VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION
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- Olivier Nadeau
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1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date de la dernière adaptation Dénombrement des Entérocoques intestinaux dans l eau (36 C) (I-MET-066,I-MET-071et I-MET-071a) Filtration ensemencement de milieux de culture solides lecture des géloses ISO Eaux de boisson - Eaux de piscine - Autres eaux désinfectées ou propres - La méthode peut être appliquées à tous types d eaux, excepté en présence d une abondante de matières en suspension ou germes interférents. 20/02/2013
2 Résumé des critères de performance : - Répétabilité : 0.13 log ufc/100 ml - Ecart type de reproductibilité : 0.05 log ufc/100 ml - Incertitude de mesure (reproductibilité) : 0.14 log ufc/100 ml La validation répond aux exigences de la procédure LAB 00 P180 Le laboratoire qui veut appliquer cette méthode doit démontrer que les critères ci-dessous soient remplis pour les combinaisons matrices/paramètres : Participation à un test interlaboratoire et obtention de résultats corrects. Obtention d une répétabilité de 0,5 log et une reproductibilité de 1,0 log. Historique de validation : Edition Révision par/date Motif de la révision Modifications 1 MC Wilem / Adaptation au nouveau template et à la nouvelle procédure de validation (P180) Adaptation au nouveau template du dossier de validation du 24/09/2009 avec annexe photos.
3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Dénombrement des Entérocoques intestinaux dans l eau (36 C) (I-MET-066, I-MET-071 et I-MET-071a) Filtration ensemencement de milieux de culture solides lecture des géloses ISO Eaux de boisson - Eaux de piscine - Autres eaux désinfectées ou propres - La méthode peut être appliquées à tous types d eaux, excepté en présence d une abondante de matières en suspension ou germes interférents. Vérification MC Wilem Responsable section microbiologie LFSAGx MC Wilem Responsable section microbiologie Date: 20/02/2013 Handtekeningen - Signatures: Sé Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Collaborateurs de la section microbiologie LFSAGx A. Georges, A. Mandiki, F. Marlier, M. Martin, S. Petit, B. Polderman et MC Wilem Ce dossier de validation a été clôturé le 24/09/2009 Adaptation à la nouvelle procédure de validation (LAB-00-P-180) : février 2013 Handtekeningen - Signatures: A. Dubois Responsable Qualité LFSAGx Sé Date : 20/02/2013 Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
4 Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation Matrices / paramètres de validation / critères Matrices : - Tous les types d eau Paramètres de validation : - Répétabilité - Reproductibilité / incertitude de mesure - Justesse ou justesse relative Critères - Répétabilité : 0.13 log ufc/ 100 ml - Ecart type de reproductibilité : 0.05 log ufc/ 100 ml - Incertitude de mesure (reproductibilité) : 0.14 log ufc/ 100 ml - Justesse : z-scores conformes aux tests interlaboratoires LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
5 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 1 DÉNOMBREMENT DES ENTÉROCOQUES INTESTINAUX DANS L EAU (36 C)... 1 (I-MET-071)... 1 SAMENVATTING VALIDATIEGEGEVENS RÉSUMÉ DES DONNÉES DE VALIDATION INTRODUCTION VALIDATION MATÉRIAUX UTILISÉS ORGANISATION RÉSULTATS JUSTESSE TESTS INTERLABORATOIRES CONCLUSIONS ANNEXES... 6 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
6 1 Introduction Ce dossier de validation est une mise à jour du dossier de validation pour le dénombrement des Entérocoques intestinaux dans l eau à 36 C suivant la norme ISO Le dossier de validation initial a été clôturé le 24/09/2009. Il a été adapté suite à la mise en application de la nouvelle procédure de validation LAB-00-P-180. La détermination de l incertitude de mesure y a été ajoutée. 2 Validation Cette validation a été effectuée sur base d échantillons artificiellement contaminés par une solution contenant des Entérocoques intestinaux. 2.1 Matériaux utilisés - Cultiloops Enterococcus faecalis (lot : ) - Eau peptonée tamponnée (Lot : 8L0526) - Tryptone sel (Lot : 8M0345) - Eau stérile - Gélose Slanetz et Bartley (Lot : B0367) - Gélose BEA (Lot : 9A2321) 2.2 Organisation L échantillon pour l essai consiste en 100ml d eau stérile contaminée avec une dilution du matériau certifié. La préparation de l échantillon pour l essai est décrite dans l annexe 1. 7 personnes ont participé à cette validation : A. Georges, A. Mandiki, F. Marlier, M. Martin, S. Petit, B. Polderman et MC Wilem. Chaque participant a suivi le mode opératoire décrit dans la procédure «Dénombrement des Entérocoques intestinaux dans l eau (36 C)» (détails de l analyse : annexe 1) 2.3 Résultats La répétabilité et l écart type de reproductibilité ont été calculés conformément à la norme ISO Les tableaux présentant les tests de Grubbs et de Cochran peuvent être trouvés dans l annexe 2. Le détail des résultats peut être consulté au laboratoire. Les résultats suivants ont été obtenus : Répétabilité : 0,13 log ufc/ 100 ml Ecart type de reproductibilité : 0,05 log ufc/ 100 ml Incertitude de mesure (2.8 x écart type de reproductibilité) : 0.14 log ufc/ 100 ml LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
7 2.4 Justesse Analyse d échantillons certifiés (échantillons à teneur garantie Senate) : Date Analyste Résultat obtenu (ufc/100ml) Résultat obtenu (log ufc/100ml) Résultat attendu (log ufc/100ml) Limite de dispersion (log) Août ± Ecart observé entre le résultat attendu et le résultat obtenu (log ufc/ml) 3 Tests interlaboratoires Résultats des tests interlaboratoires effectués en 2009 et 2010: Organisateur Date Analyste z-scores LGC Standards Avril Juin Septembre Avril <10 ufc/100ml. Résultat correct, pas de z-score calculable. 2 <10 ufc/100ml. Résultat correct, pas de z-score calculable. 3 <10 ufc/100ml. Résultat correct, pas de z-score calculable. Juin Septembre LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
8 4 Conclusions Détermination de la répétabilité, de l écart type de reproductibilité et de l incertitude de mesure : Répétabilité : 0,13 log ufc/ 100 ml Ecart type de reproductibilité : 0,05 log ufc/ 100 ml Incertitude de mesure : 0.14 log ufc/ 100 ml Etude de la justesse Pour les tests retenus, les écarts observés par rapport au résultat attendu n excèdent pas les limites de dispersion indiquées par le fournisseur. La justesse a également été prouvée par l obtention de bons résultats lors de la participation à des tests interlaboratoires. Qualification du personnel Les personnes ayant participé à cette validation sont qualifiées pour le dénombrement de la flore mésophile aérobie totale. Elles devront régulièrement participer à des analyses interlaboratoires et obtenir des résultats satisfaisants. 5 Annexes - Annexe 1 : Préparation de l échantillon pour l essai - Annexe 2 : Analyse des résultats (Tests de Grubbs et de Cochran) - Annexe 3 : Photos LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
9 Annexe 1 : Préparation des échantillons pour l essai Détermination des conditions d analyse (durée d incubation des standards avant contamination des échantillons, dilutions utiles) h00 Mise en culture d un cultiloops de Enterococcus faecalis dans de l eau peptonée Incubation à 37 C (incubateur 313) 11h00 Dilution de cette solution dans du peptone sel jusqu à la d-5 Etalement des dilutions -3, -4, -5 sur NA Lecture des boîtes : d-3 : 36 ufc d-4 : 4 ufc d-5 : 0 ufc Ensemencement de 100ml d eau stérile avec 1ml de la dilution d-3 Filtration et placement de la membrane sur gélose Slanetz et Bartley Lecture des boîtes : boîtes très contaminées : incomptables Matrice : Eau stérile 9h00 Mise en culture d un cultiloops de Enterococcus faecalis dans de l eau peptonée Incubation à 37 C (incubateur 313) 11h30 Dilution de cette solution dans du peptone sel jusqu à la d-4 Ensemencement d échantillons de 100ml d eau stérile avec 1ml de la d-3, 500µl de la d-3, 1ml de la d-4. Filtration et placement des membranes sur gélose Slanetz et Bartley Incubation à 37 C (incubateur 313) pendant 48h h00 : Lecture des boîtes de gélose SB d-3 : 51 d-3/2 : 20 d-4 : 3 Il a été décidé de contaminer des échantillons de 100ml d eau stérile avec 500µl de la dilution d-3. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
10 Détails de l analyse Chaque participant reçoit 6 flacons d eau contaminée et suit le schéma d analyse suivant : Filtration des échantillons Placer les membranes filtrantes sur milieu Slanetz et Bartley Incubation 44±4h à 37 C (incubateur 410 (AM,AG,MM,MCW), incubateur 313 (SP,BP,FM)) Lecture des boîtes Transfert sur BEA Incubation 2h à 44 C (incubateur 312) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
11 Annexe 2 : Analyse des résultats (tests de Grubbs et de Cochran) Le détail des résultats peut être consultés au laboratoire. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
12 Annexe 3 : Photos Filtration de 100ml de l échantillon Ensemencement de la gélose Slanetz et Bartley LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
13 Aspect des colonies sur la gélose Slanetz et Bartley : LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /11
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