REPROGRAMMATION ET CELLULES SOUCHES PLURIPOTENTES INDUITES (IPS)
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1 REPROGRAMMATION ET CELLULES SOUCHES PLURIPOTENTES INDUITES (IPS) Pr John DE VOS Département d Ingénerie Cellulaire et Tissulaire INSERM IRMB Hôpital St Eloi - CHU de Montpellier
2 STABILITÉ CELLULAIRE
3 h5p://bodybrowser.googlelabs.com
4 h5p://bodybrowser.googlelabs.com
5 h5p://bodybrowser.googlelabs.com
6 h5p://bodybrowser.googlelabs.com
7 h5p://bodybrowser.googlelabs.com
8 h5p://bodybrowser.googlelabs.com
9 Une grande stabilité dans le temps!
10 Organismes mulgcellulaires o Les Gssus sont très stables
11 LA REPROGRAMMATION
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13 DifférenciaGon: irréversible? o Diagramme de Waddington Waddington, C. H., 1956, Principles of Embryology, op. cit., p. 412
14 DifférenciaGon: irréversible? o Diagramme de Waddington o Réseaux de facteurs de transcripgon Waddington, C. H., 1956, Principles of Embryology, op. cit., p. 412
15 DifférenciaGon: irréversible? o Diagramme de Waddington o Réseaux de facteurs de transcripgon o MéthylaGon de l ADN, ModificaGon des histones (Epigénome) o mirna, lnc RNA Waddington, C. H., 1956, Principles of Embryology, op. cit., p. 412
16 DifférenciaGon: irréversible? o La différenciagon est irréversible («locked- in») Fibroblaste Lympho B Macrophage Pancreas Exo Pancreas Endo Neuron Waddington, C. H., 1956, Principles of Embryology, op. cit., p. 412
17 DifférenciaGon: irréversible? o Peut- on réverser la différenciagon??? Fibroblaste Lympho B Macrophage Pancreas Exo Pancreas Endo Neuron Waddington, C. H., 1956, Principles of Embryology, op. cit., p. 412
18 CLONAGES (années )
19 Réversibilité? Fibroblaste Lympho B Macrophage Pancreas Exo Pancreas Endo Neuron o TransplantaGon nucléaire dans des oeufs de batraciens : Briggs and King Gurdon JB & Byrne JA PNAS 2003 vol. 100 (14) pp
20 Clonage Cellule différenciée de batracien Oeuf de batracien
21 o John Gurdon : prix Nobel médecine 2012
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24 Clonage chez le mammifère Cellule mammaire Lympho B Macrophage Pancreas Exo Pancreas Endo Neuron Dolly Nature, I Wilmut et al vol. 385 (6619) pp
25 Clonage Cellule mammaire Lympho B Macrophage Pancreas Exo Pancreas Endo Neuron Nature, I Wilmut et al vol. 385 (6619) pp
26 Clonages Clonage reproductif 30 ans Lignée ES personnalisée Clonage thérapeutique 7 ans
27 L expérience coréenne o 16 jeunes femmes volontaires (?) o 242 oocytes (2-3 cycles par femme) o 30 blastocytes par transfert nucléaire quand «autoclonage» (cellules du cumulus) o 20 masses cellulaires internes o 1 lignée ES o = pas de succès de transfert nucléaire hétérologue Woo Suk Hwang
28 L expérience coréenne o 16 jeunes femmes volontaires (?) o 242 oocytes (2-3 cycles par femme) o 30 blastocytes par transfert nucléaire quand «autoclonage» (cellules du cumulus) o 20 masses cellulaires internes o 1 lignée ES CLOWNAGE! o = pas de succès de transfert nucléaire hétérologue Parthénogénèse!!!! Woo Suk Hwang
29 Cell Stem Cell 2007 vol. 1:346-52
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33 Autres mammifères o o o o o o o o Souris Vache Cochon Chat Lapin Mulet Chien Etc. o homme?
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35 LES ips ( )
36 ReprogrammaGon par facteurs définis? = réduire la complexité???? Lympho B Macrophage Pancreas Exo Fibroblaste Pancreas Endo Neuron
37 Induced pluripotent stem cells (ips) OCT4 SOX2 cmyc KLF4 peau 2006 S Yamanaka Nobel Price 2012 Sherbrooke - June 2015 K. Takahashi and S. Yamanaka. Cell, 126:663, 2006.
38 Induced pluripotent stem cells (ips) OCT4 SOX2 cmyc KLF4 Sang peau coeur neurones 2006 S Yamanaka Nobel Price 2012 Sherbrooke - June 2015 K. Takahashi and S. Yamanaka. Cell, 126:663, 2006.
39 Autres techniques de reprogrammagon o Autres combinaisons de gènes o ReprogrammaGon sans vecteur intégragfs o virus non intégragfs (EBV) o virus de Sendaï o ARN (Warren et al., Cell Stem Cell 2010) o Protéines + acgvagon du système immunitaire inné (Lee et al. Cell 151: 547, 2012) o ReprogrammaGon «100% chimique» (Hou et al. Science 341: 651) (souris seulement) o ReprogrammaGon avec une efficacité proche de 100% (KO de MBD3) (Gafni et al. Nature 2013)
40 Résultats reproducgbles : reproduits dans le laboratoire Fibroblastes cutanés ips Cardiomyocytes Neuroblastes Hepatocytes Leucocytes
41 PEAU è COEUR J Wright The alchimist, In Search of the Philosophers' Stone
42 Fibroblastes cutanés ips Tératome dans souris immunodéficiente (NSG)
43 Fibres musculaires Fibroblastes cutanés ips Cartilage Tube digestif Tératome dans souris immunodéficiente (NSG)
44 La souris ips : court- circuiter la reproducgon sexuée Blastocyste tétraploïde (4n) ips Nature 461 : 91, 2009
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47 Applications des ips
48 ApplicaGons 1. ModélisaGon in vitro du développement humain normal et des maladies génégques 2. Une source illimité de cellules pour une médecine régénéragve autologue 3. Un ougl pour rajeunir des cellules âgées et/ou sénescentes Sherbrooke - June 2015
49 Sherbrooke - June 2015
50 LIMITES
51 Mutagénèse insergonnelle o Technique de référence : rétrovirus murin ou lengvirus o Nouvelles techniques : o o o mrna virus EBV sendaï virus Science 2008 vol. 321 : 699
52 Obtenir des cellules différenciées pergnentes o NB : problémagque partagée avec les ES Blood 2009 vol. 114: 1506 wikipedia
53 ips = ES? o Anomalies épigénégques o mémoire épigénégque de la cellule de départ o aberragon épigénégques o Anomalies génégques o mutagénèse insergonnelle o autres anomalies génégques o N est pas retrouvé par tous (sauf mutagénèse insergonnelle!): dépend du protocole de reprogrammagon? de la cellule de départ? Q. Bai, R. Desprat, B. Klein, J.- M. Lemaitre, and J. De Vos, Embryonic stem cells or induced pluripotent stem cells? A DNA integrity perspecgve., Curr Gene Ther, vol. 13, pp , Apr
54 REPROGRAMMATION PAR TRANSDIFFÉRENTIATION
55 TransdifférenciaGon 19 TF => 3 Lympho B Macrophage Pancreas Exo Ascl 1, Brn2, Myt 1 l Fibroblaste Pancreas Endo Neuron Nature, Vierbuchen et al Feb 25;463(7284):
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