Tutorat Santé de Caen. Biologie moléculaire

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1 Tutorat Santé de Caen Biologie moléculaire

2 Structure des acides nucléiques Liaison ester entre le C5 de l ose et le phosphate Liaison N-Osidique entre le C1 de l ose et la base azotée NucléoTide = Phosphate + ose + base

3 Structure des acides nucléiques Bases Nucléoside NT de l ADN NT de l ARN Unité nucléotidique Adénine (désoxy-) adénosine damp, dadp, datp AMP, ADP, ATP (d) adénylate Guanine (désoxy-) guanosine dgmp, dgdp, dgtp GMP, GDP, GTP (d) guanylate Cytosine (désoxy-) cytidine dcmp, dcdp, dctp CMP, CDP, CTP (d) cytidylate Thymine désoxythymin e dtmp, dtdp, dttp NON d-thymidylate Uracile uridine NON UMP, UDP, UTP urydilate Pour former un acide nucléique, les nucléotides sont condensés les uns sur les autres avec des liaisons phospho-diester entre le carbone 3 d un premier nucléotide et le carbone 5 du nucléotide suivant. Ces liaisons définissent un sens à la molécule : le début est le nucléotide dont le phosphate 5 n est lié à aucun autre et la fin correspond au nucléotide dont la fonction alcool en 3 n est pas estérifiée.

4 Structure des acides nucléiques L orientation du brin d ADN se fait du sens 5 3 Il existe toujours un OH libre en 3 permettant ainsi d ajouter de nouveaux nucléotides. La double hélice de l ADN est composée de deux brins antiparallèles

5 Etude des acides nucléiques Les acides nucléiques absorbent la lumière à une longueur d onde de 260nm. La dénaturation par la chaleur est réversible mais au bout d une certaine température elle devient irréversible. Il y a une relation proportionnelle entre la T de fusion et la proportion de CG. Car la liaison CG comporte 3 liaisons hydrogènes donc demande plus d énergie pour être cassées. Sur une électrophorèse, les fragments d ADN migrent vers l anode (+) car ils sont chargés négativement. La distance de migration des fragments est inversement proportionnelle à leur taille (Plus c est gros, moins ça bouge!!! ^^) CGH array : permet de repérer les macrolésions.

6 Méthode de SANGER Il faut lire ces électrophorèses en commençant par le bas du champ, ce qui correspond à l extrémité 5. Attention : la séquence qu on lit sut l électrophorèse correspond au complémentaire du brin recherché

7 Rappels sur les enzymes Nucléase : Il existe deux types de nucléases : exo et endo Exonucléase : Elle coupe aux extrémités de l ADN Endonucléase : - Elle coupe à l intérieur de l ADN Spécifique : Ce sont les enzymes de restriction qui coupent au niveau des palindromes Non spécifique : Certaines coupent au niveau de fragments non protégés par des protéines ou d autres coupent les fragments simple brin. Ligase : Elle relie deux fragments d ADN en présence d ATP Polymérase : Elle ajoute des nucléotides à l extrémité 3

8 Rappel sur enzyme de restriction Une enzyme de restriction est une endonucléase qui reconnaît une séquence de base spécifique le plus souvent palindromique sur un ADN double brin et elle catalyse l hydrolyse d une liaison phosphodiester sur chaque brin en un point précis situé soit dans le palindrome soit quelques bases plus loin. Elle forme ainsi des extrémités franches ou cohésives.

9 La polymérase : objet d angoisse des PACES Elle permet la copie d une molecule d ADN ou d ARN pre-existante La sequence exacte est dictee par les lois de l appariement des bases Synthese dans le sens 5 3!!! Avec l utilisation : D une matrice (ADN ou ARN) D une amorce (une dizaine de NT) De substrats = Nucleotides tri-phosphate Incorpore un nucleotide mono-phosphate au niveau de l extremite 3 OH libre du NT precedent. ATTENTION : La synthèse s effectue toujours de 5 3 MAIS la polymérase lit la matrice de 3 5

10 Opéron lactose L opéron lactose est un modèle d adaptation du métabolisme à l environnement

11 Opéron lactose Lac Z : code pour le gène de la galactosidase (métabolise le lactose) Lac Y : code pour une perméase Lac A : code pour une transacétylase Lac I : code pour un répresseur (tétramère) qui a une forte affinité sur l opérateur et bloque le démarrage de l ARN polymérase Promoteur : contient un site de fixation du complexe CAPAMPc CAP-AMPc se fixe derrière la polymérase et favorise le recrutement de la polymérase donc favorise la transcription de la galactosidase. L inducteur est l allo-lactose qui est produit galactosidase en faible taux à partir du lactose. par la

12 Opéron lactose Sans lactose : le répresseur se fixe sur l opérateur et bloque la transcription pas de galactosidase

13 Opéron lactose Avec glucose et lactose : Le lactose empêche la synthèse du répresseur mais le glucose permet de garder un taux d AMPc très bas, il y a donc quand même une inhibition du répresseur.

14 Opéron lactose Avec lactose mais sans glucose : répresseur inactivé synthèse de galactosidase. De plus le taux d AMPc est élevé, donc le complexe CAP-AMPc va se fixer au promoteur et recruter la polymérase synthèse de galactosidase.

15 Vidéo you tube

16 BONNES «VACANCES» BON COURAGE!!!!! ;D Jade Chennevière et Charlotte Saint

17

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