant de lots différents. Ne pas utiliser de réactifs provenant de produits d autres fabricants. Avertissements et précautions à adopter en biologie moléculaire Les procédures de biologie moléculaire, comme l extraction, la transcription inverse, l amplification et la révélation d acides nucléiques doivent être exécutées par un personnel ayant reçu une formation appropriée afin d éviter tout risque de résultats erronés dus en particulier à la dénaturation des acides nucléiques ou à la contamination des échantillons par des produits d amplification. Il est nécessaire de disposer de zones distinctes pour l extraction / préparation des réactions d amplification et pour l amplification / révélation des produits d amplification. Ne jamais introduire un produit d amplification dans la zone d extraction / préparation des réactions d amplification. Il est nécessaire de disposer de blouses, gants et instruments dédiés pour l'extraction / préparation des réactions d'amplification et pour l'amplification / révélation des produits d'amplification. Ne jamais transférer les blouses, gants et instruments de la zone dédiée à l'amplification / révélation des produits d'amplification vers la zone dédiée à l'extraction / préparation des réactions d'amplification. Les échantillons ne doivent être utilisés que pour ce type d'analyse. Les échantillons doivent être manipulés sous une hotte à flux laminaire. Les tubes contenant des échantillons différents ne doivent jamais être ouverts simultanément. Les pipettes utilisées pour manipuler les échantillons ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Les pipettes doivent être du type à distribution positive ou utiliser des embouts à filtre pour aérosol. Les embouts utilisés doivent être stériles, dépourvus de ADNses et ARNses, dépourvus d'adn et d ARN. Les réactifs doivent être manipulés sous une hotte à flux laminaire. Les réactifs nécessaires à l'amplification doivent être préparés de façon à être utilisés en une seule session de travail. Les pipettes utilisées pour manipuler les réactifs ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Les pipettes doivent être de type à distribution positive ou utiliser des embouts à filtre pour aérosol. Les embouts utilisés doivent être stériles, dépourvus de ADNses et ARNses, dépourvus d'adn et d ARN. Les produits d'amplification doivent être manipulés de façon à en limiter le plus possible la dispersion dans l environnement afin d'éviter tout risque de contamination. Les pipettes utilisées pour manipuler les produits d'amplification ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Avertissements et précautions concernant les réactifs Les tubes contenant l'ampliprobe sont des tubes jetables. Ils ne doivent donc être utilisés qu'une seule fois pour la préparation du mélange de réactions. L'utilisation d'ampliprobe n'implique pas de phrases de risque (R) et implique les conseils de prudence suivants (S): S Ne pas respirer les gaz/fumées/vapeurs/aérosols. Eviter le contact avec les yeux. SCH mrtsg07210p_fr 28/05/13 Révision 04 Page 3/4 PROCÉDURE Le produit «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliPROBE» doit être utilisé conjointement aux produits «Q - PCR Alert AmpliMASTER» et «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX» pour obtenir le mélange de réaction. Les réactifs AmpliPROBE et AmpliPROBE sont prêts à l'emploi. Il suffit donc de les ajouter directement aux mélanges de réaction respectifs. La procédure complète, qui prévoit la préparation et l'exécution de deux réactions d'amplification en temps réel dans deux puits différents de microplaque avec un thermostat programmable avec système optique de détection de la fluorescence (thermocycleur pour temps réel), est décrite de façon détaillée dans la notice d'instructions et d'utilisation jointe au produit «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX». Les caractéristiques des performances et les limites de la procédure du test complet de recherche et dosage de l'adnc de BCR- sont décrites de façon détaillée dans la notice d'instructions et d'utilisation jointe au kit «PHILADELPHIA Q - PCR Alert AmpliMIX». CONT Référence du catalogue. BIBLIOGRAPHIE J. Gabert et al. (2003) Leukemia 17: E. Beillard et al. (2003) Leukemia 17: Seuil supérieur de température. Numéro du lot. LÉGENDE DES SYMBOLES Date de péremption (dernier jour du mois). Diagnostic In vitro. Conforme aux exigences essentielles de la Directive européenne 98\79\CE concernant le diagnostic in vitro. Contenu suffisant pour "x" tests. Contenus. Attention, consulter le mode d'emploi. Fabriqué par. Ce produit permet à l'acheteur de l'utiliser pour l'amplification et le marquage de séquences d'acides nucléiques afin de fournir des services de diagnostic humain in vitro. Ce droit est accordé uniquement si le produit fourni est utilisé conjointement aux produits couverts par une licence "Positive Control" ou "Q - PCR Standard" d ELITechGroup S.p.A. L'achat du produit ne confère aucun droit général ni aucune autre licence d'aucun type différente de ce droit spécifique d'utilisation. SCH mrtsg07210p_fr 28/05/13 Révision 04 Page 4/4

14 Q - PCR Alert AmpliMASTER réactifs optimisés pour l'amplification real time RTS000 RTS000/2 Q - PCR Alert AmpliMASTER réactifs optimisés pour l'amplification real time RTS000 RTS000/2 TE DES MATIÈRES APPLICATION Page 1 DESCRIPTION DU KIT Page 1 MATÉRIEL FOURNI DANS LE KIT Page 2 MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI DANS LE KIT Page 2 PRODUITS ACCESSOIRES Page 3 AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Page 3 PROCÉDURE Page 4 LÉGENDE DES SYMBOLES Page 4 APPLICATION Le produit «Q - PCR Alert AmpliMASTER» est partie de tests quantitatifs d'amplification des acides nucléiques pour la recherche et le dosage d'un ADN cible, suivant la méthode de l'amplification real time, dans des échantillons d'adn ou d'adnc obtenus d'arn extrait et pour la discrimination allélique avec la méthode de l'amplification real time. Le produit est un accessoire des produits de la série «Q - PCR Alert AmpliMIX», «Q - PCR Alert AmpliPROBE», «Q - PCR Standard» et «Positive Control» d ELITechGroup S.p.A. Ce produit est utilisé dans la préparation de tests diagnostiques basés sur la méthode de l'amplification real time. DESCRIPTION DU KIT ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Bureaux: Tel Fax emd.support@elitechgroup.com Site internet: +2 C +8 C Le kit au format entier (RTS000) fournit le mélange de réactifs optimisés pour l'amplification real time AmpliMASTER, dans une solution stabilisante répartie dans quatre éprouvettes prête à l'emploi, trois Amplification microplate de 96 puits et trois feuilles adhésives d'obturation de l'amplification. Le kit au format réduit (RTS000/2) fournit le mélange de réactifs optimisés pour l'amplification real time AmpliMASTER, dans une solution stabilisante répartie dans deux éprouvettes prête à l'emploi, deux Amplification microplate de 96 puits et deux feuilles adhésives d'obturation de l'amplification. Le mélange de réactifs fournit le système tampon, le chlorure de magnésium, les nucléotides triphosphatés, le fluorophore ROX de référence passif pour la normalisation de la fluorescence, l'enzyme Uracil N-glycosidase (UNG) pour l'inactivation des contaminations dérivant de produit d'amplification et l'enzyme Taq ADN polymérase à activation thermique (hot start). Remarque: les Amplification microplate ne doivent jamais être utilisés avec des instruments Applied Biosystems de la série 7000, qui installent un bloc thermique "FAST". Le kit au format entier (RTS000) permet d'effectuer 96 déterminations, standards et contrôles compris. Le kit au format réduit (RTS000/2) permet d'effectuer 48 déterminations, standards et contrôles compris. Kit au format entier code RTS000 MATÉRIEL FOURNI DANS LE KIT Composant Description Quantité Composition Étiquetage AmpliMASTER mélange de réactifs optimisés 4 x 340 µl Amplification microplate (Microplaque pour l'amplification) Amplification Sealing Sheet (Feuille adhésive d'obturation de l'amplification) Kit au format réduit code RTS000/2 microplaque de 96 puits de 0,2 ml TRIS base, TRIS chlorhydrate, Glycérol, Chlorure de magnésium, Désoxyribonucléotides triphosphate, ROX, Uracil N- Glycosidase, Taq ADN polymérase feuille adhésive d'obturation Composant Description Quantité Composition Étiquetage AmpliMASTER mélange de réactifs optimisés 2 x 340 µl Amplification microplate (Microplaque pour l'amplification) Amplification Sealing Sheet (Feuille adhésive d'obturation de l'amplification) microplaque de 96 puits de 0,2 ml TRIS base, TRIS chlorhydrate, Glycérol, Chlorure de magnésium, Désoxyribonucléotides triphosphate, ROX, Uracil N- Glycosidase, Taq ADN polymérase feuille adhésive d'obturation MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI DANS LE KIT - Hotte à flux laminaire. - Gants jetables en latex ou similaires. - Malaxeur vortex. - Microcentrifuge de table ( Tr/min). - Micro pipettes et embouts stériles avec filtre pour aérosol ou à distribution positive (0,5-10 µl, 2-20 µl, 5-50 µl, µl, µl). - Eau bi-distillée stérile. - Thermostat programmable avec système optique de détection de la fluorescence (thermocycleur pour temps réel). - - SCH mrts000_fr 28/05/13 Révision 04 Page 1/4 SCH mrts000_fr 28/05/13 Révision 04 Page 2/4

15 Q - PCR Alert AmpliMASTER réactifs optimisés pour l'amplification real time RTS000 RTS000/2 Q - PCR Alert AmpliMASTER réactifs optimisés pour l'amplification real time RTS000 RTS000/2 PRODUITS ACCESSOIRES Les réactifs d'amorçage (oligonucléotides), les réactifs de détection (sondes fluorescentes), les ADN standard à quantité connue et les contrôle hétérozygotes d'adn plasmidique ne sont pas compris dans ce produit. Pour procéder à ces phases d'analyse, il est conseillé d'utiliser les produits accessoires suivants produits par ELITechGroup S.p.A.: série «Q - PCR Alert AmpliMIX», oligonucléotides d'amorçage pour l'amplification real time. série «Q - PCR Alert AmpliPROBE», sondes fluorescentes pour l'amplification real time. série «Q - PCR Standard», ADN plasmidique à quantité connue pour obtenir la courbe standard. série «Positive Control», contrôle hétérozygote d'adn plasmidique. AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Ce kit est réservé uniquement à l'usage in vitro. Avertissements et précautions Manipuler et éliminer tous les échantillons biologiques comme s'il s'agissait de matériel potentiellement infectieux. Éviter le contact direct avec les échantillons biologiques. Éviter les éclaboussures ou les aérosols. Le matériel qui entre en contact avec les échantillons biologiques doit être décontaminé à l'hypochlorite de sodium à 3% pendant un temps minimum de 30 minutes ou en autoclave à 121 C pendant une heure avant d'être éliminé. Manipuler et éliminer tous les réactifs et tous les matériels utilisés pour le test comme s'ils étaient potentiellement infectieux. Éviter le contact direct avec les réactifs. Éviter les éclaboussures ou les aérosols. Les déchets doivent être traités et éliminés conformément aux normes de sécurité. Le matériel jetable combustible doit être incinéré. Les déchets liquides contenant des acides ou des bases doivent être neutralisés avant leur élimination. Porter des vêtements de protection et des gants et protéger les yeux / le visage. Ne jamais pipeter à la bouche aucune solution. Ne pas manger, boire, fumer ni se maquiller dans l'environnement de travail. Se laver parfaitement les mains après avoir manipulé les échantillons et les réactifs. Éliminer les réactifs en surplus et les déchets en respectant les réglementations en vigueur. Lire toutes les instructions fournies dans le kit avant de procéder au test. Respecter scrupuleusement les consignes fournies dans le kit pendant l'exécution du test. Respecter la date de péremption du kit. N'utiliser que les réactifs présents dans le kit et ceux conseillés par le producteur. Ne pas mélanger des réactifs provenant de lots différents. Ne pas utiliser de réactifs provenant de kits d'autres fabricants. Avertissements et précautions à adopter pour la biologie moléculaire Les procédures de biologie moléculaire, comme l'extraction, la transcription inverse, l'amplification et le marquage d'acides nucléiques doivent être exécutés par un personnel ayant reçu une formation appropriée afin d'éviter tout risque de résultat erronés dus en particulier à la dénaturalisation des acides nucléiques des échantillons ou à la contamination des échantillons par des produits d'amplification. Il est nécessaire de disposer de locaux séparés pour l'extraction / préparation des réactions d'amplification et pour l'amplification / marquage des produits d'amplification. Ne jamais introduire un produit d'amplification dans la zone d'extraction / préparation des réactions d'amplification. Il est nécessaire de disposer de blouses, gants et instruments dédiés pour l'extraction / préparation des réactions d'amplification et pour l'amplification / marquage des produits d'amplification. Ne jamais transférer blouses, gants et instruments de la zone dédiée à l'amplification/marquage des produits d'amplification à la zone dédiée à l'extraction/préparation des réactions d'amplification. Les échantillons ne doivent être utilisés que pour ce type d'analyse. Les échantillons doivent être manipulés sous une hotte à flux laminaire. Les éprouvettes contenant des échantillons différents ne doivent jamais être ouvertes simultanément. Les pipettes utilisées pour manipuler les échantillons ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Les pipettes doivent être du type à distribution positive ou utiliser des embouts à filtre pour aérosol. Les embouts utilisés doivent être stériles, dépourvus de DNases et RNases, dépourvus d'adn et RNA. SCH mrts000_fr 28/05/13 Révision 04 Page 3/4 Les réactifs doivent être manipulés sous une hotte à flux laminaire. Les réactifs nécessaires à l'amplification doivent être préparés de façon être utilisés en une seule session de travail. Les pipettes utilisées pour manipuler les réactifs ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Les pipettes doivent être de type à distribution positive ou utiliser des embouts à filtre pour aérosol. Les embouts utilisés doivent être stériles, dépourvus de DNases et RNases, dépourvus d'adn et RNA. Les produits d'amplification doivent être manipulés de façon à en limiter le plus possible la dispersion dans le milieu afin d'éviter tout risque de contamination. Les pipettes utilisées pour manipuler les produits d'amplification ne doivent servir qu'à cet usage exclusif. Avertissements et précautions concernant les composants L'utilisation d'amplimaster n'implique pas de phrases de risque (R) et implique les conseils de prudence suivants (S): S Ne pas respirer les gaz/fumées/vapeurs/aérosols. Eviter le contact avec les yeux. PROCÉDURE Le produit «Q - PCR Alert AmpliMASTER» doit être utilisé avec les produits des séries «Q - PCR Alert AmpliMIX» et «Q - PCR Alert AmpliPROBE» pour obtenir le mélange de réaction. L'AmpliMASTER est prêt à l'emploi. Il doit donc être utilisé directement dans la préparation du mélange de réaction. La procédure complète, qui prévoit la préparation et l'exécution d'une réaction d'amplification real time en micro-plaque avec un thermostat programmable avec système optique de détection de la fluorescence (thermocycleur pour temps réel), est décrite de façon détaillée dans la notice d'instructions et d'utilisation jointe aux kits de la série «Q - PCR Alert AmpliMIX». Les caractéristiques des prestations et les limites de la procédure du test complet de recherche et de dosage de l'adn cible sont décrites dans le détail dans la notice d'instructions et d'utilisation jointe aux produits de la série «Q - PCR Alert AmpliMIX». CONT Référence du catalogue. Seuils de température. Code du lot. LÉGENDE DES SYMBOLES Date de péremption (dernier jour du mois). Diagnostic In vitro. Conforme aux exigences essentielles de la Directive européenne 98/79 concernant les dispositifs médicaux. Contenu suffisant pour "N" tests. Contenus. Attention, consulter le mode d'emploi. Fabriqué par. Ce produit permet à l'acheteur de l'utiliser pour l'amplification et la révélation de séquences d'acides nucléiques afin de fournir des services de diagnostic humain in vitro. Ce droit est accordé uniquement si le produit fourni est utilisé conjointement aux produits couverts par une licence "Positive Control" ou "Q - PCR Standard" d ELITechGroup S.p.A. L'achat de ce produit ne confère aucun droit général ni aucune autre licence, d'aucun type, différents de cette autorisation spécifique d'utilisation. SCH mrts000_fr 28/05/13 Révision 04 Page 4/4