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1 system Intact PTH (PTH intacte) fr Intact PTH 8K /R4 B8K252 Faire attention aux modifications Révision de novembre 2008 Pour de plus amples informations, contacter le Service Clients Abbott. Lire attentivement cette notice avant d'utiliser le dosage et suivre scrupuleusement les instructions. La fiabilité des résultats du dosage ne peut pas être garantie si ces instructions ne sont pas strictement respectées. Légende des symboles utilisés Référence Dispositif médical de diagnostic in vitro Numéro de lot Date d'expiration Conserver entre 2 et 8 C Consulter les instructions d'utilisation Numéro de série Fabricant Cupules réactionnelles Godetséchantillons Septum Bouchons de remplacement Lot de réactifs CD-ROM de dosages Numéro de contrôle L'explication complète des symboles utilisés pour la dénomination des composants se trouve au paragraphe REACTIFS. 1

2 DENOMINATION ARCHITECT Intact PTH DOMAINE D'APPLICATION ARCHITECT Intact PTH est un dosage immunologique microparticulaire par chimiluminescence (CMIA) in vitro pour la détermination quantitative de l'hormone parathyroïdienne (PTH = parathyroid hormone) intacte dans le sérum et le plasma humains sur l' System. RESUME ET EXPLICATION DU TEST La PTH est un polypeptide à chaîne unique de 84 acides aminés produit par la glande parathyroïde. La PTH1-84 intacte est sécrétée dans la circulation sanguine avant d'être soumise à de nombreuses modifications protéolytiques. Contrairement à ses produits de dégradation, la concentration de la PTH intacte est relativement indépendante de la vitesse de la filtration glomérulaire et reflète la portion biologiquement active de l'hormone. 1 Le rôle principal de la PTH consiste à réguler le taux de calcium sanguin. La synthèse et la sécrétion de la PTH sont stimulées par de faibles concentrations de calcium ionisé (Ca i ) en l'espace de quelques minutes. L'activité biologique de la PTH consiste à augmenter l'absorption du calcium alimentaire, à diminuer la clairance rénale et à mobiliser les réserves de calcium squelettique. Des concentrations anormalement élevées de Ca i suppriment la sécrétion de PTH. 1 En association aux taux de calcium sérique, le dosage de la PTH constitue une aide dans le diagnostic différentiel de l'hypercalcémie, de l'hypocalcémie et de troubles parathyroïdiens. La détermination de la PTH est importante dans le cadre du contrôle des patients dialysés pour gérer l'ostéodystrophie rénale. PRINCIPES BIOLOGIQUES DE LA METHODE ARCHITECT Intact PTH est un dosage immunologique de type sandwich en deux étapes pour la détermination quantitative de la PTH intacte dans le sérum et le plasma humains utilisant la technologie de dosage immunologique microparticulaire par chimiluminescence (CMIA) avec des protocoles de dosage flexibles, appelée Chemiflex. Dans un premier temps, l'échantillon, le diluant de dosage et les microparticules paramagnétiques recouvertes d'anticorps anti-pth sont mis en présence. La PTH intacte présente dans l'échantillon se lie aux microparticules recouvertes d'anticorps anti-pth. Après lavage, le conjugué d'anticorps anti-pth marqué à l'acridinium est ajouté dans un deuxième temps pour former un mélange réactionnel. Après un autre cycle de lavage, les solutions de préactivation et d'activation sont ajoutées au mélange réactionnel. La réaction chimiluminescente qui en résulte est mesurée en unités relatives de lumière (URL). Il existe une relation directe entre la quantité de PTH intacte présente dans l'échantillon et les URL détectées par le système optique System. Pour de plus amples informations concernant l'analyseur et la technologie de dosage, se référer au chapitre 3 du Manuel Technique REACTIFS Kit de réactifs REMARQUE : Certains conditionnements ne sont pas disponibles dans tous les pays ; contacter le distributeur local. ARCHITECT Intact PTH Reagent Kit (8K25) 1 ou 4 flacon(s) (6,6 ml chacun) de microparticules recouvertes d'anticorps anti-pth (chèvre, polyclonaux) dans du tampon TRIS. Conservateur : azide de sodium. 1 ou 4 flacon(s) (5,9 ml chacun) de conjugué d'anticorps anti-pth (chèvre, polyclonaux) marqué à l'acridinium dans du tampon MES contenant un stabilisant de protéines (de bœuf, de chèvre). Conservateur : azide de sodium. 1 ou 4 flacon(s) (10,0 ml chacun) de diluant de dosage PTH intacte contenant du tampon phosphate avec un stabilisant de protéines (de bœuf, de chèvre). Conservateur : azide de sodium. Diluant de dosage Multi-Assay Manual Diluent (7D82-50) 1 flacon (100 ml) d' Multi-Assay Manual Diluent contenant une solution saline tamponnée au phosphate. Conservateur : agent antimicrobien. Autres réactifs Pre-Trigger Solution Solution de préactivation contenant 1,32 % (m/v) d'eau oxygénée. Trigger Solution Solution d'activation contenant de l'hydroxyde de sodium 0,35 N. 2 Wash Buffer Tampon de lavage contenant une solution saline tamponnée au phosphate. Conservateur : agent antimicrobien. PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D'EMPLOI Pour diagnostic in vitro. Mesures de sécurité ATTENTION : Ce produit nécessite la manipulation d'échantillons humains. Il est recommandé de considérer tous les produits d'origine humaine comme potentiellement infectieux et de les manipuler selon les règles "OSHA Standard on Bloodborne Pathogens". 2 Les produits contenant ou susceptibles de contenir des agents infectieux doivent être manipulés selon les règles de biosécurité de niveau 2 3 ou autres règles de biosécurité en vigueur 4,5. Ce produit contient de l'azide de sodium. Se référer au paragraphe REACTIFS de cette notice pour une liste détaillée. Au contact d'un acide, dégage un gaz très toxique. Ne se débarrasser de ce produit et de son récipient qu'en prenant toutes précautions d'usage. Pour les produits non classifiés comme dangereux par la Directive européenne 1999/45/EC (amendée), une fiche de données de sécurité est disponible pour les professionnels sur simple demande. Pour de plus amples informations sur les mesures de sécurité lors du fonctionnement de l'analyseur, se référer au chapitre 8 du Manuel Technique Précautions d'emploi Ne pas utiliser les kits de réactifs au-delà de leur date d'expiration. Ne pas effectuer de pools de réactifs au sein d'un même kit ou entre plusieurs kits de réactifs. Avant de charger l'architect Intact PTH Reagent Kit sur l'analyseur pour la première fois, le flacon de microparticules doit être homogénéisé afin de remettre en suspension les microparticules qui se sont déposées pendant le transport. Pour de plus amples informations sur l'homogénéisation des microparticules, se référer au paragraphe "Procédure du dosage" de la partie "PROCEDURE" de cette notice. Des septums DOIVENT être utilisés afin d'empêcher l'évaporation et la contamination des réactifs et d'assurer leur intégrité. La fiabilité des résultats du dosage ne peut pas être garantie si les septums ne sont pas utilisés conformément aux instructions de cette notice. Afin d'éviter toute contamination, porter des gants propres lors de l'application d'un septum sur un flacon de réactif débouché. Une fois qu'un septum a été placé sur un flacon de réactif ouvert, ne pas retourner le flacon afin d'éviter toute fuite de réactif et de ne pas fausser les résultats du dosage. Avec le temps, il se peut que des liquides résiduels sèchent à la surface du septum. Il s'agit de sels secs qui n'ont aucun effet sur la performance du dosage. Pour de plus amples informations sur les précautions d'emploi lors du fonctionnement de l'analyseur, se référer au chapitre 7 du Manuel Technique Conditions de conservation L'ARCHITECT Intact PTH Reagent Kit doit être conservé entre 2 et 8 C en position verticale et peut être utilisé immédiatement après sa sortie du réfrigérateur (2 à 8 C). Les réactifs sont stables jusqu'à leur date d'expiration s'ils sont conservés et manipulés selon les indications du fabricant. L'ARCHITECT Intact PTH Reagent Kit peut être conservé à bord de l' System au maximum pendant 30 jours. Au-delà de ce délai, le kit de réactifs doit être jeté. Pour de plus amples informations sur le suivi de la stabilité des réactifs à bord de l'analyseur, se référer au chapitre 5 du Manuel Technique Les réactifs peuvent être conservés à l'intérieur ou à l'extérieur de l' System. Si les réactifs sont retirés de l'analyseur, les conserver entre 2 et 8 C (munis de septums et de bouchons de remplacement) en position verticale. Pour les réactifs conservés à l'extérieur de l'analyseur, il est recommandé de les laisser dans leurs portoirs et emballages d'origine afin de les maintenir dans une position verticale. Si l'un des flacons (munis de septums) ne reste pas en position verticale pendant sa conservation au réfrigérateur à l'extérieur de l'analyseur, le kit de réactifs entier doit être jeté. Une fois que les réactifs ont été retirés de l'analyseur, il faut initialiser une lecture du carrousel réactifs afin d'actualiser leur temps de stabilité à bord de l'appareil.

3 Indications d'altération des réactifs Un contrôle dont la valeur se situe en dehors des limites spécifiées peut indiquer une altération des réactifs ou des erreurs de technique. Les résultats des échantillons analysés dans la même série ne sont pas valables et ces échantillons devront être réanalysés. Une recalibration du dosage peut être nécessaire. Pour de plus amples informations sur le dépannage, se référer au chapitre 10 du Manuel Technique FONCTIONNEMENT DE L'APPAREIL Avant d'effectuer le dosage, le fichier du dosage ARCHITECT Intact PTH (numéro de dosage 581) doit être installé sur l' System à partir de l' Assay CD-ROM Addition E. Avant d'effectuer le dosage, le fichier du dosage ARCHITECT Intact PTH STAT (numéro de dosage 585) doit être installé sur l'architect i System avec fonction de traitement d'échantillons URGENTS à partir de l' Assay CD-ROM Addition E. Le dosage de routine peut ne pas être disponible sur tous les analyseurs Systems. Pour de plus amples informations concernant l'installation d'un fichier de dosage ainsi que l'affichage et la modification des paramètres de dosage, se référer au chapitre 2 du Manuel Technique Pour de plus amples informations sur l'impression des paramètres de dosage, se référer au chapitre 5 du Manuel Technique Pour une explication détaillée du fonctionnement de l'analyseur, se référer au Manuel Technique L'unité de résultat par défaut du dosage ARCHITECT Intact PTH est le pg/ml. Pour l'enregistrement des résultats, il est possible de sélectionner l'unité alternative pmol/l en réglant le paramètre de dosage "Unités de concentration résultat" sur pmol/l. Le facteur de conversion utilisé par l'appareil est de 0,106. Formule de conversion : (Concentration en pg/ml) x (0,106) = pmol/l PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS POUR L'ANALYSE Types d'échantillons à utiliser Les tubes de prélèvement d'échantillons mentionnés ci-après ont été validés pour être utilisés avec le dosage ARCHITECT Intact PTH. Sérum humain (l'utilisation de tubes avec gel séparateur de sérum peut entraîner une diminution de la concentration). Plasma humain prélevé sur : Héparinate de lithium Héparinate de sodium EDTA potassique Les anticoagulants liquides peuvent avoir un effet diluant entraînant une baisse des concentrations pour certains échantillons de patients. L' System n'est pas configuré pour détecter le type d'échantillon utilisé pour le dosage. Il revient par conséquent à l'utilisateur de s'assurer que le type d'échantillon correct est utilisé dans le dosage ARCHITECT Intact PTH. Les tubes contenant du citrate de sodium, du fluorure de sodium/de l'oxalate de potassium et de l'héparinate d'ammonium ne peuvent pas être utilisés avec le dosage ARCHITECT Intact PTH. Etats des échantillons Ne pas utiliser d'échantillons présentant les caractéristiques suivantes : inactivation par la chaleur pools d'échantillons forte hémolyse (> 500 mg/dl) contamination microbienne évidente échantillons prélevés sur des cadavres ou tout autre fluide corporel Pour obtenir des résultats exacts, les échantillons de sérum et de plasma ne doivent pas contenir de fibrine, ni de globules rouges ou autres particules en suspension. Les échantillons de sérum provenant de patients sous traitement anticoagulant ou thrombolytique peuvent contenir de la fibrine en raison d'une coagulation incomplète. Manipuler les échantillons de patients avec précaution afin d'éviter toute contamination croisée. Il est recommandé d'utiliser des pipettes ou des embouts de pipettes à usage unique. Pour obtenir des résultats optimaux, vérifier que les échantillons ne contiennent pas de bulles. Si des bulles sont présentes, les éliminer à l'aide d'un bâtonnet avant l'analyse. Utiliser un bâtonnet neuf pour chaque échantillon afin d'éviter toute contamination croisée. Préparation pour l'analyse Pour le traitement des tubes de prélèvement de sérum et de plasma, suivre les instructions données par le fabricant. La séparation gravimétrique n'est pas suffisante pour la préparation des échantillons. Homogénéiser soigneusement les échantillons décongelés en les passant au Vortex à une vitesse faible ou en les retournant 10 fois. Examiner les échantillons visuellement. En cas d'apparition de couches ou de stratifications, recommencer la procédure d'homogénéisation jusqu'à ce que les échantillons soient visiblement homogènes. Afin d'obtenir des résultats cohérents, les échantillons doivent être transférés dans des tubes pour centrifugeuse puis centrifugés à une vitesse x g pendant 10 minutes avant l'analyse dans les cas suivants : les échantillons contiennent de la fibrine, des globules rouges ou des particules en suspension les échantillons doivent être réanalysés. Transférer les échantillons clarifiés dans un godet-échantillon ou un tube aliquot pour l'analyse. Les échantillons centrifugés présentant une couche lipidique en surface doivent être transférés dans un godet-échantillon ou un tube aliquot. Veiller à transférer exclusivement l'échantillon clarifié sans substances lipémiques. Conservation Les échantillons peuvent être conservés avec ou sans le caillot ou les globules rouges au maximum pendant 2 jours s'ils sont placés au réfrigérateur entre 2 et 8 C. Si le dosage est effectué plus de 2 jours après le prélèvement, séparer le sérum ou le plasma du caillot ou des globules rouges et le conserver congelé. Des échantillons conservés congelés pendant 6 mois n'ont pas présenté de différences de performance. Eviter plus de 5 cycles de congélation/décongélation. Transport Avant d'expédier des échantillons, il est recommandé de les séparer du caillot ou des globules rouges. Lorsque des échantillons sont expédiés, ils doivent être conditionnés et étiquetés conformément à la législation régissant le transport des échantillons cliniques et des substances infectieuses. Les échantillons peuvent être expédiés sur de la glace ou de la carboglace. Ne pas dépasser les temps de conservation mentionnés ci-dessus. PROCEDURE Matériel fourni 8K25 ARCHITECT Intact PTH Reagent Kit Matériel nécessaire mais non fourni Analyseur System 1L66 - WW (excluding US) - Addition E 8K25-01 ARCHITECT Intact PTH Calibrators 8K25-10 ARCHITECT Intact PTH Controls 7D82-50 Pipettes ou embouts de pipettes (facultatif) Pour de plus amples informations sur le matériel requis pour les procédures de maintenance, se référer au chapitre 9 du Manuel Technique Procédure du dosage Avant de charger l'architect Intact PTH Reagent Kit sur l'analyseur pour la première fois, le flacon de microparticules doit être homogénéisé afin de remettre en suspension les microparticules qui se sont déposées pendant le transport. Après le premier chargement des microparticules, aucune homogénéisation supplémentaire n'est nécessaire. 3

4 Retourner le flacon de microparticules 30 fois. Examiner le flacon pour s'assurer que les microparticules sont remises en suspension. S'il reste encore des microparticules collées au flacon, continuer à retourner ce dernier jusqu'à ce qu'elles soient complètement remises en suspension. Si les microparticules ne sont pas remises en suspension, NE PAS LES UTILISER. Contacter Abbott Assistance. Une fois que les microparticules ont été remises en suspension, placer un septum sur le flacon. Pour toute information sur la mise en place des septums sur les flacons, se référer au paragraphe "Précautions d'emploi" de cette notice. Charger l'architect Intact PTH Reagent Kit sur l'architect i System ou l' System avec fonction de traitement d'échantillons URGENTS. Vérifier que tous les réactifs requis sont présents. S'assurer que chaque flacon de réactif est recouvert d'un septum. Si nécessaire, programmer une calibration. Pour de plus amples informations sur les demandes de calibration, se référer au chapitre 6 du Manuel Technique Programmer les analyses. Pour de plus amples informations sur la demande d'analyse d'échantillons de patients et de contrôles, ainsi que sur les procédures de fonctionnement en général, se référer au chapitre 5 du Manuel Technique Le volume minimum requis dans le godet-échantillon est calculé par l'appareil et imprimé sur le rapport Liste des demandes. Ne pas prélever plus de 9 répliques à partir du même godet-échantillon. Afin de minimiser les effets de l'évaporation, vérifier que le volume d'échantillon adéquat est présent dans le godet-échantillon avant d'effectuer le dosage. Echantillon prioritaire : 200 μl pour le premier dosage ARCHITECT Intact PTH, plus 150 μl pour chaque dosage ARCHITECT Intact PTH supplémentaire effectué sur le même godet-échantillon. Echantillon de routine analysé dans les 3 heures qui suivent le chargement à bord de l'analyseur : 200 μl pour le premier dosage ARCHITECT Intact PTH, plus 150 μl pour chaque dosage ARCHITECT Intact PTH supplémentaire effectué sur le même godet-échantillon. Echantillon de routine maintenu plus de 3 heures à bord de l'analyseur : un volume supplémentaire est requis. Pour de plus amples informations sur l'évaporation et les volumes des échantillons, se référer au chapitre 5 du Manuel Technique En cas d'utilisation de tubes primaires ou aliquots, utiliser la jauge échantillon afin de s'assurer que le volume d'échantillon de patient est suffisant. Préparer les calibrateurs et les contrôles. Homogénéiser les ARCHITECT Intact PTH Calibrators and Controls en les retournant délicatement avant l'emploi. Pour obtenir les volumes requis des ARCHITECT Intact PTH Calibrators and Controls, tenir les flacons à la verticale et distribuer 15 gouttes de chacun des calibrateurs ou 10 gouttes de chacun des contrôles dans les godets-échantillons respectifs. Charger les échantillons. Pour de plus amples informations sur le chargement des échantillons, se référer au chapitre 5 du Manuel Technique Appuyer sur la touche LANCER. Pour de plus amples informations sur les principes de fonctionnement, se référer au chapitre 3 du Manuel Technique Pour obtenir une performance optimale, il est important de suivre les procédures de maintenance de routine décrites au chapitre 9 du Manuel Technique Si le laboratoire requiert une maintenance plus fréquente, se conformer à ces exigences. Procédures de dilution des échantillons Les échantillons dont les concentrations en PTH intacte sont > 3000,0 pg/ml (protocole de routine) ou > 2500,0 pg/ml (protocole URGENT) seront annotés > pg/ml or > pg/ml et peuvent être dilués par la procédure de dilution manuelle. Les dilutions manuelles doivent être effectuées de la manière suivante : La dilution suggérée pour le dosage ARCHITECT Intact PTH est de 1/2. Ajouter 150 μl d'échantillon de patient à 150 μl d'architect i Multi-Assay Manual Diluent. Saisir le facteur de dilution dans l'écran Demande de patient ou Demande de contrôle. L'appareil utilisera ce facteur de dilution afin de calculer automatiquement la concentration de l'échantillon avant la dilution et d'enregistrer le résultat. Ce résultat (avant l'application du facteur de dilution) doit être supérieur à 1,0 pg/ml. Pour de plus amples informations sur les demandes de dilution, se référer au chapitre 5 du Manuel Technique Calibration Pour effectuer une calibration du dosage ARCHITECT Intact PTH, analyser les calibrateurs A, B, C, D, E et F en double. Un échantillon de chaque niveau d'architect Intact PTH Control doit être analysé pour évaluer la calibration du dosage. S'assurer que les valeurs des contrôles du dosage se situent dans les limites de concentration spécifiées dans la notice des contrôles. Les calibrateurs doivent être chargés en position prioritaire. Plage de calibration : Protocole de routine : 0,0 à 3 000,0 pg/ml Protocole URGENT : 0,0 à 2 500,0 pg/ml Lorsque la calibration du dosage ARCHITECT Intact PTH a été acceptée et mémorisée, tous les échantillons suivants peuvent être analysés sans effectuer de nouvelle calibration, sauf si : Un kit de réactifs portant un nouveau numéro de lot est utilisé. Les valeurs des contrôles se trouvent en dehors des limites spécifiées. Pour de plus amples informations sur la procédure de calibration d'un dosage, se référer au chapitre 6 du Manuel Technique PROCEDURES DU CONTROLE DE QUALITE Le contrôle de qualité recommandé pour le dosage ARCHITECT Intact PTH consiste à analyser un échantillon de chaque niveau de contrôle une fois toutes les 24 heures d'utilisation. Si les procédures du contrôle de qualité du laboratoire requièrent une utilisation plus fréquente des contrôles pour vérifier les résultats d'analyses, se conformer à ces exigences. Les valeurs des ARCHITECT Intact PTH Controls doivent se trouver dans les limites acceptables spécifiées dans la notice des contrôles. Si ce n'est pas le cas, les résultats des échantillons analysés dans la même série ne sont pas valables et ces échantillons devront être réanalysés. Une recalibration peut alors être nécessaire. Vérification des performances du dosage Pour de plus amples informations sur les protocoles de vérification des performances du dosage mentionnées dans la notice, se référer à l'annexe B du Manuel Technique Le dosage ARCHITECT Intact PTH appartient au groupe 1. Les ARCHITECT Intact PTH Calibrators peuvent être utilisés si MasterCheck n'est pas disponible. Se référer à l'annexe B du Manuel Technique RESULTATS Calculs Le dosage ARCHITECT Intact PTH utilise une méthode de traitement des données point par point pour créer une courbe de calibration. Annotations La rubrique "Annotations" peut contenir des informations sur certains résultats. Une description des annotations qui peuvent apparaître dans cette rubrique est fournie au chapitre 5 du Manuel Technique Plage de mesure (Domaine de mesure) La plage de mesure du dosage ARCHITECT Intact PTH est la suivante : - Protocole URGENT : 4,0 pg/ml à 2 500,0 pg/ml - Protocole de routine : 3,0 pg/ml à 3 000,0 pg/ml Les résultats situés en-dessous de la plage de mesure doivent être rendus comme étant < 4,0 pg/ml ou < 3,0 pg/ml, respectivement. 4

5 LIMITES DE LA METHODE Si les résultats de PTH intacte ne correspondent pas à l'observation clinique, il est recommandé d'effectuer un dosage supplémentaire afin de pouvoir confirmer le résultat. Pour établir un diagnostic, les résultats doivent être utilisés en association avec d'autres données, telles que les symptômes, les résultats d'autres analyses, les résultats de l'examen clinique, etc. Des anticorps hétérophiles présents dans le sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines des réactifs, interférant avec les dosages immunologiques in vitro. 6 Les échantillons de patients qui sont exposés de façon routinière aux animaux ou à des produits contenant du sérum d'animaux peuvent être sujets à cette interférence et fournir de ce fait des valeurs anormales. Pour établir un diagnostic, de plus amples informations peuvent être nécessaires. VALEURS ATTENDUES Il est recommandé à chaque laboratoire d'établir ses propres valeurs de référence, qui peuvent être spécifiques de la population en question, en raison de facteurs géographiques, alimentaires ou environnementaux. Une étude a été menée pour le dosage ARCHITECT Intact PTH afin d'établir les domaines de référence à l'aide d'échantillons plasmatiques provenant d'adultes apparemment sains. Les données de cette étude sont résumées dans le tableau suivant.* PTH intacte (pg/ml) 2,5 e 97,5 e n Moyenne percentile percentile Adultes sains ,6 15,0 68,3 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES Reproductibilité Le dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçu de manière à fournir une reproductibilité 9 % (CV total) pour le contrôle bas et 7 % (CV total) pour les contrôles moyen et haut. Une étude a été menée pour le dosage ARCHITECT Intact PTH conformément au protocole EP5-A du National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 7 Divers lots d'architect Intact PTH Controls ont été analysés à l'aide de 2 lots de réactifs, en double, 2 fois par jour, pendant 20 jours, dans un laboratoire et sur 2 analyseurs en utilisant le protocole de traitement d'échantillons URGENTS, ainsi que dans un deuxième laboratoire, également sur 2 analyseurs, mais en utilisant le protocole de routine. Une seconde étude de la reproductibilité a en outre été menée en analysant 2 lots de réactifs en répliques de 4 par série, 2 fois par jour, pendant 10 jours et sur un analyseur dans un troisième laboratoire à l'aide du protocole de traitement d'échantillons URGENTS, ainsi que sur un analyseur dans un quatrième laboratoire en utilisant le protocole de routine. Une seule courbe de calibration a été utilisée pour chaque lot de réactifs pendant toute l'étude. Les données de ces 2 études sont résumées dans les tableaux suivants.* Reproductibilité du dosage ARCHITECT Intact PTH avec protocole de traitement d'échantillons URGENTS Concentration Intra-série Total a moyenne Echantillon n (pg/ml) E.T. CV (%) E.T. CV (%) Contrôle bas 878 8,5 0,74 8,7 0,74 8,7 Contrôle moyen ,5 2,34 4,1 2,35 4,2 Contrôle haut ,9 8,62 4,1 8,62 4,1 Reproductibilité du dosage ARCHITECT Intact PTH avec protocole de routine Concentration Intra-série Total a moyenne Echantillon n (pg/ml) E.T. CV (%) E.T. CV (%) Contrôle bas ,7 0,65 6,1 0,69 6,4 Contrôle moyen ,6 2,28 3,3 2,31 3,3 Contrôle haut ,8 7,40 2,9 7,56 3,0 a La variabilité totale du dosage comprend la variabilité intra-série, inter-séries et inter-jours. Récupération Le dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçu de manière à fournir une récupération moyenne de 100 ± 10 %. Une étude a été menée en ajoutant des concentrations connues (0 ; 4,8 ; 24 ; 120 ; 600 pg/ml) de PTH intacte à 10 aliquots de plasma humain présentant des concentrations endogènes comprises entre 22,9 pg/ml et 162,8 pg/ml de PTH intacte. La concentration en PTH intacte et le pourcentage de récupération ont été calculés pour chaque échantillon. Le pourcentage de récupération du dosage ARCHITECT Intact PTH a fourni une moyenne de 101 %. Les données sont indicatives de la performance, mais les résultats obtenus peuvent varier d'un laboratoire à l'autre. Linéarité Le dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçu de manière à ce que la valeur observée sur des échantillons dilués corresponde à ± 10 % du résultat attendu pour la plage de dilution allant de 20 % à 80 %. Une étude du parallélisme de dilution a été effectuée à l'aide d'échantillons dont les valeurs de PTH intacte sans dilution étaient comprises entre 65,6 pg/ml et 2 257,0 pg/ml. Ces échantillons ont été dilués manuellement à l'aide de l' Multi-Assay Manual Diluent avec différents facteurs de dilution (0,2 à 0,8), de manière à obtenir entre 80 % et 20 % de la concentration endogène en PTH intacte. Les données de cette étude sont résumées dans les tableaux suivants.* Echantillon Valeurs observées (pg/ml) % de récupération moyen a Facteur de dilution 1 sans dilution 65,6 0,2 à 0,8 53,8 à 12, sans dilution 779,9 0,2 à 0,8 644,7 à 163, sans dilution 2 257,0 0,2 à 0, ,5 à 435,2 98 En outre, une étude de dilution a été effectuée à l'aide d'échantillons présentant différentes concentrations élevées et basses de PTH intacte comprises entre 19,1 et 2 038,8 pg/ml. L'échantillon de concentration basse a été utilisé pour diluer l'échantillon de concentration élevée à différentes concentrations (facteurs de dilution : 0,25 ; 0,50 et 0,75). Les données de cette étude sont résumées dans le tableau suivant.* a Echantillon Niveau de concentration sans dilution (pg/ml) Plage de concentration avec dilution (pg/ml) % de récupération moyen a 1 Bas 19,1 168,3 à 101 Haut 615,0 477,1 2 Bas 21,5 339,5 à 104 Haut 1 271,9 989,4 3 Bas 22,8 522,6 à 102 Haut 2 038, ,8 Pourcentage de récupération (%) = Concentration observée (pg/ml) x 100 Valeur attendue (pg/ml) % moyen de récupération = Moyenne du pourcentage de récupération de toutes les dilutions d'un échantillon Sensibilité fonctionnelle Le dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçu de manière à fournir une sensibilité fonctionnelle 5 pg/ml avec un CV total de 20 %. Une étude a été effectuée à l'aide d'échantillons humains avec des concentrations cibles de 3 pg/ml, 4 pg/ml et 5 pg/ml de PTH intacte. Ces échantillons ont été analysés en double sur 10 jours à l'aide de deux lots de réactifs sur deux analyseurs avec le protocole de traitement d'échantillons URGENTS ainsi que sur un autre analyseur en utilisant le protocole de routine. La sensibilité fonctionnelle a été déterminée comme étant 4 pg/ml* pour le protocole de traitement d'échantillons URGENTS et 3 pg/ml* pour le protocole de routine. 5

6 Sensibilité analytique Le dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçu de manière à fournir une sensibilité analytique 1 pg/ml. La sensibilité analytique est définie comme la concentration à deux écarts-types au-dessus du calibrateur A (0,0 pg/ml). Dans cette étude (n = 12 séries, 20 répliques du calibrateur A et 10 répliques du calibrateur B, analysées sur 3 appareils et 2 lots de réactifs), la sensibilité analytique a été calculée comme étant de 0,23 pg/ml* à l'aide du protocole de routine et de 0,31 pg/ml* pour le protocole d'analyse d'échantillons URGENTS avec un intervalle de confiance à 95 %. Spécificité La spécificité du dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçue de manière à ce que la réactivité croisée soit 0,01 % lors de l'analyse avec les composés de structure similaire énumérés dans le tableau ci-après. Une étude a été menée avec le dosage ARCHITECT Intact PTH sur la base du protocole EP7-A du NCCLS. 8 Des aliquots de l'architect Intact PTH Calibrator A ont été surchargés avec des substances susceptibles de provoquer une réactivité croisée aux concentrations indiquées avant de déterminer leur concentration en PTH intacte. Les données de cette étude sont résumées dans le tableau suivant.* Fragment de PTH Concentrations Réactivité croisée (%) a pg/ml 0, pg/ml 0, pg/ml 0, pg/ml 0, pg/ml 0,00 a Réactivité croisée (%) Valeur moyenne surchargée - Valeur moyenne non surchargée (pg/ml) = x 100 Concentration de la substance à réactivité croisée potentielle (pg/ml) Interférence Le dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçu de manière à présenter une interférence potentielle 10 % avec l'hémoglobine, la bilirubine, les triglycérides et les protéines, aux concentrations indiquées ci-dessous. L'interférence a été démontrée par une étude réalisée conformément au protocole EP7-A du NCCLS. 8 Aucune interférence significative n'a été observée étant donné que le pourcentage moyen de récupération est à ± 10 % de la valeur attendue. Les données de cette étude sont résumées dans le tableau suivant.* Substance potentiellement interférente Concentration Récupération moyenne (%) a Hémoglobine 500 mg/dl 102 Bilirubine 20 mg/dl 98 Triglycérides mg/dl 105 Protéines (basse conc.) 4 g/dl 106 Protéines (haute conc.) 9,5 g/dl 93 Protéines (haute conc.) (protocole de routine) 10,5 g/dl 94** a Valeur observée (pg/ml) Pourcentage de = x 100 récupération (%) Valeur attendue (pg/ml) % moyen de récupération = Moyenne du pourcentage de récupération de tous les échantillons analysés ** En cas d'utilisation du protocole de traitement d'échantillons URGENTS, une interférence peut être observée avec des concentrations élevées en protéines. Comparaison des méthodes Le dosage ARCHITECT Intact PTH a été conçu de manière à fournir un coefficient de corrélation 0,95 par rapport à un dosage de comparaison. Une étude a été menée avec le dosage ARCHITECT Intact PTH, dans laquelle une analyse de régression a été effectuée à l'aide des méthodes de Passing-Bablok et des moindres carrés. Les données de cette étude sont résumées dans le tableau suivant.* 6 ARCHITECT Intact PTH vs. dosage de comparaison Méthode de Ordonnée Coefficient régression n Pente à l'origine de corrélation Passing-Bablok a 199 1,02 0,61 0,99 Moindres carrés 199 0,98 9,00 a Méthode de régression linéaire sans hypothèses particulières concernant la distribution des échantillons et les erreurs de mesure. 9 Les concentrations des échantillons évalués étaient comprises entre 5,9 pg/ml et 1 277,0 pg/ml avec le dosage ARCHITECT Intact PTH et 7,5 pg/ml et 1 344,3 pg/ml avec le dosage de comparaison. Une autre étude a été effectuée pour comparer le dosage ARCHITECT Intact PTH avec un dosage disponible dans le commerce. Les 709 échantillons analysés dans le cadre de cette étude ont fourni un coefficient de corrélation de 0,99*. Les concentrations des échantillons étaient comprises entre 1,5 et 2 326,9 pg/ml pour le dosage ARCHITECT Intact PTH et entre 1,2 et 1 813,0 pg/ml avec le kit de diagnostic disponible dans le commerce. Les échantillons analysés dans l'étude comprenaient les catégories suivantes : adultes sains (285), séries de mesures intra-opératoires de parathyroïdectomie (32), hypoparathyroïdie (20), hyperparathyroïdie primaire (39), insuffisance rénale chronique (93), hypercalcémie dans le cadre d'affections malignes (40), concentrations de PTH randomisées (200). * Il s agit de données indicatives de la performance du dosage. Des variables telles que les différences au niveau de la taille d'échantillonnage et des populations d'échantillons peuvent affecter la corrélation du dosage, c'est pourquoi les résultats obtenus peuvent varier d'un laboratoire à l'autre. BIBLIOGRAPHIE 1. Goltzman D, Hendy GN. Parathyroid hormone. In: Becker KL, editor. Principles and Practice of Endocrinology and Metabolism, 3rd edition. Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins; 2001: US Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration, 29 CFR Part , Bloodborne pathogens. 3. US Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 5th. ed. Washington, DC: US Government Printing Office; January World Health Organization. Laboratory Biosafety Manual. Geneva: World Health Organization; Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections: Approved Guideline - Third Edition. CLSI Document M29-A3. 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ABBOTT Max-Planck-Ring Wiesbaden Germany Produit par Biokit S.A., Barcelona, Spain pour Abbott Diagnostics Division Distribué par Abbott Laboratories Abbott Park, IL USA et ABBOTT, Wiesbaden, Germany ABBOTT Diagnostics Division Novembre , 2008 Abbott Laboratories